環(huán)境管理_gb18466-2001醫(yī)療機構(gòu)污水排放要求

醫(yī)療機構(gòu)污水排放要求GB 184662001中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局20011022批準20020301實施前言本標準中第4章、51、54、55條為強制執(zhí)行條文，其他為非強制執(zhí)行條文。本標準是對GBJ 481983醫(yī)療機構(gòu)污水排放標準(試行)的修訂。為了貫徹執(zhí)行中華人民共和國傳染病防治法，控制醫(yī)療機構(gòu)污水對環(huán)境的污染，預(yù)防、控制和消除傳染病的發(fā)生和流行，保障人體健康，特此對醫(yī)療機構(gòu)污水排放標準(試行)進行修訂。本標準對GBJ 481983的適用范圍、標準值、衛(wèi)生要求和檢驗方法作了較大修改，增加了標準監(jiān)督執(zhí)行內(nèi)容。本標準從實施之日起，代替GBJ 481983，同時代替GB 89781996污水綜合排放標準中表2序號25和26以及表4中序號54和55中的標準值。本標準從2002年3月1日起實施。本標準的附錄A、B、C、D、E、F、G都是標準的附錄。本標準由中華人民共和國衛(wèi)生部提出。本標準負責起草單位；中國預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院環(huán)境衛(wèi)生監(jiān)測所；參加起草單位：江蘇省衛(wèi)生監(jiān)督所。本標準主要起草人：潘長慶、李霞、張漱潔、周淑玉、陳昌杰。本標準由衛(wèi)生部委托中國預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院環(huán)境衛(wèi)生監(jiān)測所負責解釋。1 范圍11 本標準規(guī)定了醫(yī)療機構(gòu)污水和污泥的排放標準。12 本標準適用于下列醫(yī)療機構(gòu)：1)污水直接排入江、河、湖、海、池塘、水庫、溪、溝等地表水體的醫(yī)療機構(gòu)。2)污水直接排入終端無污水處理廠的下水管道的醫(yī)療機構(gòu)。3)污水無組織排放的醫(yī)療機構(gòu)。4)所有的傳染病和結(jié)核病醫(yī)療機構(gòu)。2 引用標準下列標準所包含的條文，通過在本標準中引用而構(gòu)成為本標準的條文。本標準出版時，所示版本均為有效。所有標準都會被修訂，使用本標準的各方應(yīng)探討使用下列標準最新版本的可能性。GB 38381988 地面水環(huán)境質(zhì)量標準GB 50841992 農(nóng)田灌溉水質(zhì)標準GB 57491985 生活飲用水衛(wèi)生標準GB 79591987 糞便無害化衛(wèi)生標準GB 116071989 魚業(yè)水質(zhì)標準GB 129411991 景觀娛樂用水水質(zhì)標準GBT 148481993 地下水質(zhì)量標準3 定義本標準采用下列定義。31 醫(yī)療機構(gòu) medical organization指依據(jù)醫(yī)療機構(gòu)管理條例及醫(yī)療機構(gòu)管理條例實施細則的規(guī)定，經(jīng)登記取得醫(yī)療機構(gòu)執(zhí)業(yè)許可證的機構(gòu)。32 醫(yī)療機構(gòu)污水 medical organization sewage指醫(yī)療機構(gòu)門診、病房、手術(shù)室、治療室、各類檢驗室、病理解剖室、放射室、洗衣房、太平間等處排出的醫(yī)療、生活及糞便污水。33 醫(yī)療機構(gòu)污泥 medical organization silt指醫(yī)療機構(gòu)污水處理構(gòu)筑物中的沉淀物和被攔截的漂浮物。4 標準值經(jīng)處理和消毒后的醫(yī)療機構(gòu)污水以及經(jīng)無害化處理后的污泥，應(yīng)該符合表1和表2的規(guī)定。表1 醫(yī)療機構(gòu)污水排放標準值表2 醫(yī)療機構(gòu)污泥排放標準值5 衛(wèi)生要求51 醫(yī)療機構(gòu)污水必須進行處理和消毒。醫(yī)療機構(gòu)污水處理構(gòu)筑物中的污泥必須經(jīng)過無害化處理。未經(jīng)消毒或無害化處理的污水、污泥，不準任意排放或用做農(nóng)肥。52 新建、擴建、改建醫(yī)療機構(gòu)應(yīng)同時進行污水處理設(shè)施建設(shè)，其污水及污泥排放應(yīng)符合表1和表2的規(guī)定。53 醫(yī)療機構(gòu)污水和污泥經(jīng)處理和消毒后排放時，所含有害物質(zhì)的含量還應(yīng)根據(jù)接納水體和糞便無害化衛(wèi)生標準的功能要求，符合GB 5749、GB 3838、GB 5084、GBll607、GB 7959、GBl2941、GBT 14848中的要求。54 嚴禁各級各類醫(yī)療機構(gòu)將污水、污泥排入生活飲用水水源衛(wèi)生防護地帶內(nèi)。55 嚴禁各級各類醫(yī)療機構(gòu)采用滲井、滲坑排放污水、污泥。56 醫(yī)療機構(gòu)污水處理構(gòu)筑物的位置，宜設(shè)在醫(yī)療機構(gòu)建筑物當?shù)叵募咀钚☆l率風向的上風側(cè)，與周圍建筑物之間宜設(shè)綠化防護地帶。57 醫(yī)療機構(gòu)污水處理構(gòu)筑物的設(shè)計，應(yīng)滿足下列要求：1)確保污水、污泥符合本排放標準；2)采取防腐蝕、防滲漏措施；3)備有發(fā)生故障時的臨時消毒設(shè)施；4)使用液氯消毒，必須備有氯泄漏等事故發(fā)生時的應(yīng)急處理設(shè)施，嚴禁直接以鋼瓶向污水中投加氯氣；5)安全耐用，操作方便，有利于操作人員的勞動保護。58 醫(yī)療機構(gòu)行政區(qū)和職工生活區(qū)的污水，應(yīng)與病區(qū)的污水分流。6 檢測與監(jiān)測61 醫(yī)療機構(gòu)污水、污泥處理的日常檢測由各醫(yī)療機構(gòu)負責。檢測項目和頻次應(yīng)符合以下要求：611 醫(yī)療機構(gòu)污水中總余氯：經(jīng)過連續(xù)處理裝置的污水，每日至少檢測2次；經(jīng)過間隙式處理裝置的污水，每次排放前均應(yīng)檢測。612 醫(yī)療機構(gòu)污水中糞大腸菌群：每月檢測不得少于1次。613 醫(yī)療機構(gòu)污水中致病菌：每年檢測不得少于2次。主要檢測沙門氏菌和志賀氏菌，結(jié)核病醫(yī)療機構(gòu)檢測結(jié)核桿菌。614 醫(yī)療機構(gòu)污泥的衛(wèi)生指標：每批污泥排放前，均應(yīng)按表2要求的項目檢驗。62 各級衛(wèi)生防疫機構(gòu)，應(yīng)對轄區(qū)內(nèi)醫(yī)療機構(gòu)污水、污泥處理情況進行經(jīng)常性衛(wèi)生監(jiān)測。并做好轄區(qū)內(nèi)新建、改建、擴建醫(yī)療機構(gòu)污水處理設(shè)施的預(yù)防性衛(wèi)生監(jiān)督工作。621 監(jiān)測頻次：傳染病、結(jié)核病醫(yī)療機構(gòu)污水每年監(jiān)測至少6次；其他醫(yī)療機構(gòu)污水每年監(jiān)測至少4次。醫(yī)療機構(gòu)污泥每次排放前監(jiān)測。622 污水監(jiān)測項目：總余氯、糞大腸菌群、腸道致病菌；結(jié)核病醫(yī)療機構(gòu)增測結(jié)核桿菌。623 污泥監(jiān)測項目：蛔蟲卵死亡率、糞大腸菌值；傳染病醫(yī)療機構(gòu)增測腸道致病菌；結(jié)核病醫(yī)療機構(gòu)增測結(jié)核桿菌。7 檢驗方法本標準檢驗方法按附錄A、B、C、D、E、F、G執(zhí)行。附 錄 A(標準的附錄)醫(yī)療機構(gòu)污水中總余氯的檢測方法A1 儀器和設(shè)備A11 天平。A12 比色管。A13 量筒。A2 試劑鄰聯(lián)甲苯胺溶液：稱取1 g鄰聯(lián)甲苯胺，溶于5 mL 20(容積容積)鹽酸中，將其調(diào)成糊狀，加入150200mL蒸餾水使其完全溶解，置于量筒中補加蒸餾水至505 mL，最后加入20鹽酸495 mL，儲于棕色瓶中。A3 測定步驟A31 被測樣品溫度宜為1520，如低于此溫度，應(yīng)先將樣品浸入溫水中使其溫度升至1520后，再測定數(shù)值。A32 在盛有5 mL樣品的比色管內(nèi)，滴加鄰聯(lián)甲苯胺溶液23滴，混勻。A33 將樣品置于黑暗處，靜置15 min后，與永久性余氯標準比色溶液比色測定，其結(jié)果為樣品總余氯含量(比色時，眼睛從管口向下觀察或由前面觀察)。A34 如余氯濃度很高時，會產(chǎn)生桔黃色；當樣品堿度過高以及余氯濃度低時，可能產(chǎn)生淡藍綠色或淡藍色。此時，可再加入1 mL1：2鹽酸或1 mL鄰聯(lián)甲苯胺溶液，即可產(chǎn)生正常的淡黃色，再進行測定。A4 檢驗結(jié)果報告檢驗結(jié)果以每升污水中含總余氯的毫克數(shù)(mgL)報告。附 錄 B(標準的附錄)醫(yī)療機構(gòu)污水中糞大腸菌群的檢驗方法B1 儀器和設(shè)備B11 高壓蒸汽滅菌器。B12 干燥滅菌箱。B13 培養(yǎng)箱。B14 電爐。B15 天平。B16 滅菌平皿。B17 滅菌刻度吸管。B2 培養(yǎng)基和試劑B21 乳糖膽鹽培養(yǎng)液B211 成分蛋白胨20g豬膽鹽(或牛、羊膽鹽)5g乳糖5g04溴甲酚紫水溶液25 mL蒸餾水1 000mLB212 制法將蛋白胨、膽鹽及乳糖溶解于1 000mL蒸餾水中，調(diào)整pH為7274。加入指示劑，充分混勻，分裝于有倒管的試管中。置于高壓蒸汽滅菌器中，于115滅菌20min。貯存于冷暗處備用。B22 伊紅美蘭培養(yǎng)基B221 成分蛋白胨 10g乳 糖 10g磷酸氫二鉀 2 g瓊 脂 2030 g蒸餾水1 000mL2伊紅水溶液20mL05美蘭水溶液 13mLB222 儲備培養(yǎng)基的制法B2221 先將瓊脂加到900mL蒸餾水中，加熱溶解，然后加入磷酸氫二鉀及蛋白胨，混勻使溶解，再以蒸餾水補足至1 000mL，調(diào)整pH為7274。B2222 趁熱用脫脂棉或絨布過濾，再加入乳糖，混勻后，定量分裝于燒瓶內(nèi)，置于高壓蒸汽滅菌器中，以115滅菌20min。貯存于冷暗處備用。B223 平皿培養(yǎng)基的制法B2231 將已制備的培養(yǎng)基加熱融化。B2232 根據(jù)燒瓶內(nèi)培養(yǎng)基的容量，用滅菌吸管按比例吸取一定量的已滅菌的2伊紅水溶液及一定量已滅菌的5美蘭水溶液加入已融化的儲備培養(yǎng)基內(nèi)，并充分混勻(防止產(chǎn)生氣泡)。立即將此種培養(yǎng)基適量傾入已滅菌的空子皿內(nèi)，待其冷凝后，備用。B23 乳糖蛋白胨培養(yǎng)液B231 成分蛋白胨10g牛肉膏3g乳糖5 g氯化鈉5g16溴甲酚紫乙醇溶液1 mL蒸餾水1 000mLB232 制法將蛋白胨、牛肉膏、乳糖及氯化鈉加熱溶解于1 000 mL蒸餾水中，調(diào)整pH為7274。加入16溴甲酚紫乙醇溶液1 mL，充分混勻，分裝于有倒管的試管中。置于高壓蒸汽滅菌器中，以 115滅菌20min。貯存于冷暗處備用。B24 革蘭氏染色液B241 結(jié)晶紫染色液結(jié)晶紫 1 g95乙醇 20 mL1草酸銨水溶液80mL將結(jié)晶紫溶于乙醇中，然后與草酸銨水溶液混合。B242 革蘭氏碘液碘1 g碘化鉀2 g蒸餾水300mL將碘與碘化鉀先進行混合，加入蒸餾水少許，充分振搖，待完全溶解，再加入蒸餾水至300 mL。B243 脫色液：95乙醇。B244 沙黃復(fù)染液沙黃025 g95乙醇10mL蒸餾水90 mL將沙黃溶于乙醇中，然后用蒸餾水稀釋。B25 染色法B251 將涂片在火焰上固定，滴加結(jié)晶紫染色液，染色1 min，水洗。B252 滴加革蘭氏碘液，作用1 min，水洗。B253 滴加95乙醇脫色，約30 s，水洗。B254 滴加復(fù)染液，復(fù)染1 min，水洗，待干，鏡檢。B26 染色結(jié)果革蘭氏陽性菌呈紫色，革蘭氏陰性菌呈紅色。注：亦可用1：10稀釋的石炭酸復(fù)紅染色液作復(fù)染液，復(fù)染時間為10s。B3 檢驗程序B31 采樣方法用采水器或其他滅菌容器采取污水樣1 000mL，放入滅菌瓶內(nèi)，如果是經(jīng)過加氯消毒處理的污水，需加15硫代硫酸鈉溶液5 mL中和余氯。B32 多管發(fā)酵法B321 初發(fā)酵實驗：將原液作1：10、1：100、1：1 000稀釋。依次吸取l：1 000、1：100、1：10及原液各1 mL，分別注入裝有10 mL乳糖膽鹽培養(yǎng)液內(nèi)裝小發(fā)酵管的試管中，將已接種的四支發(fā)酵管置于44恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24 h。注：接種量為10mL時，可用與接種量相等的雙料乳糖膽鹽培養(yǎng)液。B322 平板分離：取經(jīng)培養(yǎng)24 h后產(chǎn)酸產(chǎn)氣，以及只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣的發(fā)酵管中培養(yǎng)液，分別劃線接種伊紅美藍培養(yǎng)基上，置37恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)1824 h，挑選符合下列特征的菌落，進行涂片，革蘭氏染色，鏡檢。伊紅美藍培養(yǎng)基上的菌落色澤：深紫黑色，具有金屬光澤的菌落；紫黑色，不帶或略帶金屬光澤的菌落；淡紫紅色，中心色較深的菌落。B323 復(fù)發(fā)酵實驗：上述涂片鏡檢的菌落，如為革蘭氏陰性無芽孢桿菌，再挑取該菌落接種于乳糖發(fā)酵管中(內(nèi)有倒管)，置于44恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，有產(chǎn)酸產(chǎn)氣者即證實有糞大腸菌群存在，按陽性管數(shù)查表。視其水質(zhì)污染程度，決定稀釋度和接種量。例如，污染較輕可接種總量1111 mL，如污染嚴重可接種總量0111 1 mL。表B1 糞大腸菌群檢索表(接種總量1111 mL)B4 檢驗結(jié)果報告接種水樣總量同表B1，檢驗結(jié)果可直接查表，得出糞大腸菌群數(shù)(MPN值)；如接種水樣總量比表1大10倍(1111 mL)，檢驗結(jié)果為查表所得MPN值除以10。附 錄 C(標準的附錄)醫(yī)療機構(gòu)污泥中糞大腸菌值的檢驗方法C1 儀器和設(shè)備C11 高壓蒸汽滅菌器。C12 干燥滅菌箱。C13 培養(yǎng)箱：37。C14 恒溫水浴箱。C15 電爐。C16 天平。C17 滅菌平皿。C18 滅菌刻度吸管。C2 培養(yǎng)基和試劑C21 乳糖膽鹽培養(yǎng)基：同附錄B21。C22 伊紅美蘭培養(yǎng)基：同附錄B22。C23 乳糖蛋白胨培養(yǎng)液：同附錄B23。C24 革蘭氏染色液，同附錄B24。C3 檢驗程序C31 初發(fā)酵試驗：按圖C1所示將污泥稀釋，分別將污泥樣品接種于盛有10mL乳糖膽鹽培養(yǎng)液的試管中(內(nèi)有小倒管)。再將已接種的四支試管置于44恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)24h。圖C1 污泥的稀釋和接種示意圖C32 平板分離：經(jīng)24h培養(yǎng)后，將產(chǎn)酸產(chǎn)氣及只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣的發(fā)酵管培養(yǎng)液分別劃線接種于伊紅美蘭培養(yǎng)基上。置于37恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1824h。挑選符合下列特征的菌落，進行涂片，革蘭氏染色，鏡檢。伊紅美蘭培養(yǎng)基上的菌落色澤：深紫黑色，具有金屬光澤的菌落；紫黑色，不帶或略帶金屬光澤的菌落；淡紫紅色，中心色較深的菌落。C33 復(fù)發(fā)酵試驗：上述涂片鏡檢的菌落如為革蘭氏陰性無芽孢桿菌，則挑取該菌落的另一部分再接種于內(nèi)有倒管的乳糖發(fā)酵管中，置于44恒溫箱培養(yǎng)24h。有產(chǎn)酸產(chǎn)氣者即證實有糞大腸菌群存在。表C2 糞大腸菌值檢索表(接種總量1111g)C4 檢驗結(jié)果報告根據(jù)經(jīng)證實的糞大腸菌群陽性管數(shù)，按表C2報告糞大腸菌值。附 錄 D(標準的附錄)醫(yī)療機構(gòu)污水及污泥中沙門氏菌的檢驗D1 儀器和設(shè)備D11 高壓蒸汽滅菌器。D12 干燥滅菌箱。D13 培養(yǎng)箱。D14 恒溫水浴箱。D15 電爐。D16 天平。D17 滅菌平皿。D18 滅菌刻度吸管。D2 培養(yǎng)基和試劑D21 亞硒酸鹽(SF)增菌液D211 成分胰蛋白胨(或多價胨) 10g磷酸氫二鈉(Na2HPO4)16g磷酸二氫鈉(NaH2PO4)25g乳 糖 4g亞硒酸氫鈉 4 g蒸餾水 1 000mLD212 制法除亞硒酸氫鈉外，將以上各成分放于蒸餾水中，加熱溶化。再加入亞硒酸氫鈉，待完全溶解后，調(diào)整pH為7071。分裝，于流通蒸汽滅菌器中滅菌15min備用。D22 SS培養(yǎng)基D221 基礎(chǔ)培養(yǎng)基D2211 成分牛肉膏5 g示胨5 g三號膽鹽35 g瓊脂17 g蒸餾水1 000mLD2212 制法將牛肉膏、示胨和膽鹽溶解于400mL蒸餾水中，將瓊脂加入600 mL蒸餾水中，煮沸使其溶解，再將二者混合，121高壓滅菌15min，保存?zhèn)溆?。D222 完全培養(yǎng)基D2221 成分基礎(chǔ)培養(yǎng)基1 000 mL乳糖10 g檸檬酸鈉85 g硫代硫酸鈉85 g10檸檬酸鐵溶液10mL1中性紅溶液 25 mL01煌綠溶液033 mLD2222 制法加熱溶化基礎(chǔ)培養(yǎng)基，按比例加入上述染色液以外的各成分，充分混合均勻，調(diào)整pH為70，加入中性紅和煌綠溶液，傾注平板。注：制好的培養(yǎng)基宜當日使用，或保存于冰箱內(nèi)于18h內(nèi)使用?；途G溶液配好后應(yīng)在10天以內(nèi)使用。D23 亞硫酸鉍瓊脂(BS) D231 成分蛋白胨10g牛肉膏5 g葡萄糖5 g硫酸亞鐵03 g磷酸氫二鈉4 g煌綠0025 g檸檬酸鉍銨2 g亞硫酸鈉6 g瓊脂1820 g蒸餾水1 000 mLD232 制法將前面5種成分溶解于300mL蒸餾水中；將檸檬酸鉍銨和亞硫酸鈉另用50mL蒸餾水溶解；將瓊脂于600 mL蒸餾水中煮沸溶解，冷至80。將前三種溶液混合，補充蒸餾水至1 000mL，調(diào)整pH為75，加05煌綠水溶液5 mL，搖勻。冷至5055，傾注平皿。注：此培養(yǎng)基不需高壓滅菌。應(yīng)在臨用前天制備，貯存于室溫暗處，超過 48 h 不宜使用。D24 三糖鐵瓊脂(TS)D241 成分蛋白胨20g牛肉膏5 g乳糖10g蔗糖10g葡萄糖1 g氯化鈉5 g硫酸亞鐵銨02 g硫代硫酸鈉02g瓊脂12 g酚紅0025 g蒸餾水1 000 mLD242 制法將除瓊脂和酚紅以外的各成分溶解于蒸餾水中，調(diào)pH為74。加入瓊脂，加熱煮沸，再加A02酚紅水溶液125 mL，搖勻。分裝試管，裝量宜多些，以便得到較高的底層。121高壓滅菌15 min。放置高層斜面?zhèn)溆谩243 沙門氏菌屬診斷血清D3 檢測程序D31 樣品處理和增菌污水：取250mL污水，用無菌紗布或脫脂棉進行初濾，然后再用濾膜進行抽濾。將初濾后的紗布或脫脂棉和濾膜，放入到盛有100mL左右的單倍SF增菌液的三角燒瓶中進行增菌培養(yǎng)。置于37恒溫培養(yǎng)箱，培養(yǎng)24 h。污泥：用滅菌匙稱取污泥30g，放入滅菌容器內(nèi)，加入300mL滅菌水，充分混勻制成1：10混懸液。吸取上述1：10混懸液100mL，加于100mL雙料亞硒酸鹽(SF)增菌液內(nèi)，置于37恒溫培養(yǎng)箱，培養(yǎng)24 h。D32 平板分離取上述增菌培養(yǎng)液，分別接種SS平板和BS平板，置于37恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)2448h。觀察各平板上生長的菌落特征。D33 挑選菌落挑取在SS平板上呈無色透明或中間有黑心，直徑12 mm的菌落；挑取在BS平板上呈黑色有金屬光澤的菌落或灰綠色的菌落。每個平板最少挑取5個以上疑腸道病原菌菌落，轉(zhuǎn)種三糖鐵培養(yǎng)基中，置于37恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)1824 h。D34 生化試驗及血清學(xué)檢驗在三糖鐵培養(yǎng)基中，如不發(fā)酵乳糖，發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣或只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，一般產(chǎn)生硫化氫。有動力者，先與沙門氏AF群多價血清作玻璃片凝集，凡與多價血清凝集者，再與因子血清凝集，以確定其所屬群別，然后用H因子血清，確定血清型。雙向菌株應(yīng)證實兩相的H抗原，有Vi抗原的菌型(傷寒和丙型副傷寒沙門氏菌)應(yīng)用Vi因子血清檢查。生化試驗：應(yīng)進行葡萄糖、甘露醇、麥芽糖、乳糖、蔗糖、靛基質(zhì)、硫化氫、動力、尿素試驗。沙門氏菌屬中除傷寒沙門氏菌和雞沙門氏菌不產(chǎn)氣外，通過發(fā)酵葡萄糖、產(chǎn)氣、均發(fā)酵甘露醇和麥芽糖(但豬沙門氏菌、雛沙門氏菌不發(fā)酵麥芽糖)，不分解乳糖、蔗糖，尿素酶和靛基質(zhì)為陰性，通常產(chǎn)生硫化氫。除雞、雛沙門氏菌和傷寒沙門氏菌的型菌株無動力外，通常均有動力。如遇多價血清不凝集而一般生化反應(yīng)符合上述情況時，可加做側(cè)金盞花醇、水楊素和氰化鉀試驗，沙門氏菌均為陰性。D4 檢驗結(jié)果報告根據(jù)以上鑒別培養(yǎng)、生化試驗和血清學(xué)檢驗結(jié)果報告結(jié)果。附 錄 E(標準的附錄)醫(yī)療機構(gòu)污水及污泥中志賀氏菌的檢驗方法E1 儀器和設(shè)備E11 高壓蒸汽滅菌器。E12 干燥滅菌箱。E13 培養(yǎng)箱。E14 恒溫水浴箱。E15 電爐。E16 天平。E17 滅菌平皿。E18 滅菌刻度吸管。E2 培養(yǎng)基和試劑E21 革蘭氏陰性(GN)增菌液E211 成分胰蛋白胨(或多價胨)20g葡萄糖1 g甘露醇2 g枸櫞酸鈉5 g去氧膽酸鈉05g磷酸氫二鉀16g磷酸二氫鉀25g氯化鈉5g蒸餾水1 000mLE212 制法將以上各成分加入蒸餾水中溶化，調(diào)整pH至70，煮沸過濾，高壓115滅菌20min。貯存于冷暗處備用。雙料GN增菌液配制：除蒸餾水改為500mL外，其它成分不變。E22 SS培養(yǎng)基：同附錄D22。E23 伊紅美蘭瓊脂(EMB)：同附錄B22。E24 三糖鐵瓊脂(TSI)：同附錄D24。E25 志賀氏菌診斷血清E3 檢驗程序E31 樣品處理和增菌污水：取污水250mL，用無菌紗布或脫脂棉進行初濾，然后再用濾膜進行抽濾。將初濾后的紗布或脫脂棉和濾膜，放入到盛有100mL左右的單倍GN增菌液的三角燒瓶中進行增菌培養(yǎng)。置于37恒溫培養(yǎng)箱，培養(yǎng)68h。污泥：用滅菌匙稱取污泥30g，放入滅菌容器內(nèi)，加入300 mL滅菌水，充分混勻制成1：10混懸液。吸取上述1：10混懸液100mL，加到100mL雙料革蘭氏陰性(GN)增菌液內(nèi)，置于37恒溫培養(yǎng)箱，培養(yǎng)68h。E32 分離取上述增菌培養(yǎng)液，分別接種SS平板和EMB平板，置于37恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)24 h。挑取在SS和EMB平板上呈無色透明，直徑115 mL的菌落。每個平板最少挑取5個以上可疑腸道病原菌菌落，轉(zhuǎn)種三糖快培養(yǎng)基中，置于37恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)1824 h。挑取在三糖鐵培養(yǎng)基中，葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，無動力，不產(chǎn)生硫化氫，上層斜面乳糖不分解的菌株，可做血清學(xué)和生化試驗。E33 血清學(xué)檢查：志賀氏菌屬分為四個群，先與多價血清作玻璃片凝集試驗，如為陽性，再分別與A、B、C、D群血清凝集，并進一步與分型血清做玻璃片凝集，最后確定其血清型。E34 生化試驗：應(yīng)進行葡萄糖、甘露醇、麥芽糖、乳糖、蔗糖、靛基質(zhì)、硫化氫、動力、尿素試驗。志賀氏菌屬能分解葡萄糖，但不產(chǎn)氣(福氏志賀氏菌6型有時產(chǎn)生少量氣體)，一般不能分解乳糖和蔗糖，宋內(nèi)氏志賀氏菌對乳糖和蔗糖遲緩發(fā)酵產(chǎn)酸。志賀氏菌屬均不產(chǎn)生硫化氫，不分解尿素，無動力。對甘露醇、麥芽糖的發(fā)酵及靛基質(zhì)的產(chǎn)生，則因菌株不同而異。如遇多價血清玻璃片凝集試驗為陰性，而生化反應(yīng)符合上述情況時，可加做肌醇、水楊素、VP、櫞酸鹽、氰化鉀等試驗。志賀氏菌屬均為陰性反應(yīng)。附 錄 F(標準的附錄)醫(yī)療機構(gòu)污泥中蛔蟲卵的檢驗方法F1 儀器和設(shè)備F11 離心機。P12 金屬篩：60目。F13 顯微鏡。F14 恒溫培養(yǎng)箱。F15 高壓蒸汽滅菌器。F16 冰箱。F17 振蕩器。F2 培養(yǎng)基和試劑F21 35福爾馬林或3鹽酸溶液。F22 飽和氯化鈉溶液。F23 30次氯酸鈉溶液。F3 檢驗程序F31 污泥樣品的采集先把泥堆劃分為四等份，而后在每份的中間，用鐵锨或小鏟各采污泥約500g。同時，在泥堆的中間也采500g一并放在塑料桶或陶瓷桶中。攪拌均勻，并除去固體雜物，再從中取出500g置于塑料袋或其他容器中，帶回實驗室。F32 污泥樣品的處理將現(xiàn)場帶回的樣品，倒于燒杯中，如遇樣品變干且有結(jié)塊時，可將其倒人搪瓷盤中，再行攪拌，同時用大鑷子，一面攪拌，一面將硬塊夾碎，去掉肉眼能看出的夾雜物，如腐爛的布條、草梗、小石塊等。然后，將樣品裝入廣口瓶中，貼上標簽，標明樣品號碼、醫(yī)療機構(gòu)名稱、采樣日期等情況。F33 污泥樣品的檢驗上述樣品經(jīng)處理后，應(yīng)立即進行檢驗，如不能立即檢驗時，可加入510mL 35福爾馬林或3鹽酸溶液，用平皿蓋住廣口瓶瓶口。然后放于冰箱內(nèi)，以防微生物的繁殖和蛔蟲卵的發(fā)育。F331 水洗從已經(jīng)處理過的500g污泥樣品中，稱取100g置于500mL錐形瓶中，加水約500mL。用玻璃棒攪拌后，靜置，使其自然沉淀，經(jīng)12 h后，倒去污泥上面的水，另換清水攪拌后，再讓其自然沉淀，經(jīng)30min后，再倒去上面的清水，另換清水，反復(fù)進行34次，直到污泥上面的水接近五色為止。F332 過濾倒去沉淀上面的清水，用金屬篩過濾于另一500mL錐形瓶中，棄去阻留在篩子上的泥渣。沉淀2030 min后，倒去沉淀上面的液體，另加新水，如此反復(fù)水洗23次，最后倒去上清液，將沉淀物倒入10 mL離心管中。經(jīng)2 500轉(zhuǎn)min離心3 min后，倒去上清液。F333 離心漂浮管內(nèi)注入飽和氯化鈉溶液，用玻璃棒攪勻后，離心3min，由于蛔蟲卵的相對密度小于飽和氯化鈉溶液的相對密度，所以管內(nèi)絕大多數(shù)的蛔蟲卵均浮聚在液面(注意：加入氯化鈉溶液量不得少于沉淀物的20倍)。F334 離心沉淀用毛細吸管反復(fù)吸取管中斜面上的浮膜于另一離心管中。加入清水，經(jīng)攪勻后，再行離心，蛔蟲卵比水的相對密度大，因而下沉于管底。然后小心倒去上清液。F335 培養(yǎng)注入23mi。清水于管中，加幾滴5福爾馬林溶液，置于2426恒溫箱中，培養(yǎng)1520天。在培養(yǎng)過程中，清水不得少于2 mL。F336 鏡檢樣品經(jīng)培養(yǎng)1520天后取出，用毛細吸管吸去上面的清水，余下含蟲卵的沉淀物。在一張干凈的載玻片的中央滴一滴清水，用毛細吸管吸一小滴沉淀物于水中，涂勻后蓋以蓋玻片，在低倍鏡下檢查，必要時，再換以高倍鏡。記錄500個以上死、活蟲卵數(shù)。查完一張片子而蟲卵數(shù)不及500個時，依同法作第二張涂片檢查。涂片不宜太厚，否則視野模糊不清。影響觀察，一般涂片厚度能以透過涂片尚能辨認報紙上的字跡為宜。因為在適宜的溫度和濕度下，經(jīng)過1520天的培養(yǎng)，活蟲卵就會逐漸發(fā)育到幼蟲期，而死蟲卵則在同一條件下仍然保持單細胞期或停留于某一發(fā)育階段，故易于區(qū)別。鏡檢時為達到較為快速而明顯地辨認幼蟲起見，可在載玻片上滴一滴預(yù)先配好避光保存的30次氯酸鈉溶液商品名為安替福明(antiformin)以代替清水作成涂片，置于顯微鏡下觀察，可以看見被包在卵的最外層的蛋白質(zhì)殼逐漸溶解，使卵內(nèi)的幼蟲一目了然。如遇沉淀物中沉渣較多、卵數(shù)較少時，可以直接注入幾滴此脫殼液于離心管中，與沉淀物混合并攪勻之，而后吸一滴混合液于載玻片上，蓋以蓋玻片，直接鏡檢即可。此時視野格外清晰。在培養(yǎng)第1520天未查見幼蟲時，應(yīng)繼續(xù)培養(yǎng)30天(注意：加過30次氯酸鈉溶液，不能再繼續(xù)培養(yǎng))后再觀察。F4 檢驗結(jié)果報告根據(jù)500個以上的蛔蟲卵數(shù)，求出死卵的百分數(shù)，見式(F1)。(F1)式中：A蛔蟲卵死亡率，； m死亡蛔蟲卵數(shù)； n存活蛔蟲卵數(shù)。附 錄 G(標準的附錄)醫(yī)療機構(gòu)污水和污泥中結(jié)核桿菌的檢驗方法G1 儀器和設(shè)備G11 電爐。G12 恒溫水浴箱。G13 高壓蒸汽滅菌器。G14 濾菌器。G15 離心機。C16 恒溫培養(yǎng)箱。G17 乙酸纖維膜：孔徑為0307mG18 玻璃漏斗G2：孔徑為1015 mG19 玻璃漏斗G4：孔徑為34mG2 培養(yǎng)基和試劑G21 改良羅氏培養(yǎng)基G211 成分磷酸二氫鉀24 g硫酸鎂024 g枸櫞酸鎂06 g谷氨酸鈉12 g甘 油12 mL淀 粉30 g蒸餾水600mL雞蛋(包括蛋清和蛋黃)1 000 mL20孔雀綠20mLG212 制法將磷酸二氫鉀、枸櫞酸鈉、味精、甘油及蒸餾水混合于燒杯內(nèi)，放在沸水浴中加熱溶解。加入淀粉繼續(xù)加熱1 h，搖動使其溶解，待冷卻至50C加入蛋液及孔雀綠，溶解，充分混勻。制成斜面，保持溫度90，滅菌1 h。G22 小川氏培養(yǎng)基G221 成分甲液：無水磷酸二氫鉀1 g味 精1 g蒸餾水 100mL乙液：全蛋液200mL甘 油6 mL2孔雀綠 6mLG222 制法甲、乙兩液混合分裝試管內(nèi)。制成斜面，保持溫度90滅菌1 h。G23 pH為70的磷酸鹽緩沖液(M15)。G24