HBVcccDNA及其意義.ppt

HBVcccDNA及其意義,貴州省人民醫(yī)院感染科 湯正明,2006-08-15,1,2006.08.15,感染科,2006-08-15,2,臨床上我們常常遇到以下問(wèn)題： 慢性乙肝難以治愈 抗病毒治療過(guò)程中常常發(fā)生藥物耐受 抗病毒治療后容易復(fù)發(fā) 分子生物學(xué)研究表明，HBVcccDNA在病毒持 續(xù)感染、抗病毒治療后的再度活躍復(fù)制以及藥物耐受方面起著至關(guān)重要的作用。 現(xiàn)就 HBVcccDNA乙肝病毒共價(jià)閉合環(huán)狀DNA的研究進(jìn)展進(jìn)行簡(jiǎn)單的闡述。這是我的學(xué)習(xí)匯報(bào)，希望各位專(zhuān)家批評(píng)指正。,感染科,為什么？,2006-08-15,3,一、HBV感染初期cccDNA的形成 二、HBVcccDNA的穩(wěn)定性 三、核苷類(lèi)似物不能阻止初始cccDNA的形成 四、HBVcccDNA檢測(cè)方法 五、慢性乙肝患者cccDNA檢測(cè)的意義 六、如何清除HBVcccDNA？ 七、 cccDNA在抗病毒治療研究中的應(yīng)用前景,一、HBV感染初期cccDNA的形成,HBVcccDNA存在于肝細(xì)胞核內(nèi)，是病毒成功感染肝細(xì)胞的標(biāo)志，也是慢性乙型肝炎持久存在的關(guān)鍵。 其形成過(guò)程包括： HBV顆粒與肝細(xì)胞膜接觸，被細(xì)胞以?xún)?nèi)吞作用攝入，病毒脫殼后核殼體向肝細(xì)胞核轉(zhuǎn)移，釋放松弛的環(huán)狀DNA（relaxe circular DNA,rcDNA)進(jìn)入細(xì)胞核。,2006-08-15,4,感染科,2006-08-15,5,rcDNA的正鏈在DNA聚合酶作用下進(jìn)一步延長(zhǎng)形成全長(zhǎng)的rcDNA，正負(fù)鏈末端各自連接并構(gòu)象發(fā)生改變形成cccDNA，最后在核小體內(nèi)組合形成非整合狀態(tài)的微型染色體。,感染科,2006-08-15,6,細(xì)胞核內(nèi)的cccDNA作為復(fù)制模板轉(zhuǎn)錄前基因組RNA和其他基因的mRNA。前基因RNA被轉(zhuǎn)運(yùn)至胞漿，與病毒核心蛋白以及P蛋白組裝成核殼體。病毒DNA聚合酶具有逆轉(zhuǎn)錄酶活性，以前基因組RNA為模板逆轉(zhuǎn)錄子代DNA ，核殼體成熟。,感染科,2006-08-15,7,成熟的核殼體有兩個(gè)去向： 部分再進(jìn)入細(xì)胞核重新形成cccDNA，不斷補(bǔ)充核內(nèi)cccDNA池； 部分進(jìn)入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)與病毒蛋白組裝成病毒顆粒向細(xì)胞外分泌，感染新的肝細(xì)胞。 病毒cccDNA的產(chǎn)生也有兩個(gè)途徑，既可由肝細(xì)胞內(nèi)已有的病毒在復(fù)制周期中產(chǎn)生，也可由新感染的肝細(xì)胞產(chǎn)生。如圖所示。,感染科,2006-08-15,8,感染科,2006-08-15,9,感染科,HBV復(fù)制過(guò)程,2006-08-15,10,感染科,2006-08-15,11,復(fù)制方式： HBV吸附 cccDNA 轉(zhuǎn) 2.1KbmRNA 外衣殼蛋白 錄 內(nèi)衣殼蛋白 3.5KbmRNA （前基因組） 反轉(zhuǎn)錄HBVDNA負(fù)鏈 復(fù)制+DNA 組裝與釋放,感染科,2006-08-15,12,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)，處于穩(wěn)定感染的肝細(xì)胞內(nèi)大約有30-50個(gè)cccDNA拷貝。對(duì)慢性乙型肝炎患者肝組織內(nèi)cccDNA實(shí)時(shí)定量檢測(cè)，平均每個(gè)感染細(xì)胞含有33拷貝，與動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果相符。 穩(wěn)定感染的肝細(xì)胞核內(nèi)cccDNA一般維持在一定水平，既滿(mǎn)足病毒復(fù)制需要，又不對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性。,感染科,2006-08-15,13,這一調(diào)節(jié)機(jī)制通過(guò)病毒胞膜蛋白負(fù)反饋機(jī)制來(lái)實(shí)現(xiàn)，前C區(qū)蛋白發(fā)生變異可導(dǎo)致cccDNA大量擴(kuò)增，并引起細(xì)胞死亡。 cccDNA的穩(wěn)定對(duì)維持細(xì)胞的長(zhǎng)期感染狀態(tài)起決定作用。,感染科,2006-08-15,14,cccDNA和rcDNA在結(jié)構(gòu)和理化特性上有3點(diǎn)不同： 1.rcDNA在正鏈與負(fù)鏈上均有缺口或缺刻，只是部分區(qū)域互補(bǔ)才能形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)，但非超螺旋結(jié)構(gòu)，而cccDNA兩條鏈均是完整的，兩者共價(jià)互補(bǔ)，形成超螺旋結(jié)構(gòu)。,感染科,2006-08-15,15,2.rcDNA 能與蛋白共價(jià)結(jié)合，cccDNA則不能。 3.由于缺口或缺刻的存在，rcDNA 可以被一些核酸酶降解成核苷酸或單核苷酸，而cccDNA則由于是超螺旋且雙鏈結(jié)構(gòu)均完整，一般不會(huì)被上述酶降解。,感染科,二、 HBVcccDNA的穩(wěn)定性,對(duì)HBVcccDNA半衰期的認(rèn)識(shí)來(lái)自動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。核苷類(lèi)似物可以抑制胞漿內(nèi)病毒DNA的逆轉(zhuǎn)錄，從而阻斷胞漿內(nèi)病毒DNA進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)再形成cccDNA，使人們可以在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭醒芯縞ccDNA半衰期。,2006-08-15,16,感染科,2006-08-15,17,Addisson研究發(fā)現(xiàn)，拉米夫定、雙脫氧鳥(niǎo)苷前體聯(lián)合抗病毒治療能有效抑制DHBV的復(fù)制，1周后斑點(diǎn)雜交法檢測(cè)表明，血清DHBVDNA下降至檢測(cè)水平以下，肝組織中cccDNA呈指數(shù)下降，其半衰期為35-57天。,感染科,2006-08-15,18,Moraleda等通過(guò)土撥鼠原代細(xì)胞抗病毒研究結(jié)果顯示，cccDNA 的半衰期很長(zhǎng)，其清除依賴(lài)于感染細(xì)胞的死亡。 但是也有相反的報(bào)道。 盡管用人的原代肝細(xì)胞感染HBV，可以觀察到cccDNA的合成和緩慢增加，但到目前為止還沒(méi)有原代人肝細(xì)胞中cccDNA的半衰期的報(bào)道。,感染科,三、核苷類(lèi)似物不能阻止 初始cccDNA的形成,Delmas等研究發(fā)現(xiàn)，阿德福韋能降低培養(yǎng)細(xì)胞內(nèi)DHBVDNA(包括cccDNA)水平，說(shuō)明病毒感染后起始的病毒基因組向cccDNA的轉(zhuǎn)換在阿德福韋存在的情況下仍能發(fā)生，但擴(kuò)增合成cccDNA的過(guò)程被抑制。,2006-08-15,19,感染科,2006-08-15,20,Kock等研究發(fā)現(xiàn)，阿德福韋、拉米夫定都可以部分抑制病毒感染后初始的cccDNA 轉(zhuǎn)換，前者作用更強(qiáng)，但是，即使聯(lián)合用藥也不能完全抑制初始cccDNA 的轉(zhuǎn)換。 因此，說(shuō)明抗病毒藥物治療期間HBV仍有能力感染新的肝細(xì)胞，給抗病毒治療帶來(lái)困難，因而對(duì)慢乙肝患者需要長(zhǎng)期使用抗病毒藥物治療。,感染科,四、HBVcccDNA檢測(cè)方法,1.細(xì)胞內(nèi)cccDNA的抽提與純化 最常用的抽提細(xì)胞內(nèi)cccDNA的方法是蛋白質(zhì)去污劑沉淀法，其原理是基于rcDNA和cccDNA與蛋白質(zhì)結(jié)合能力的差異。rcDNA能與蛋白質(zhì)共價(jià)結(jié)合，與絕大多數(shù)細(xì)胞染色體DNA一起形成沉淀，而cccDNA不能與蛋白質(zhì)結(jié)合故游離于上清中，用酚氯仿抽提上清即可得到cccDNA。根據(jù)繆曉輝等的經(jīng)驗(yàn)，該方法的主要缺點(diǎn)是：抽提較為費(fèi)時(shí)，一般需要4-5小時(shí)；酚氯仿抽提環(huán)節(jié)多、得率不高；對(duì)于凍存的富集細(xì)胞（pellet）難以充分裂解，單裂解這一步可能需要3-4小時(shí)甚至更長(zhǎng)時(shí)間。此外，在上清中實(shí)際仍然含有少量的rcDNA，而在沉淀中實(shí)際上也存在著一部分cccDNA。,2006-08-15,21,感染科,2006-08-15,22,為進(jìn)一步分離cccDNA、rcDNA和單鏈DNA，可以對(duì)抽提產(chǎn)物進(jìn)行純化。以酶切法最為常用。外切核酸酶是一種35外切酶，對(duì)帶有鈍端、5突出端或有缺口的雙鏈具有特異性，而不能降解帶有3突出端（至少4個(gè)堿基）的雙鏈DNA。綠豆核酸酶則以?xún)?nèi)切方式降解單鏈DNA或RNA，而保持雙鏈DNA的完整性（二者的比活性1000），可用于選擇性切除雙鏈DNA的突出單鏈末端，以及切除單鏈DNA或RNA。也可單用綠豆核酸酶酶切rcDNA，或先用外切核酸酶將rcDNA降解成單鏈，然后再用綠豆核酸酶酶切。,感染科,2006-08-15,23,該方法也有其缺點(diǎn)：如抽提產(chǎn)物被稀釋?zhuān)档土藱z測(cè)敏感度；綠豆核酸酶的反應(yīng)緩沖液對(duì)PCR反應(yīng)有抑制作用等。 繆曉輝等嘗試用小量質(zhì)粒抽提試劑盒抽提去抽提HepG2.2.15細(xì)胞內(nèi)的cccDNA，結(jié)果發(fā)現(xiàn)得率比上述所用方法均要高，操作也簡(jiǎn)便，所有操作在30分鐘內(nèi)就可完成。,感染科,2006-08-15,24,2 .cccDNA的定性檢測(cè) 既往絕大多數(shù)文獻(xiàn)報(bào)道的是用Southern blot對(duì)cccDNA進(jìn)行定性檢測(cè)，該方法是分子生物學(xué)的經(jīng)典方法，但技術(shù)要求較高，敏感度低。,感染科,2006-08-15,25,近年來(lái)，也有較多文獻(xiàn)報(bào)道用PCR技術(shù)對(duì)cccDNA進(jìn)行檢測(cè)。但是，由于PCR技術(shù)靈敏度極高，rcDNA和cccDNA的序列又具有高度的同源性，因此在用PCR技術(shù)檢測(cè)cccDNA時(shí)，必須確保只能擴(kuò)增cccDNA而rcDNA不被擴(kuò)增。目前利用rcDNA和cccDNA結(jié)構(gòu)上的差異可以解決這一問(wèn)題。由于rcDNA的正鏈和負(fù)鏈上均存在缺口，故可以設(shè)計(jì)跨越兩個(gè)缺口的引物，使rcDNA不會(huì)被擴(kuò)增，而cccDNA由于是完整的雙鏈結(jié)構(gòu)則可以被選擇性擴(kuò)增。同時(shí)可設(shè)計(jì)另一對(duì)不跨越缺口的引物或只跨越一條鏈的缺口的引物同時(shí)檢測(cè)cccDNA和rcDNA圖1。Kock等成功地用這種選擇性PCR的方法在檢測(cè)感染細(xì)胞內(nèi)的cccDNA和rcDNA。,感染科,2006-08-15,26,此外，為進(jìn)一步提高檢測(cè)的靈敏度，可用套式PCR(nested PCR)的方法。,感染科,2006-08-15,27,感染科,2006-08-15,28,但是有報(bào)道認(rèn)為跨缺口引物對(duì)兩種DNA的選擇性不是絕對(duì)的，在PCR檢測(cè)cccDNA時(shí)，起始模板量不能過(guò)高，否則rcDNA也有可能被擴(kuò)增，Kock等發(fā)現(xiàn)每個(gè)PCR反應(yīng)管中HBV DNA的量在1 pg（約6105拷貝）時(shí)能達(dá)到最佳的靈敏度與選擇性，因此在分析前應(yīng)估計(jì)標(biāo)本中HBV DNA的量。雖然套式PCR更為靈敏，但由于需取PCR產(chǎn)物進(jìn)行再次擴(kuò)增，因此在操作中要注意防止PCR產(chǎn)物污染，避免假陽(yáng)性。,感染科,2006-08-15,29,3 .cccDNA的定量檢測(cè) 在定性檢測(cè)的基礎(chǔ)上，可以進(jìn)一步對(duì)cccDNA進(jìn)行定量檢測(cè)。仍以PCR定量分析技術(shù)中，尤其是競(jìng)爭(zhēng)PCR技術(shù)的敏感性和精確度高。方法是在PCR反應(yīng)管中加入一種已知量的、能與野生模板等效擴(kuò)增的內(nèi)參照，內(nèi)參照是經(jīng)過(guò)突變處理的，其兩端尤其是引物退火區(qū)的序列與野生模板相同。PCR擴(kuò)增后通過(guò)一定的方法將野生片段與突變片段區(qū)分開(kāi)，分別計(jì)算其絕對(duì)量，或求出其相對(duì)比值，就可以推算PCR擴(kuò)增以前野生模板的量。,感染科,2006-08-15,30,He等建立了實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)cccDNA的方法。他們將Taqman MGB探針設(shè)計(jì)在負(fù)鏈缺刻的下游，與負(fù)鏈互補(bǔ)結(jié)合。對(duì)cccDNA，在上游引物的引導(dǎo)下，Taq酶到達(dá)Taqman MGB探針?biāo)Y(jié)合的位點(diǎn)，利用其53外切活性將探針切斷，3端的淬滅基團(tuán)失去對(duì)5端的發(fā)光基團(tuán)的抑制作用，從而產(chǎn)生熒光信號(hào)。每擴(kuò)增一個(gè)cccDNA分子，就會(huì)產(chǎn)生一個(gè)熒光信號(hào)，PCR儀可對(duì)產(chǎn)生的信號(hào)進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)，根據(jù)熒光信號(hào)的強(qiáng)弱對(duì)cccDNA進(jìn)行定量。對(duì)rcDNA，由于上游引物引發(fā)的鏈延伸不能通過(guò)負(fù)鏈缺刻，故不能使Taqman MGB探針被Taq酶切斷產(chǎn)生熒光信號(hào)。該方法的特異性比選擇性PCR進(jìn)一步提高，可以消除高rcDNA背景可能產(chǎn)生的非特異性擴(kuò)增。該方法的檢測(cè)低限可達(dá)100個(gè)拷貝，靈敏度比目前應(yīng)用的任何一種其它方法都高。所有檢測(cè)在2小時(shí)內(nèi)可完成。,感染科,2006-08-15,31,還有其他一些更為敏感的檢測(cè)方法，如Shao等報(bào)告的兩步法對(duì)cccDNA進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量。其設(shè)計(jì)與He等的方法有異曲同工之處，即都是利用rcDNA與cccDNA分子結(jié)構(gòu)上是否完整來(lái)有效地將二者區(qū)分開(kāi)來(lái)，實(shí)現(xiàn)對(duì)cccDNA的特異性檢測(cè)。,感染科,2006-08-15,32,該方法在熒光探針位置的選擇上更符合熒光PCR的要求，即探針越靠近引物效果越好，這樣檢測(cè)到的熒光信號(hào)質(zhì)量和實(shí)時(shí)擴(kuò)增曲線(xiàn)形狀可能更佳，而在He等的方法中探針與上游引物點(diǎn)之間的距離則至少需要在230個(gè)堿基以上。但是，該方法存在與套式PCR類(lèi)似的缺點(diǎn)，即需要分兩步操作，單鏈延伸反應(yīng)管開(kāi)蓋后極有可能造成產(chǎn)物污染。,感染科,五、慢性乙肝患者 cccDNA檢測(cè)的意義,第一，cccDNA可作為評(píng)價(jià)抗乙肝病毒藥物的新指標(biāo)。 目前臨床上評(píng)價(jià)干擾素、核苷類(lèi)似物這些抗乙肝病毒藥物時(shí)存在一個(gè)很大的問(wèn)題。 即其評(píng)價(jià)指標(biāo)主要是患者肝功能的改善與否、血清乙肝病毒DNA水平的變化以及肝組織的病理學(xué)改變等。,2006-08-15,33,感染科,2006-08-15,34,誠(chéng)然，這些指標(biāo)對(duì)臨床醫(yī)師判斷患者病情而言非常重要和實(shí)用，也是臨床醫(yī)師選用抗乙肝病毒藥物時(shí)的依據(jù)。 然而對(duì)于何時(shí)停用抗病毒藥物、停用抗病毒藥物后乙肝病毒是否會(huì)重新復(fù)制活躍導(dǎo)致乙肝復(fù)發(fā)，則缺乏客觀而有效的指標(biāo)。,感染科,2006-08-15,35,開(kāi)展肝細(xì)胞內(nèi)乙肝病毒cccDNA的動(dòng)態(tài)定量監(jiān)測(cè)可以部分解決這個(gè)問(wèn)題。 治療前后肝細(xì)胞內(nèi)乙肝病毒cccDNA含量的變化應(yīng)該納入到抗乙肝病毒藥物評(píng)價(jià)的指標(biāo)體系中來(lái)，從一定意義上說(shuō)，只有能夠徹底清除乙肝病毒cccDNA的藥物，才能算是真正“有效”的抗病毒藥物。,感染科,2006-08-15,36,第二，檢測(cè)乙肝病毒cccDNA可作為評(píng)價(jià)乙肝病毒是否能感染肝外組織的客觀指標(biāo)之一。乙肝病毒不僅僅是一種嗜肝病毒，一些肝外組織中也可檢測(cè)到乙肝病毒DNA，如腎臟、胰腺以及外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)等。 早就有人發(fā)現(xiàn)乙肝病毒可以感染白細(xì)胞,而這種免疫細(xì)胞的感染似乎有利于病毒逃避免疫反應(yīng)，從而導(dǎo)致機(jī)體清除乙肝病毒的能力下降。關(guān)于PBMC能否被乙肝病毒感染的問(wèn)題目前仍有爭(zhēng)議，其中一個(gè)重要的原因是沒(méi)有確立PBMC被感染的標(biāo)準(zhǔn)。 我們認(rèn)為把PBMC細(xì)胞內(nèi)是否存在cccDNA作為判斷感染的標(biāo)準(zhǔn)是最可靠的。 cccDNA的形成是乙肝病毒的侵入細(xì)胞后在細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行復(fù)制的起始步驟，也是轉(zhuǎn)錄合成前基因組RNA(pregenomic RNA,pgRNA)的前體，是建立病毒感染狀態(tài)的最重要標(biāo)志，沒(méi)有cccDNA的形成也就沒(méi)有其后的一系列過(guò)程。,感染科,2006-08-15,37,Kock等用乙肝病毒去感染體外培養(yǎng)的PBMCs時(shí)，發(fā)現(xiàn)不能在細(xì)胞內(nèi)檢測(cè)到cccDNA，相反，如果轉(zhuǎn)染的是肝細(xì)胞，則非常容易檢測(cè)到cccDNA。此外，在乙肝患者的肝組織內(nèi)，能檢測(cè)到cccDNA和rcDNA，而在其PBMC中，則只能檢測(cè)到rcDNA。,感染科,2006-08-15,38,認(rèn)為乙肝病毒是不能感染PBMC，即使PBMC中檢測(cè)到乙肝病毒，也只是血液的病毒DNA與PBMC表面牢固結(jié)合，不易被PBS等洗滌下來(lái)，抽提細(xì)胞所得到的病毒DNA其實(shí)并不存在于細(xì)胞內(nèi)；或病毒僅僅是被PBMC所“吸收”(absorption)，并沒(méi)有建立真正意義上的感染狀態(tài)。 這一實(shí)驗(yàn)結(jié)果給我們很多啟發(fā)，也加深了對(duì)乙肝病毒感染的認(rèn)識(shí)。,感染科,2006-08-15,39,第三，檢測(cè)乙肝病毒cccDNA可評(píng)價(jià)乙肝患者病情。繆曉輝等用選擇性熒光定量PCR對(duì)93例乙肝患者血清作回顧性分析時(shí)，發(fā)現(xiàn)24例患者血清HBVcccDNA呈陽(yáng)性，其中慢性乙肝中度以上的病例占70%以上。,感染科,2006-08-15,40,繆曉輝等用選擇性熒光定量PCR對(duì)93例乙肝患者血清作回顧性分析時(shí)，發(fā)現(xiàn)24例患者血清cccDNA呈陽(yáng)性，其中急性乙肝1例，慢性乙肝（輕度）6例，慢性乙肝（中度）6例，慢性乙肝（重度）3例，肝炎肝硬化2例，慢性乙肝（重型）6例，其中慢性乙肝（中度）以上的病例占70%以上。雖然經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析還不能看出顯著差異，樣本量還不夠大，血清cccDNA陽(yáng)性與病情的輕重是否存在某種關(guān)系還有待于進(jìn)一步的深入研究。但是，從理論上推測(cè)，既然存在于肝細(xì)胞胞質(zhì)和線(xiàn)粒體中的轉(zhuǎn)氨酶等酶類(lèi)在肝細(xì)胞被破壞時(shí)能釋放到血液中，那么存在于肝細(xì)胞核內(nèi)的cccDNA分子在肝細(xì)胞變性、壞死時(shí)應(yīng)該也可以釋放到血液中，而且病情越嚴(yán)重，變性壞死的細(xì)胞越多，對(duì)于同一個(gè)患者而言，在某一時(shí)間段內(nèi)，其血液中的cccDNA水平應(yīng)該也相應(yīng)地越高，對(duì)判斷病情有意義。,感染科,2006-08-15,41,雖然經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析還不看出顯著差異，樣本量還不夠大，血清HBVcccDNA陽(yáng)性與病情的輕重是否存在某種關(guān)系還有待于進(jìn)一步的深入研究。 目前通過(guò)肝活檢來(lái)監(jiān)測(cè)乙肝患者肝組織中的cccDNA水平變化存在著一定困難，因而監(jiān)測(cè)血液中的cccDNA的動(dòng)態(tài)變化也許更具有現(xiàn)實(shí)意義。當(dāng)然，其中還存在一些問(wèn)題有待研究和解決，比如血液中的cccDNA水平遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于肝組織中的cccDNA水平，也遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于血液中的的rcDNA水平，因此必須進(jìn)一步提高cccDNA定量檢測(cè)的靈敏度。,感染科,2006-08-15,42,但是，從理論上推測(cè)，既然存在于肝細(xì)胞胞質(zhì)和線(xiàn)粒體中的轉(zhuǎn)氨酶等酶類(lèi)在肝細(xì)胞被破壞時(shí)能釋放到血液中，那么存在于肝細(xì)胞核內(nèi)的cccDNA分子在肝細(xì)胞變性、壞死時(shí)應(yīng)該也可以釋放到血液中，而且病情越嚴(yán)重，變性壞死的細(xì)胞越多，對(duì)于同一例患者而言，在某一時(shí)間段內(nèi)，其血液中的cccDNA水平應(yīng)該也相應(yīng)地越高，對(duì)判斷病情有意義。,感染科,2006-08-15,43,目前通過(guò)肝活檢來(lái)監(jiān)測(cè)乙肝患者肝組織中的cccDNA水平變化存在著一定困難，因而監(jiān)測(cè)血液中cccDNA的動(dòng)態(tài)變化也許更具有現(xiàn)實(shí)意義。,感染科,2006-08-15,44,當(dāng)然，目前還存在一些問(wèn)題有待研究和解決，例如血液中HBVcccDNA的水平遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于肝組織中的水平，也遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于血液中的松