中藥制劑中各類化學(xué)成分分析.ppt

第六章 中藥制劑中各類化學(xué)成分分析,1 生物堿類成分分析,概述 理化性質(zhì) 物理性狀（存在的形態(tài)，升華性，揮發(fā)性，光學(xué)活性） 堿性 溶解性 沉淀反應(yīng) 沉淀劑：碘化物復(fù)鹽、重金屬鹽、大分子酸 顯色反應(yīng) +酸性染料（磺酸肽類）有色配合物 紫外光譜特征,游離易溶于CHCl3，Et2O，EtOH等有機(jī)溶劑 生物堿鹽水溶性增強(qiáng),生物堿類成分的分離 溶劑萃取 柱層析（氧化鋁、硅藻土、離子交換柱） 定性鑒別 沉淀反應(yīng)、顯色反應(yīng) 多肽、蛋白質(zhì)、鞣質(zhì)等假陽性反應(yīng) 麻黃堿、秋水仙堿等假陰性反應(yīng),馬錢子散中生物堿成分的鑒別 取馬錢子散1g，加濃氨試液數(shù)滴及氯仿10ml，浸泡數(shù)小時(shí)， 濾過，取濾液1ml蒸干，殘?jiān)酉←}酸1ml使溶解，加碘化鉍 鉀試液12滴，即生成黃棕色沉淀。,定性鑒別 薄層色譜鑒別 吸附劑：氧化鋁、硅膠 展開劑：氯仿、苯等 顯色劑：改良碘化鉍鉀試劑，碘蒸氣等 氣相色譜 麻黃堿、苦參堿、顛茄類生物堿的含量測(cè)定 液相色譜,含量測(cè)定 總生物堿含量測(cè)定 化學(xué)分析法 分光光度法 直接測(cè)定 離子對(duì)萃取比色法 酸性染料比色法 BH十十In（BH十In）BH十In 苦味酸鹽比色法 雷氏鹽比色法 異羥肟酸鐵比色法 （含有酯鍵結(jié)構(gòu)的生物堿 ）,含量測(cè)定 單體生物堿含量測(cè)定 薄層色譜法 高效液相色譜法 液液分配色譜法（以反相為主，如ODS或C18） 改進(jìn)流動(dòng)相（硅醇基抑制劑、低濃度的離子對(duì)試劑、季銨鹽試劑、電解質(zhì)緩沖液） 固定相改進(jìn)（封尾技術(shù)） 液固吸附色譜法 離子交換色譜法（陽離子交換樹脂） 檢測(cè)器 氣相色譜法,2 黃酮類成分分析,概述 理化性質(zhì) 物理性狀（存在的形態(tài)，顏色，揮發(fā)性，光學(xué)活性） 溶解性 酸堿性 酸性：與酚羥基的數(shù)目和位置有關(guān) 7,4- 二羥基 7-或4- 羥基 一般酚 5-羥基 堿性,游離甙元易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙醚等 黃酮甙易溶于水、甲醇、乙醇,理化性質(zhì) 顯色反應(yīng) 還原反應(yīng)（鹽酸鎂粉反應(yīng)） 金屬鹽類試劑的配合反應(yīng)（鋁、鉛、鋯、鎂鹽） 紫外光譜特征 I帶(300-400nm) B環(huán)桂皮?；?II帶(240-285nm) A環(huán)苯甲?；?黃酮類成分的分離 溶劑萃取 柱層析（聚酰胺柱） 沉淀法 定性鑒別 顯色反應(yīng) 鹽酸-鎂粉反應(yīng) 金屬鹽類配合反應(yīng),定性鑒別 薄層色譜鑒別 硅膠-分離弱極性黃酮 展開系統(tǒng)：甲苯-甲酸乙酯-甲酸，氯仿-甲醇 聚酰胺-分離含游離酚羥基的黃酮及其苷 展開系統(tǒng)：醋酸，醋酸乙酯-甲酸-水等 纖維素-分離多糖苷混合物 展開系統(tǒng)：正丁醇-乙酸-水，甲酸，乙酸,含量測(cè)定 總黃酮含量測(cè)定 紫外分光光度法 比色法 高效液相色譜法 正相色譜 硅膠固定相沒有羥基或乙酰化黃酮類成分 反相色譜（C18或C8） 流動(dòng)相：甲醇-水-乙酸（磷酸緩沖液），乙腈-水 檢測(cè)器,銀杏葉提取物總黃酮醇苷含量測(cè)定 含量測(cè)定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-0.4%磷酸溶液（50：50）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為360nm。理論板數(shù)按槲皮素峰計(jì)算應(yīng)不低于2500，山柰素酚峰與異鼠李素峰的分離度應(yīng)大于1.5。 對(duì)照品溶液的制備（略） 供試品溶液的制備 取本品10片，除去包衣，精密稱定，研細(xì)，取約相當(dāng)于總黃酮醇苷19.2mg的粉末，精密稱定，精密加入甲醇20ml，稱定重量，超聲處理20分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液10ml，置100ml錐形瓶中，加甲醇10ml、25%鹽酸溶液5ml，搖勻，置水浴中加熱回流30分鐘，迅速冷卻至室溫，轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45m）濾過，取濾液，即得。 測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10l，注入液相色譜儀，測(cè)定，分別計(jì)算槲皮素、山奈素和異鼠李素的含量，按下式換算成總黃酮苷的含量。 總黃酮醇苷含量=（槲皮素含量+山奈素含量+異鼠李素含量）2.51,3 三萜皂甙類成分分析,概述 理化性質(zhì) 物理性狀（存在的形態(tài)，表面活性，吸濕性） 溶解性 紫外光譜特征 大多無明顯的紫外吸收或僅在200nm附近有末端吸收,皂甙元能溶于石油醚、苯、乙醚、氯仿等 皂甙可溶于水，易溶于熱水、含水稀醇等,甘草酸,人參皂甙(A型),理化性質(zhì) 顯色反應(yīng) 醋酐-濃硫酸反應(yīng) 五氯化銻反應(yīng) 三鋁醋酸反應(yīng) 冰醋酸-乙酰氯反應(yīng) 氯仿-硫酸反應(yīng) 金屬鹽類反應(yīng) +鉛、鋇、銅鹽沉淀 酸性皂甙+硫酸銨/醋酸鉛/中性鹽沉淀 中性皂甙+堿式醋酸鉛/氫氧化鋇/堿性鹽沉淀,三萜皂甙類成分的分離 溶劑萃取 柱層析（大孔樹脂柱） 沉淀法 定性鑒別 泡沫反應(yīng) 顯色反應(yīng),定性鑒別 薄層色譜鑒別 吸附劑：硅膠、氧化鋁、硅藻土 展開劑： 三萜皂甙氯仿-甲醇-水、正丁醇-醋酸乙酯-水等極性較大的體系 三萜皂甙元-以苯、氯仿、己烷等為主要組分 顯色劑 三氯醋酸、50%及10%硫酸乙醇液、磷鉬酸、濃硫酸-醋酸酐、碘蒸氣等,含量測(cè)定 總皂甙含量測(cè)定 重量法 比色法 顯色劑：香草醛-硫酸，香草醛-高氯酸，酸酐-硫酸等等 三萜皂甙類單體成分含量測(cè)定 薄層色譜法 高效液相色譜 甘草酸、遠(yuǎn)志皂甙紫外檢測(cè)器 其他蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（ELSD）,概述 理化性質(zhì) 物理性狀（存在的形態(tài)，升華性，光不穩(wěn)定性） 溶解性 酸堿性 酚羥基酸性,游離溶于乙醇、苯、乙醚、氯仿等 醌甙可溶于熱水，易溶于甲醇、乙醇,丹參醌I(xiàn)IA,大黃素,4 醌類成分分析,理化性質(zhì) 顯色反應(yīng) 羥基蒽醌+堿橙，紅，紫紅，藍(lán) +Pb2+/Mg2+ 配合物 +對(duì)亞硝基二甲基苯胺紫，綠，藍(lán)，灰,定性鑒別 顯色反應(yīng) 升華法 薄層鑒別 吸附劑：硅膠 展開劑：多含甲醇或水的混合溶劑系統(tǒng)分離甙和甙元 不含甲醇或水的混合溶劑系統(tǒng)分離甙元 顯色：堿性試劑，醋酸鎂甲醇液、氨熏,含量測(cè)定 游離蒽醌的測(cè)定 弱極性溶劑提取后，加堿比色 結(jié)合蒽醌的測(cè)定 極性溶劑提取，水解測(cè)甙元 先酸水解后，非極性溶劑提取甙元后測(cè)定 醌類單體成分含量測(cè)定 薄層色譜法 高效液相色譜,牛黃解毒片中游離蒽醌和總蒽醌的測(cè)定混合堿液比色法 對(duì)照品溶液測(cè)定：以1，8-二羥基蒽醌為對(duì)照品，精密稱取10mg于100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度（100g/mL）。取1mL對(duì)照品液于10mL量瓶中，在水浴上蒸干，加5%氫氧化鈉-2%氫氧化銨混合堿溶解并稀釋至刻度，放置1小時(shí)，以5%氫氧化鈉-2%氫氧化銨混合堿液為空白，在510nm波長(zhǎng)處測(cè)定。 樣品測(cè)定：游離蒽醌的測(cè)定：取牛黃解毒片10片，刮去糖衣，精密稱定重量，研細(xì)。稱取一片重，置于具塞三角瓶中，精密加入氯仿100mL，稱重，水浴上回流4小時(shí)，取下，加塞，放冷，稱重，用氯仿補(bǔ)充至原重量，濾過，吸取濾液50mL于分液漏斗中，用蒸餾水20mL洗滌數(shù)次，至水層無色，棄去水液。氯仿層用5%氫氧化鈉-2%氫氧化銨混合堿液振搖萃取數(shù)次，直至混合堿液無色，合并堿液，用20mL氯仿洗滌數(shù)次，至氯仿層無色，棄去氯仿層。將混合堿液在水浴上加熱數(shù)分鐘至氯仿?lián)]盡，冷卻，移入100mL量瓶中，并稀釋至刻度，放置1小時(shí)，以5%氫氧化鈉-2%氫氧化銨混合堿液為空白，在510nm處測(cè)定，計(jì)算游離蒽醌的含量（相當(dāng)于1，8-二羥基蒽醌含量）。,牛黃解毒片中游離蒽醌和總蒽醌的測(cè)定混合堿液比色法 總蒽醌的測(cè)定：精密稱取游離蒽醌項(xiàng)下的牛黃解毒片粉一片置于150mL燒瓶中，加2.5mol/L硫酸30mL直火回流4小時(shí)，放冷，加入氯仿20mL，水浴回流0.5小時(shí)，放冷，吸出氯仿液，再加氯仿，反復(fù)操作至氯仿無色為止。合并氯仿層液，用蒸餾水洗滌數(shù)次，至水層無色，棄去水液。氯仿液用5%氫氧化鈉-2%氫氧化銨混合堿液振搖萃取數(shù)次，至堿液無色，合并，用20mL氯仿洗滌數(shù)次，至氯仿層無色，棄去氯仿液。將堿液置水浴上加熱至氯仿?lián)]盡，冷卻，移入50mL量瓶中，用混合堿液稀釋至刻度，放置1小時(shí)，以5%氫氧化鈉-2%氫氧化銨液為空白，在510nm處測(cè)定，計(jì)算游離蒽醌的含量（相當(dāng)于1，8-二羥基蒽醌含量）。 結(jié)合蒽醌的計(jì)算： 每片含結(jié)合蒽醌量=每片含總蒽醌量每片含游離蒽醌量。,復(fù)方丹參片中丹參酮A含量測(cè)定高效液相色譜法 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水（73：27）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為270nm。 對(duì)照品溶液的制備：精密稱取丹參酮A對(duì)照品10mg，置50mL棕色量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5mL，置25mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得（每1mL中含丹參酮A40g） 供試品溶液的制備：取本品10片，糖衣片除去糖衣，精密稱定，研細(xì)，取1g，精密稱定，精密加入甲醇25mL，稱定重量，超聲處理15分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。 測(cè)定法：分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10L，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。,5 揮發(fā)性成分分析,概述 理化性質(zhì) 物理性狀（氣味，比重，折光性） 溶解性：易溶于有機(jī)溶劑 顯色反應(yīng) 酚類+三氯化鐵藍(lán)，藍(lán)紫，綠 羰基+苯肼、羥胺結(jié)晶體 醛類+硝酸銀胺銀鏡 內(nèi)酯類+亞硝酰鐵氰化鈉+NaOH紅色并逐漸消失 奧類+濃硫酸藍(lán)，紫,檸檬烯,薄荷醇,桂皮醛,5 揮發(fā)性成分分析,定性鑒別 化學(xué)反應(yīng) 氧化反應(yīng)(高錳酸鉀，鉻酸） 香草醛硫酸反應(yīng) 薄層色譜 吸附劑：硅膠、氧化鋁 展開劑：石油醚，正己烷，（加少量的乙酸乙脂或苯） 顯色劑 氣相色譜法 GC-MS或GC-FTIR,5 揮發(fā)性成分分析,含量測(cè)定 總揮發(fā)油含量測(cè)定 揮發(fā)油測(cè)定器 蒸餾法 單一成分含量測(cè)定 氣相色譜 薄層色譜法 高效液相色譜 GC-MS或GC-FTIR聯(lián)用技術(shù),4 其他類型成分分析,香豆素類 顯色反應(yīng) 異羥肟酸鐵反應(yīng) 與酚羥基反應(yīng) FeCl3 Gibbs試劑（2,6-二氯苯醌氯亞胺）反應(yīng)藍(lán)色 重氮試劑化反應(yīng),4 其他類型成分分析,香豆素類 定性鑒別 化學(xué)反應(yīng)法 熒光法 薄層色譜法,七寶美髯顆粒中補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素的鑒別 取本品10g，研細(xì)，加醋酸乙酯20ml、鹽酸0.5ml，超聲處 理20分鐘，濾過，濾液揮干，殘?jiān)哟姿嵋阴?.5ml使溶解， 作為供試品溶液。 薄層條件：硅膠G薄層板，展開劑正已烷醋酸乙酯（4:1）， 顯色劑為10%氫氧化鉀甲醇溶液，紫外光燈365nm下檢視。,4 其他類型成分分析,香豆素類 含量測(cè)定 分光光度法 熒光光度法 薄層色譜法 高效液相色譜法 氣相色譜法,4 其他類型成分分析,有機(jī)酸 概述 理化性質(zhì) 物理性狀（存在的形態(tài)，溶解性，揮發(fā)性） 提取分離 有機(jī)溶劑提取法 離子交換法 水蒸氣蒸餾法,4 其他類型成分分析,有機(jī)酸 定性鑒別 吸附色譜 分配色譜 含量測(cè)定 酸堿滴定法總有機(jī)酸 分光光度法 高效液相色譜法 薄層色譜法 其他方法,4 其他類型成分分析,環(huán)烯醚萜類 概述特殊的單萜 理化性質(zhì) 物理性狀（存在的形態(tài)，多苦味，穩(wěn)定性） 溶解性：易溶于水、甲醇，可溶于乙醇、丙酮、正丁醇 薄層定性鑒別 吸附劑：硅膠、聚酰胺 顯色劑：硫酸乙醇，茴香醛試液，香草醛硫酸試液，對(duì)二甲氨基苯甲醛硫酸試液,龍膽苦甙,4 其他類型成分分析,環(huán)烯醚萜類 含量測(cè)定 高效液相色譜法 薄層掃描法 熒光分光光度法 分光光度法,復(fù)方梔子沖劑中梔子甙的含量測(cè)定 精密稱取本品3g，置索氏提取器內(nèi)，加甲醇回流提取6小時(shí)， 回收甲醇至干，加水10ml溶解，用水飽和正丁醇提取，提取 液蒸干，以甲醇溶解，通過已處理好的活性炭-中性氧化鋁柱， 用甲醇100ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)?ml甲醇溶 解，作為供試品溶液。 薄層條件：硅膠GF254薄層板，展開劑氯仿甲醇25%氨 水（4:1:0.1），檢測(cè)波長(zhǎng)247nm，參比波長(zhǎng)370nm。,4 其他類型成分分析,單萜及二萜類 含芍藥甙中藥制劑的分析 薄層色譜 高效液相色譜 含穿心蓮內(nèi)酯中藥制劑的分析 薄層色譜 回滴法 比色法總內(nèi)酯 薄層掃描或高效液相色譜法單體成分,穿心蓮內(nèi)酯,4 其他類型成分分析,多糖（polysaccharides） 概述 理化性質(zhì) 物理性狀（存在形式，還原性） 溶解性：溶于水，低濃度的酸堿，鹽溶液，不溶于醇、醚、丙酮 提取分離 水提醇沉 防止水解，注意消除酶、酸、堿等的影響,4 其他類型成分分析,多糖（polysaccharides） 提取分離 金屬鹽沉淀法 季胺氫氧化物沉淀 柱色譜法（活性炭+等量的硅藻土） 凝膠色譜法（葡聚糖凝膠sephadex，瓊脂糖凝膠sepharose，聚丙烯酰胺凝膠Bio-gel P） 制備型區(qū)域電泳,4 其他類型成分分析,多糖（polysaccharides） 定性鑒別 薄層色譜（硅膠、纖維素、硅藻土） 紙色譜 展開劑：正丁醇、水混合體系 顯色劑：苯胺-鄰苯二甲酸的正丁醇飽和水溶液等 電泳法 濾紙電泳、玻璃纖維紙電泳、醋酸纖維薄膜電泳、凝膠電泳 高效液相色譜法 氣質(zhì)聯(lián)用 酸水解中和柱前衍生GC-MS,4 其他類型成分分析,多糖（polysaccharides） 含量測(cè)定 總多糖的測(cè)定 3,5-二硝基水楊酸比色法棕紅色（550nm） 半微量定量法 苯酚-硫酸法藍(lán)綠色（480-490nm） 蒽酮-硫酸法黃綠色(620nm) 單體多糖的含量測(cè)定 高效凝膠液相色譜法確定分子量 高效液相色譜法確定組成 色譜柱：氨基鍵合相硅膠柱，或普通硅膠柱 檢測(cè)器：示差折光檢測(cè)器,4