資源微生物實(shí)驗(yàn)實(shí)習(xí)報(bào)告

資源與應(yīng)用微生物實(shí)習(xí)報(bào)告學(xué)院：生命科學(xué)學(xué)院專業(yè)：應(yīng)用生物科學(xué)學(xué)號：20120459020姓名： 毛 德 昌酵母耐糖度、耐酒精度、耐酸度特性的檢測酵母菌是人類歷史文明中被利用最早的微生物。酵母菌可以在缺氧的環(huán)境中生存。酵母菌是一些單細(xì)胞的真菌，在自然也廣泛存在，主要生活在偏酸的潮濕的環(huán)境含糖環(huán)境中。在釀酒業(yè)中廣泛應(yīng)用。酵母主要通過芽殖的方式繁殖后代。在不同的培養(yǎng)基濃度條件下酵母的的生長速率以及酵母的活性有所不同。利用血球計(jì)數(shù)板對發(fā)酵后的酵母進(jìn)行計(jì)數(shù)，并計(jì)算酵母存活率，出芽率。血球計(jì)數(shù)板被用來對人體內(nèi)紅、白細(xì)胞進(jìn)行顯微計(jì)數(shù)只用，也常用來對細(xì)、真菌、酵母等微生物計(jì)數(shù)，是一種常見的生物學(xué)工具。每塊計(jì)數(shù)板由H形凹槽分為2個同樣的計(jì)數(shù)池。計(jì)數(shù)池兩側(cè)各有一支持柱，將特制的專用蓋玻片覆蓋其上，形成高0.10mm的計(jì)數(shù)池。計(jì)數(shù)池畫有長、寬各3.0mm的方格，分為9個大方格，每個大格面積為1.0毫米X1.0毫米=1.0平方毫米;容積為1.0平方毫米X0.1毫米=0.1立方毫米。其中，中央大方格用雙線分成25個中方格，位于正中及四角5個中方格是紅細(xì)胞計(jì)數(shù)區(qū)域，每個中方格用單線劃分為16個小方格。四角的4個大方格是白細(xì)胞計(jì)數(shù)區(qū)域，每個大方格用單線劃分為16個中方格。血球計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)區(qū)如下圖酵母死活計(jì)數(shù)和形態(tài)的觀察可用呂氏美蘭溶液對酵母進(jìn)行染色。呂氏堿性美藍(lán)染液是一種無毒的染料，其氧化型呈藍(lán)色，還原型為無色。用美藍(lán)染液對酵母菌的細(xì)胞進(jìn)行染色時，活細(xì)胞內(nèi)的還原性物質(zhì)能使美藍(lán)由藍(lán)色的氧化型變?yōu)闊o色的還原型。1、 實(shí)驗(yàn)過程選用三株酵母分別對其進(jìn)行耐糖度，耐酒精度和耐酸度的特性進(jìn)行測定。按照如下配方配制耐性發(fā)酵培養(yǎng)基表一，酵母耐糖度培養(yǎng)基名稱 1 2 3葡萄糖（g/1000ml） 100 150 200硫酸銨（g/1000ml） 5 7.5 10磷酸二氫鉀（g/1000ml） 2 3 4 表二，酵母耐酸度培養(yǎng)基名稱 1 2 3去皮土豆 （g/L） 200 200 200葡萄糖 （g/L） 20 20 20PH 2 3 4表二，酵母耐酒精度培養(yǎng)基（每瓶200ml培養(yǎng)基；注無水乙醇在接種前加入培養(yǎng)基）名稱 1 2 3去皮馬鈴薯 （g/L） 200 200 200葡萄糖 （g/L） 20 20 20水 （ml/100ml） 60 50 50無水乙醇 （ml/100ml） 40 50 601.1 接種種子液的配制以及接種配制PDA種子液培養(yǎng)基，用去皮的鮮土豆20g，用80ml蒸餾水煮20min。濾去土豆，向?yàn)V液中加入2g葡萄糖，定容至100ml。分裝于6支試管中，每支試管15ml液體。分裝好后放入滅菌鍋中美軍30min。滅好菌后在超凈工作臺上從菌種管中挑適量的酵母菌接種于種子液中。接種好后28培養(yǎng)48h。1.2發(fā)酵液的接種培養(yǎng)好后現(xiàn)在顯微鏡下利用血球計(jì)數(shù)板對酵母染色后進(jìn)行計(jì)數(shù)。記錄活細(xì)胞和死細(xì)胞，將各個菌種液的活細(xì)胞濃度調(diào)成一致，向每個耐性梯度的培養(yǎng)基中接種入1ml種子菌液。在28條件下恒溫培養(yǎng)48h后，用同樣的方法對酵母進(jìn)行計(jì)數(shù)。2、 實(shí)驗(yàn)結(jié)果血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)公式： 注：（1）死細(xì)胞；（2）酵母菌體；（3）芽體實(shí)驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)如下各表表三，種子液酵母計(jì)數(shù)菌數(shù)1號酵母21號酵母22號酵母活菌數(shù)（個/ml）1.61071.941071.38107死菌數(shù)（個/ml）5.410671065.2106總菌數(shù)（個/ml）2.141072.641071.38107 表四，種子液酵母死亡率1號酵母21號酵母22號酵母死亡率（）25.2326.5237.69將三株酵母菌的活菌數(shù)調(diào)到濃度均為個菌體，然后接種于三種耐性培養(yǎng)基的個梯度中，每個梯度1ml，即每個梯度中接種個菌體。培養(yǎng)48小時后計(jì)數(shù)結(jié)果如以下各表。 表五，酵母耐酸實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù) PH梯度菌株編號2.03.04.01活菌數(shù)（個/ml）2.81068.61061.62107死菌數(shù)（個/ml）51054.91061.0106總菌數(shù)（個/ml）3.31061.351071.72107死亡率（）15.1536.305.821活菌數(shù)（個/ml）2.251067.71061.4107死菌數(shù)（個/ml）3.51054.01062.1106總菌數(shù)（個/ml）2.61061.171071.61107死亡率（）13.534.1913.0422活菌數(shù)（個/ml）2.351068.251061.18107死菌數(shù)（個/ml）3.51053.61061.2106總菌數(shù)（個/ml）2.71061.1851071.3107死亡率（）12.9630.389.23表六，酵母耐糖實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù) 培養(yǎng)基糖含量 （g/L） 菌株編號1001502001活菌數(shù)（個/ml）7.21063.61065.4106死菌數(shù)（個/ml）4.01051.61062.4106總菌數(shù)（個/ml）7.61065.11067.8106死亡率（）5.2631.3730.7721活菌數(shù)（個/ml）1.61061.41061.6106死菌數(shù)（個/ml）8.010501.2106總菌數(shù)（個/ml）2.41061.41062.8106死亡率（）33.33042.8622活菌數(shù)（個/ml）4.61064.21064.0106死菌數(shù)（個/ml）1.351061.61061.0106總菌數(shù)（個/ml）5.951065.81065.0106死亡率（）22.6927.5920.00第 4 頁 共 5 頁表七，酵母耐酒精實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù) 酒精含量（）菌株編號4050601活菌數(shù)（個/ml）7.01063.41063.0106死菌數(shù)（個/ml）4.61062.81063.2106總菌數(shù)（個/ml）1.161076.21066.2106死亡率（）39.6645.1651.6121活菌數(shù)（個/ml）3.21065.41064.0105死菌數(shù)（個/ml）2.21062.01064.0105總菌數(shù)（個/ml）5.41067.41068.0105死亡率（）40.7427.0350.0022活菌數(shù)（個/ml）4.81063.61062.2106死菌數(shù)（個/ml）2.01062.01064.4106總菌數(shù)（個/ml）6.81065.61066.6106死亡率（）29.4135.7166.67三株菌的耐糖、耐酒精、耐酸度的高低的比較。（1） 隨著PH值的升高，三株菌株的存貨菌體數(shù)增加，三株菌中1號菌耐受力要強(qiáng)于21號、22號兩株菌的耐受力。（2） 隨著含糖量的增加菌體存活數(shù)越來越少，相比之下21號菌的耐糖度的能力要明顯低于1號菌和22號菌；在三株菌中22號菌的耐受力最強(qiáng)，在培養(yǎng)基的含糖量達(dá)到200g/L的時候每毫升的菌體存活數(shù)仍達(dá)到4.0106個菌體。（3） 隨著培養(yǎng)基中的酒精含量增加三株菌總體上呈現(xiàn)出活菌體數(shù)量減少的趨勢，即酒精度越低存活數(shù)量越多。但是似乎21號菌呈現(xiàn)出一個先上升后下降的趨勢，21號菌在培養(yǎng)基中酒精含量達(dá)到50%時，菌體在每毫升培養(yǎng)基中含量達(dá)到5.4106之多，似乎這濃度時其適合濃度。在三株菌中1號菌的耐酒精度的能力最強(qiáng)，當(dāng)培養(yǎng)基中的酒精度達(dá)到60%是存活菌體數(shù)達(dá)到3.0106個/ml，在三株菌中是存活數(shù)最多的。3、 討論酵母菌在