江蘇省啟東市高中生物專題5血紅蛋白的提取和分離第2課時(shí)凝膠色譜法基礎(chǔ)知識(shí)練習(xí).doc

基礎(chǔ)知識(shí)：凝膠色譜法1 利用凝膠色譜法，什么樣的蛋白質(zhì)先洗脫出來(lái)（ ）A相對(duì)分子量大的 B.溶解度高的C相對(duì)分子量小的 D.所代電荷多的2 凝膠色譜法操作正確的是()A將橡皮塞上部用刀切出鍋底狀的凹穴B將橡皮塞下部切出凹穴C插入的玻璃管的上部要超出橡皮塞的凹穴底面D將尼龍網(wǎng)剪成與橡皮塞下部一樣大小的圓片3 下列對(duì)在凝膠柱上加入樣品和洗脫的操作不正確的是（）A加樣前要使柱內(nèi)凝膠面上的緩沖液下降到與凝膠面平齊B讓吸管管口沿管壁環(huán)繞移動(dòng)，貼壁加樣至色譜柱頂端，不要破壞凝膠面C打開(kāi)下端出口，待樣品完全進(jìn)入凝膠層后直接連接緩沖液洗脫瓶開(kāi)始洗脫D待紅色的蛋白質(zhì)接近色譜柱底端時(shí)，每5 mL收集一管，連續(xù)收集流出液4 下列關(guān)于現(xiàn)代生物技術(shù)應(yīng)用的敘述，錯(cuò)誤的是（）A在蛋白質(zhì)的提取和分離實(shí)驗(yàn)中，凝膠色譜法可將不同相對(duì)分子質(zhì)量的蛋白質(zhì)分離B在PCR中，引物的結(jié)構(gòu)和長(zhǎng)度決定DNA子鏈從3端向5端延伸C在蛋白質(zhì)的提取和分離實(shí)驗(yàn)中，透析的目的是去除樣品中相對(duì)分子質(zhì)量較小的雜質(zhì)D在多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)中，Taq DNA聚合酶只能特異性地復(fù)制整個(gè)DNA的部分序列5 下列各項(xiàng)中，一般不影響在凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)中的分離度的是（）A層析柱高 B層析柱的直徑C緩沖溶液 D樣品的分布6 凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)時(shí),凝膠的種類較多,但其作用的共同點(diǎn)是()A改變蛋白質(zhì)分子通過(guò)凝膠時(shí)的路徑B吸附一部分蛋白質(zhì),從而影響蛋白質(zhì)分子的移動(dòng)速度C將酶或細(xì)胞固定在細(xì)胞中D與蛋白質(zhì)分子進(jìn)行化學(xué)反應(yīng),從而影響其移動(dòng)速率7 .用凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)時(shí),相對(duì)分子質(zhì)量大的蛋白質(zhì)()A路程較長(zhǎng),移動(dòng)速度較慢 B.路程較長(zhǎng),移動(dòng)速度較快C路程較短,移動(dòng)速度較慢 D.路程較短,移動(dòng)速度較快8 生物組織中有機(jī)物的提取方法有很多種不同的有機(jī)物提取的方法各有不同（l）玫瑰精油稱為“液體黃金”，是世界香料工業(yè)不可取代的原料，提取出的玫瑰精油要求不含有任何添加劑或化學(xué)原料，其提取方法主要是 （2）杏仁油富含礦物質(zhì)和維生素，是一種質(zhì)地輕柔、高滲透性的保溫劑，主要通過(guò) 法提取（3）血紅蛋白的提取方法可以采用 ，該方法主要是利用血紅蛋白的 特性將它與其他物質(zhì)分開(kāi)的（4）提取胡蘿卜素的主要步驟：選取500g新鮮的胡蘿卜，用清水洗凈，瀝干、 ，然后在40的烘箱中烘干，時(shí)間約需2h，將干燥后的胡蘿卜進(jìn)一步粉碎過(guò)篩注意胡蘿卜的粉碎一定要徹底，主要目的是 將樣品放入500mL圓底燒瓶中，加入200mL萃取劑混勻，用萃取方法提取，萃取30min，然后過(guò)濾萃取液，除去固體物質(zhì)，萃取的效率主要取決于 用蒸餾裝置，對(duì)萃取的樣品進(jìn)行 收集接收器中的樣品9 蛋白質(zhì)分子中，氨基酸的氨基和羧基雖然大部分都能結(jié)合形成肽鍵，但是蛋白質(zhì)分子內(nèi)仍含有各種酸性基團(tuán)和堿性基團(tuán)，如肽鏈末端的氨基和羧基、天冬氨酸和谷氨酸殘基中的羧基、賴氨酸和組氨酸殘基中的各種堿性基團(tuán)，所以蛋白質(zhì)是兩性電解質(zhì)。在酸性溶液中，堿性基團(tuán)的解離程度增大，使蛋白質(zhì)帶正電荷；在堿性溶液中，酸性基團(tuán)的解離程度加強(qiáng)，使蛋白質(zhì)帶負(fù)電荷。當(dāng)溶液到達(dá)某一pH時(shí)，蛋白質(zhì)可因內(nèi)部酸性或堿性基團(tuán)的解離程度相等而呈等電狀態(tài)，這時(shí)溶液的pH叫做蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)。不處于等電點(diǎn)狀態(tài)的蛋白質(zhì)分子的正、負(fù)電荷量是不相同的。試回答下列問(wèn)題。(1)多數(shù)蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)近于5，一般含堿性基團(tuán)較多的蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)_(“偏高”還是“偏低”)(2)根據(jù)等電點(diǎn)的不同，可用_方法將不同種類的蛋白質(zhì)分子分開(kāi)。(3)簡(jiǎn)述根據(jù)等電點(diǎn)分離不同種類的蛋白質(zhì)分子的原理。_。(4)在血紅蛋白提取和分離實(shí)驗(yàn)中，對(duì)分離得到的血紅蛋白溶液要進(jìn)行透析，除去相對(duì)分子質(zhì)量較小的雜質(zhì)蛋白質(zhì)。請(qǐng)利用所給的實(shí)驗(yàn)材料對(duì)該透析實(shí)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證。實(shí)驗(yàn)?zāi)康模候?yàn)證透析的基本原理和操作。實(shí)驗(yàn)原理：_；_。實(shí)驗(yàn)材料：透析管或透析袋燒杯玻璃棒電磁攪拌器試管及試管架實(shí)驗(yàn)試劑：1 mL血紅蛋白溶液300 mL的物質(zhì)的量濃度為20 mmol/L的磷酸緩沖液(pH為7.0)實(shí)驗(yàn)步驟：_；_。10 凝膠色譜法可測(cè)定蛋白質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量，現(xiàn)有A、B兩種蛋白質(zhì)，請(qǐng)運(yùn)用凝膠色譜法完成下列實(shí)驗(yàn)，確定A、B兩種蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量的大小。(1)凝膠色譜法的原理是_。(2)材料用具：玻璃器，橡皮塞，打孔器，移液管，尼龍網(wǎng)，螺旋夾，凝膠，緩沖液。(3)實(shí)驗(yàn)步驟凝膠色譜柱的制作：注意底塞中插入的玻璃管的上部不得超出橡皮塞的_，否則難以鋪實(shí)_，還會(huì)導(dǎo)致液體殘留，蛋白質(zhì)分離不徹底。凝膠色譜柱的裝填：裝填凝膠柱時(shí)，不得有氣泡存在的原因是： _。樣品的加入和洗脫：_。(4)預(yù)期結(jié)果及結(jié)論：_。參考答案：1 答案： A解析： 凝膠色譜法是根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量的大小分離蛋白質(zhì)的有效方法。相對(duì)分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)能進(jìn)入凝膠內(nèi)部通道，路程較長(zhǎng)，移動(dòng)速度較慢；相對(duì)分子質(zhì)量大的蛋白質(zhì)，路程較短，移動(dòng)速度較快，首先洗脫出來(lái)。2 答案： A解析： 凝膠色譜柱制作時(shí)，首先選擇合適封堵玻璃管口的橡皮塞，將橡皮塞上部用刀切出鍋底狀的凹穴；插入的玻璃管的上部不得超出橡皮塞的凹穴底面；把尼龍網(wǎng)剪成與橡皮塞上部一樣大小的圓片。3 答案： C解析： 待樣品完全進(jìn)入凝膠層后，關(guān)閉下端出口，小心加入緩沖液到適當(dāng)高度，連接緩沖液洗脫瓶，打開(kāi)下端出口，進(jìn)行洗脫。4 答案： B解析： DNA復(fù)制時(shí)，DNA的合成方向總是從子鏈的5端向3端延伸，且和引物的結(jié)構(gòu)和長(zhǎng)短沒(méi)有關(guān)系。5 答案： B解析： 分離度取決于柱高，為分離不同組分，凝膠柱床必須有適宜的高度，分離度與柱高的平方根相關(guān)。樣品是否分布均勻也影響分離度，緩沖溶液的pH影響蛋白質(zhì)所帶的電荷，因此也影響分離度。只有層析柱的直徑一般不影響分離度。6 答案： A解析： 凝膠是一些微小的多孔的球體,較小的蛋白質(zhì)分子進(jìn)入凝膠內(nèi)部,所經(jīng)過(guò)的路徑長(zhǎng),所以洗脫出來(lái)較慢,而較大的蛋白質(zhì)分子則相反,并且,由于凝膠種類多,孔徑大小不同,可進(jìn)一步改變進(jìn)入凝膠內(nèi)部不同大小蛋白質(zhì)的路徑7 答案： D解析： 相對(duì)分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì),易進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道,所以路徑較長(zhǎng),移動(dòng)速度慢。相對(duì)分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)則相反。8 答案： （1）水蒸氣蒸餾法（2）壓榨（3）凝膠色譜法 相對(duì)分子質(zhì)量的大?。?）切碎 可以增加與萃取劑的接觸面積，加大萃取效率 萃取劑的性質(zhì)和使用量濃縮解析： （1）玫瑰精油主要存在于玫瑰花中，提取玫瑰精油常用的方法是水蒸氣蒸餾法（2）杏仁油主要存在于杏仁里面，用杏仁提取杏仁油常用壓榨法（3）提取血紅蛋白常用凝膠色譜法；凝膠色譜法主要是根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量的大小不同在凝膠柱內(nèi)移動(dòng)的速度不同而將分子量不同的蛋白質(zhì)分開(kāi)（4）提取胡蘿卜素的實(shí)驗(yàn)流程是：胡蘿卜粉碎干燥萃取過(guò)濾濃縮胡蘿卜素選取500g新鮮的胡蘿卜，用清水洗凈，瀝干、切碎，然后在40的烘箱中烘干；切碎胡蘿卜的目的是以增加胡蘿卜與萃取劑的接觸面積，加大萃取效率，所以胡蘿卜的粉碎一定要徹底萃取和過(guò)濾，萃取時(shí)的影響萃取效率的主要因素是萃取劑的性質(zhì)和使用量用蒸餾裝置，對(duì)萃取的樣品進(jìn)行濃縮，使萃取劑揮發(fā)，留下固體結(jié)晶胡蘿卜素9 答案： (1)偏高(2)電泳(3)調(diào)節(jié)電泳槽中緩沖液的pH，使某種蛋白質(zhì)處于等電點(diǎn)狀態(tài)，而其他蛋白質(zhì)帶有電荷，在電場(chǎng)作用下，帶有正、負(fù)電荷的蛋白質(zhì)分別移向兩極，而不帶電荷的蛋白質(zhì)留在原處。(4)實(shí)驗(yàn)原理：蛋白質(zhì)是大分子物質(zhì)，不能透過(guò)透析袋，而小分子物質(zhì)可以自由透過(guò)在分離提純蛋白質(zhì)的過(guò)程中，常利用透析的方法使蛋白質(zhì)與其中夾雜的小分子物質(zhì)分開(kāi)實(shí)驗(yàn)步驟：取1mL的血紅蛋白溶液裝入透析袋中，將透析袋放入盛有300mL的物質(zhì)的量濃度為20mmol/L的磷酸緩沖液的燒杯中不斷更換燒杯中的緩沖液，并用電磁攪拌器不斷攪動(dòng)緩沖液，以加速透析過(guò)程，透析12 h解析： 含堿性基團(tuán)較多的蛋白質(zhì)溶液，在pH近于5時(shí)解離程度較大，蛋白質(zhì)帶正電荷。要使蛋白質(zhì)內(nèi)部酸性和堿性基團(tuán)解離程度相等，呈等電狀態(tài)，必須提高溶液的pH，使酸性基團(tuán)解離程度增大，故蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)提高。根據(jù)等電點(diǎn)不同，可以利用電泳法將特定的蛋白質(zhì)分離出來(lái)。 透析是應(yīng)用半透膜的選擇性，去除分子質(zhì)量相對(duì)較小的雜質(zhì)，從而達(dá)到對(duì)血紅蛋白的粗分離。10 答案： (1)根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量的大小分離蛋白質(zhì)(3)凹穴底面 尼龍網(wǎng)氣泡會(huì)攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序，降低分離效果將A、B兩種蛋白質(zhì)的混合液加到凝膠色譜柱的上端，用緩沖液進(jìn)行洗脫，檢測(cè)它們洗脫的先后順序(4)若A先于B洗脫出來(lái)，則A的相對(duì)分子質(zhì)量大于B；若B先洗脫出來(lái)，則B的相對(duì)分子質(zhì)量大于A解析： 凝膠色譜法是根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量的大小分離蛋白質(zhì)的有效方法