(論文)不同濃度6BA對(duì)菊花出芽的影響 論(2013年優(yōu)秀畢業(yè)設(shè)計(jì)論文)

畢 業(yè) 設(shè) 計(jì)（論 文） 不同濃度6-BA對(duì)菊花出芽的影響專 業(yè) 生物技術(shù)及應(yīng)用 學(xué)生姓名 班 級(jí) 學(xué) 號(hào) 指導(dǎo)教師 完成日期 附1：成績?cè)u(píng)議學(xué)號(hào)姓名 題目 不同濃度6-BA對(duì)菊花出芽的影響 指導(dǎo)教師建議成績： 評(píng)閱教師建議成績： 答辯小組建議成績： 院答辯委員會(huì)評(píng)閱意見及評(píng)定成績：答辯委員會(huì)主任簽字（蓋章）： 年 月 日姓名學(xué)號(hào)班級(jí)題目不同濃度6-BA對(duì)菊花出芽的影響設(shè)計(jì)(論文)主要內(nèi)容以菊花嫩莖段為材料, 在MS培養(yǎng)基中分別添加0.0 (對(duì)照)、1.0、2.0、3.0、4.0 mg/L的6-BA（6-芐氨基腺嘌呤）,在相同條件下培養(yǎng)，觀察菊花的出芽誘導(dǎo)的情況。重點(diǎn)研究問題研究不濃度6-BA（6-芐氨基腺嘌呤）對(duì)菊花出芽的影響主要技術(shù)指標(biāo)植物組織培養(yǎng)技術(shù)的掌握，培養(yǎng)基配制的掌握，無菌操作技術(shù)的掌握其它要說明的問題菊花培養(yǎng)的適宜條件，菊花快繁中出現(xiàn)的異常情況與解決方法Vc對(duì)外植體褐變的抑制作用指導(dǎo)老師意見 指導(dǎo)教師簽字： 年 月 日指導(dǎo)教師意見 對(duì)論文的簡(jiǎn)短評(píng)價(jià)：1.指出論文存在的問題及錯(cuò)誤2.對(duì)創(chuàng)造性工作評(píng)價(jià)3.建議成績 優(yōu) 良 中 及格 不及格 指導(dǎo)教師簽字 年 月 日評(píng)閱教師意見 對(duì)論文的簡(jiǎn)短評(píng)價(jià)：1.指出論文存在的問題及錯(cuò)誤2.對(duì)創(chuàng)造性工作評(píng)價(jià)3.建議成績 優(yōu) 良 中 及格 不及格 評(píng)閱教師簽字 年 月 日答辯小組評(píng)議意見學(xué)號(hào)姓名 題目 不同濃度6-BA對(duì)菊花出芽的影響 答辯小組意見： 1、對(duì)論文的評(píng)價(jià)2.建議成績等級(jí) 優(yōu) 良 中 及格 不及格3.需要說明的問題 答辯小組長簽字 年 月 日畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）不同濃度6-BA對(duì)菊花出芽的影響摘要：為了探討菊花組培快繁技術(shù)中不同濃度的6-芐氨基腺嘌呤（6-BA）對(duì)芽誘導(dǎo)的影響。以菊花嫩莖段為材料, 在MS培養(yǎng)基中分別添加0.0 (對(duì)照)、1.0、2.0、3.0、4.0 mg/L的6-BA,觀察菊花的出芽誘導(dǎo)的情況。結(jié)果表明最佳出芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+6-BA 4.0mg/L + NAA0.2mg/ L。另外Vc對(duì)防止外植體褐變有明顯作用。關(guān)鍵詞：快繁技術(shù);組織培養(yǎng);菊花；褐變Effects of 6-BA with Different Concentrations on the budding of ChrysanthemumAbstract: In order to discuss the chrysanthemum group to cultivate in the quick numerous technology the different density 6- animal pen amino adenine (6-BA) pair of bud induction influence. Take the chrysanthemum tender stem section as the material, increases 0.0 separately in the MS culture medium(comparison),1.0,2.0,3.0,4.0mg/L 6-BA,the observation chrysanthemums bud induction situation. The result indicated the best bud induction culture medium is MS + 6-BA 4.0mg/L + NAA0.2mg/L .Moreover Vc to outside prevented plants the body turning brown to have the obvious function.Key words: the quick numerous technology；tissue culture；chrysanthemum；Browning目錄引言 91 材料和方法 91.1 實(shí)驗(yàn)材料和用具91.2 培養(yǎng)條件91.3 培養(yǎng)方法 102 組織培養(yǎng)中出現(xiàn)的問題與處理（包括褐變、污染） 112.1 褐變 112.2 污染113結(jié)果與分析 124小結(jié)與討論 13參考文獻(xiàn) 13致謝 14引言菊花 1 (Chrysanthemum)為菊科菊屬的多年生宿根草本植物或半灌木,又稱“菊”、“秋菊”、“黃花”。株高20200cm，通常3090。莖色嫩綠或褐色，除懸崖菊外多為直立分枝，基部半木質(zhì)化。單葉互生，卵圓至長圓形，邊緣有缺刻及鋸齒。頭狀花序頂生或腋生，一朵或數(shù)朵簇生。舌狀花為雌花，筒狀花為兩性花。舌狀花分為下、匙、管、畸四類，色彩豐富，有紅、黃、白、墨、紫、綠、橙、粉、棕、雪青、淡綠等。筒狀花發(fā)展成為具各種色彩的托桂瓣，花色有紅、黃、白、紫、綠、粉紅、復(fù)色、間色等色系?；ㄐ虼笮『托螤罡饔胁煌?，有單瓣，有重瓣；有扁形，有球形；有長絮，有短絮，有平絮和卷絮；有空心和實(shí)心；有挺直的和下垂的，式樣繁多，品種復(fù)雜。在我國已有3 000多年的栽培歷史,現(xiàn)有3 000多個(gè)栽培品種；并已成為世界性的重要花卉,其產(chǎn)銷量居四大切花之首。目前,菊花的主要繁殖方法2有扦插繁殖、分株繁殖、壓條繁殖、嫁接繁殖等,這些方法均存在一定程度的缺點(diǎn)與不足,主要表現(xiàn)為繁殖速度不快、病蟲害發(fā)生頻率高、易受季節(jié)變化影響等等,利用組織培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行菊花的快速繁殖,則可有效解決上述問題與矛盾,已越來越成為菊花繁殖的重要方法與手段,在菊花種苗生產(chǎn)上加以推廣應(yīng)用。本研究以菊花的嫩莖為外植體,利用不同濃度6-芐氨基腺嘌呤(6-BA) 和一定濃度的-萘乙酸(NAA) 為外源激素,進(jìn)行菊花的組織培養(yǎng)技術(shù)研究,旨在研究不同濃度6-BA對(duì)菊花出芽的影響。,結(jié)果報(bào)告如下：1 材料和方法1.1 實(shí)驗(yàn)材料和用具(1)材料觀賞性菊花嫩莖(2)器材與用具超凈工作臺(tái)、 解剖刀、 長柄鑷子、 架臺(tái)、無菌濾紙、 酒精燈、火柴、 標(biāo)簽、 鉛筆、棉球、廢液缸、垃圾袋、皮筋、精密pH試紙（5.47.0）、玻璃三角瓶（150ml）、封口膜、培養(yǎng)皿。(3)藥品與試劑MS培養(yǎng)基母液、激素(生長素 、細(xì)胞分裂素等)母液、有機(jī)物（瓊脂、蔗糖）、無菌水、0.1 %升汞、 70 %、75%酒精、0.1MNaOH。1.2 培養(yǎng)條件(1) 溫度適宜的溫度范圍為2426。(2) 光照光周期：以12 16h/ d 為宜。在愈傷誘導(dǎo)期進(jìn)行適量的暗培養(yǎng),有促進(jìn)愈傷形成的作用。光照強(qiáng)度：范圍為1000 4000lx, 較多選擇1500 2000lx。4000 5000lx 的光照使試管苗的分化增殖倍數(shù)提高, 但對(duì)生根則相反。(3) 光質(zhì)白色光一般能滿足生長需要。本實(shí)驗(yàn)采用一般的日光燈。1.3 培養(yǎng)方法31、接種室的滅菌在實(shí)驗(yàn)的前一天,將接種室用高錳酸鉀和甲醛熏蒸進(jìn)行滅菌消毒。2、超凈工作臺(tái)及器械消毒啟動(dòng)超凈工作臺(tái),操作之前用 70 %的酒精擦臺(tái)面。將操作用刀、 鑷子、 剪子等用具在酒精燈下用火灼燒到變紅,冷卻待用。 3、培養(yǎng)基配制 基本培養(yǎng)基為MS由6種母液按比例配成，附加蔗糖3%，瓊脂0.8%叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基：MS + 6-BA （0.0、1.0 、2.0、 3.0 、4.0）mg/ L + NAA0.2mg/ L NAA（奈乙酸）的濃度0.2 mg/ L是根據(jù)李秋杰,陳春燕,張吉3等人的研究數(shù)據(jù)得出的，其中5種6-BA濃度不同的培養(yǎng)基各配20瓶。生根培養(yǎng)基：1/ 2MS + IBA 0.1 mg/ L IBA（吲哚丁酸）的濃度0.1 mg/ L得出依據(jù)同NAA。共配100瓶。培養(yǎng)基裝瓶滅菌：將已配好的培養(yǎng)基,調(diào)節(jié)pH值為5.8。趁熱分裝在培養(yǎng)瓶中(每瓶3550mL)并注明培養(yǎng)基的成分與作用 。用專用透性膜封好后放入高壓滅菌鍋中滅菌、待用。 4、材料選取 選取在脫毒實(shí)驗(yàn)中成功移栽上盆而且長勢(shì)健壯的植株作為實(shí)驗(yàn)材料,選取莖作為實(shí)驗(yàn)材料。5、材料滅菌 選取生長健壯的嫩莖洗去表面泥土 ,在超凈工作臺(tái) ,用 75 %酒精處理 2030 秒 ,再用無菌水沖洗 35 次 ,轉(zhuǎn)入 0.1 %升汞溶液浸泡 810 分鐘 ,再用無菌水沖洗 46 次 ,用濾紙吸干水分。6、接種（1） 在無菌條件下將其切成2厘米左右?guī)в幸秆康男《?。?） 用鑷子夾取切好的外植體材料,然后按極性方向直立迅速接種到錐形瓶的培養(yǎng)基中,深約 23 mm,注意培養(yǎng)瓶口始終在火焰下方,盡量使切口接觸培養(yǎng)基。（3） 每個(gè)錐形瓶可接種 3 塊外植體。（4） 接種時(shí)錐形瓶應(yīng)保持傾斜,接種后要迅速將瓶口在酒精燈上轉(zhuǎn)動(dòng)灼燒一遍進(jìn)行消毒,然后迅速蓋上專用透性膜封好。（5） 最后在瓶壁上貼上標(biāo)簽,注明接種材料的名稱、 編號(hào)和接種日期。（6） 接種完成后即轉(zhuǎn)入培養(yǎng)室進(jìn)行初代培養(yǎng) ,培養(yǎng)溫度2228 ,光強(qiáng)10004000 Lx。7、愈傷組織及叢生芽誘導(dǎo)外植體接種到培養(yǎng)基上7天左右，莖段開始變粗，并在其切口周圍出現(xiàn)少量嫩綠色、質(zhì)地緊密的愈傷組織，同時(shí)腋芽開始萌動(dòng)展開。經(jīng)過105天的培養(yǎng)后，腋芽伸長，并形成叢生芽，逐漸長成苗叢。此時(shí)記錄出芽瓶數(shù)并比較不同濃度6-BA下的出芽瓶數(shù)。8、根的誘導(dǎo)當(dāng)叢生芽長成的小苗達(dá)23厘米時(shí)，將其切下轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基，大約一周左右的培養(yǎng)，小苗開始生根。2 組織培養(yǎng)中出現(xiàn)的問題與處理（包括褐變、污染）2.1 褐變外植體的褐變是組織培養(yǎng)過程中的主要障礙。目前一般認(rèn)為影響褐變的因素主要有外植體材料、培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件。為了防止褐變的發(fā)生，主要可以從外植體和培養(yǎng)條件、進(jìn)行細(xì)胞篩選和材料的預(yù)處理、抑制劑或者吸附劑的加入等方面入手8-11。主要方法有：（1）在培養(yǎng)基中加入吸附劑可以抑制褐變。（2）組織培養(yǎng)過程中可以在培養(yǎng)基加入抗氧化劑和其他抑制劑來抑制外植體的酶促褐變。（3）在愈傷組織誘導(dǎo)中，接種前先用100 mg/ L Vc（L-抗壞血酸） 浸泡外植體1 h ,可有效地控制褐變現(xiàn)象。（4）褐變程度與外植體的傷害程度有關(guān)，在切取材料時(shí)，應(yīng)盡量減小傷口面積，傷口剪切得盡可能平滑。我們采用方法（3）即在接種前先用100 mg/ L Vc 浸泡外植體1 h進(jìn)行重新試驗(yàn)。并記錄了2次實(shí)驗(yàn)結(jié)果。2.2 污染污染一般分為真菌性污染和細(xì)菌性污染,其來源可分成3大類:材料帶菌,接種污染,培養(yǎng)過程感染。細(xì)菌污染主要由于材料內(nèi)部的內(nèi)生細(xì)菌不能被一般的表面消毒方法所清除，隨著材料帶入培養(yǎng)過程，從而引起組培中的污染，從污染狀態(tài)來看，是發(fā)生于植物材料周圍，一般會(huì)由培養(yǎng)基內(nèi)向外延展，并且發(fā)生的時(shí)間也會(huì)比接觸性污染要長，接觸性的細(xì)菌一般在24天表現(xiàn)，內(nèi)生菌則會(huì)超過4天，并且菌的種類也相對(duì)單一。而真菌污染主要有曲霉，毛霉，青霉，根霉等。根據(jù)研究資料12得出染菌的原因有接種室空氣中真菌含量高，超凈工作臺(tái)、操作所需的機(jī)械未消毒干凈，接種時(shí)操作人員的操作失誤等3結(jié)果與分析由于培養(yǎng)過程中出現(xiàn)異常情況，我們通過查閱資料解決后再次試驗(yàn)，記錄統(tǒng)計(jì)后得出下表：表1：Vc對(duì)外植體褐變的影響培養(yǎng)基接種瓶數(shù)/瓶沒用Vc前褐變瓶數(shù)/瓶用了Vc后褐變瓶數(shù)/瓶MS+6-BA0.0mg/L+NAA0.2mg/L20114MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L2072MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L2062MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.2mg/L2062MS+6-BA4.0mg/L+NAA0.2mg/L2051表2：不同濃度6-BA培養(yǎng)基對(duì)菊花出芽的影響培養(yǎng)基6-BA與NAA的濃度配比接種芽數(shù)/個(gè)出芽數(shù)目/個(gè)出芽率/%MS+6-BA0.0mg/L+NAA0.2mg/L020*358.27%MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L1：220*32643.33MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L1：120*33761.67MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.2mg/L1.5:120*34371.67MS+6-BA4.0mg/L+NAA0.2mg/L2:120*35083.33表1表明：Vc對(duì)外植體的褐變有明顯的抑制作用，這與崔唐兵，郭勇，張長遠(yuǎn)的研究結(jié)果10相符合。表2表明：在芽誘導(dǎo)后通過比較5種培養(yǎng)基出芽瓶數(shù)得出6-BA濃度為4.0 mg/L的培養(yǎng)基出芽瓶數(shù)為最多，出芽率高達(dá)80%多。并且得出4.0mg/L6-BA+0.2，mg/LNAA為最佳濃度配比，對(duì)菊花出芽的正效果最顯著。即6-BA與NAA的濃度配比越的，對(duì)芽的誘導(dǎo)效果越好，這一結(jié)論與高亦珂等13 和李辛雷等14 的研究結(jié)果一致。4小結(jié)與討論通過不同濃度6-BA對(duì)菊花芽誘導(dǎo)的影響試驗(yàn)得出:在相同的環(huán)境條件和其余影響因素不變的情況下，不同濃度的6-BA(6-芐氨基腺嘌呤)對(duì)菊花出芽都有著有益的影響，其中6-BA濃度為4.0 mg/L的培養(yǎng)基對(duì)菊花的出芽效果最佳,菊花的出芽數(shù)最多。即得出培養(yǎng)基中6-BA濃度在1.0-4.0 mg/L范圍內(nèi)時(shí)，6-BA濃度與NNA濃度的配比越高，出芽數(shù)就越多，出芽效果就越好。但該試驗(yàn)只是對(duì)5種不同濃度6-BA與一定濃度的NAA的配比進(jìn)行試驗(yàn)得出的結(jié)論,還存在片面性。菊花在什么條件下出芽數(shù)最多,還有待于進(jìn)一步研究。參考文獻(xiàn)：1 熊濟(jì)華. 菊花M. 上海:科學(xué)技術(shù)出版社, 1998.2 王鳳祥, 王月娥, 王雅芳, 馬長春. 菊花的繁殖方法. 內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)科技,2007(3) : 1043 李秋杰,陳春燕,張吉. 6-BA 和NAA 對(duì)菊花葉片離體再生的影響. 長江大學(xué)學(xué)報(bào)(自科版) 農(nóng)學(xué)卷2007 年9 月第4 卷第3 期4 建德鋒,趙文若,趙海鋒, 陳剛.菊花組織培養(yǎng)技術(shù)研究. 北方園藝,2007(9): 2002015 余義和,李桂榮,王新娟.菊花離體培養(yǎng)體系的優(yōu)化.陜西農(nóng)業(yè)科學(xué)，2006（4）6 李力藝,侯志鋼.菊花組織培養(yǎng)技術(shù)研究.山西農(nóng)業(yè)科學(xué)，2004，2：50-527 焦德志,李波,魏明麗,孫琦.菊花的快速繁殖.北方園藝，2007(6): 208-210 (2):1316.8高國訓(xùn).植物組織培養(yǎng)中的褐化問題J.植物生理學(xué)通訊,1999,35(6): 5019王東霞、李長杰.如何對(duì)抗植物組織褐變J.中國花卉盆景，2