蠟樣芽孢桿菌的檢測.ppt

,（第一次課）,蠟樣芽胞桿菌概述,一 形態(tài)與染色,本菌是革蘭氏陽性桿菌，1.01.2m35m,菌體兩端鈍圓，有鞭毛，無莢膜，多成短鏈狀排列。 本菌生長6小時以后可以既可以形成芽孢，形成的芽孢小于菌體橫徑，位于中心或稍偏于一端。,營養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上可生長良好，最適宜溫度為2835。菌落較大，不透明，表面粗糙似毛玻璃狀或蠟狀，邊緣常成擴(kuò)展?fàn)睢?在普通肉湯上培養(yǎng)基呈渾濁生長，常形成菌膜或壁環(huán)，震搖易乳化。,二 培養(yǎng)特性,三 流行病學(xué),蠟樣芽胞桿菌,病原菌,條件致病菌,腸毒素,耐熱,不耐熱,食物中毒,人或動物 非腸道傳染病,eg:結(jié)膜炎,嘔吐型 污染食品：米飯 我國多見,腹瀉型 污染食品：蛋白型食品及果汁 歐美等國多見,污染途徑： 泥土和灰塵 昆蟲 不潔用具 不衛(wèi)生的食品從業(yè)人員,實驗?zāi)康?不發(fā)酵甘露醇：在甘露醇-卵黃-多粘菌素（MYP）瓊脂平板上生成微粉紅色菌落。 產(chǎn)生卵磷脂酶：分解MYP瓊脂中的卵磷脂，在菌落周圍產(chǎn)生粉紅色混濁環(huán)（沉淀環(huán)）。 產(chǎn)生酪蛋白酶：分解培養(yǎng)基中的酪蛋白，生成L-酪氨酸在菌落周圍形成透明圈。,實驗原理：蠟樣芽胞桿菌具有以下生化特性：,產(chǎn)生溶血素：使胰酪胨大豆羊血瓊脂（TSSB）中的血細(xì)胞發(fā)生溶血。 產(chǎn)生明膠酶：將明膠水解為多肽再水解為氨 基酸而使其由半固體轉(zhuǎn)化為液態(tài)狀。 觸酶實驗: 產(chǎn)生過氧化氫酶分解過氧化氫生成水和氧氣。 動力和硝酸鹽試驗: 蠟樣芽胞桿菌運動活潑,能還原硝酸鹽為亞硝酸鹽。,實驗材料,甘露醇-卵黃-多粘菌素（MYP）瓊脂平板 營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基 L-酪氨酸營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基 胰酪胨大豆羊血瓊脂(TSSB) 動力-硝酸鹽生化鑒定管 木糖-明膠生化鑒定管 硝酸鹽試劑(1%對氨基苯磺酸溶液, 0.2% -萘胺溶 液) 3%的雙氧水 革蘭染液,檢樣 50g(mL)+450mL無菌磷酸鹽緩沖稀釋液,10-110-6稀釋液,30C , 24h,形態(tài)觀察 菌數(shù)測定,選擇性培養(yǎng)基 MYP,營養(yǎng)瓊脂,30C , 24h,革蘭染色,生長及菌落觀察,鑒別試驗,生化反應(yīng),腸毒素測定,報告,檢驗程序,實驗步驟,1 樣品的保存和送檢 待檢樣品應(yīng)保持在6以下運送并盡可能不使其冷凍。對可疑是該菌引起的食物中毒的病人，應(yīng)取可疑食物或病患者的嘔吐物、糞便，且立刻在3小時內(nèi)送檢。送達(dá)實驗室后，應(yīng)保存于4并盡快檢驗。,實驗步驟,2：樣品稀釋及計數(shù)：,各稀釋度0.1mL，L型玻棒均勻涂布,MYP 瓊脂平板,計菌落數(shù),30 ，24h,10-1,10-6,3 分離培養(yǎng),計數(shù)后，從每個平板選取5個已計數(shù)的菌落分別接種于營養(yǎng)瓊脂斜面做純培養(yǎng)，30培養(yǎng)24h，進(jìn)行形態(tài)觀察和證實試驗。,第二次課,分類,需氧芽孢桿菌根據(jù)芽孢囊膨大與否及芽孢的形狀，可將其分為3個群。第一群的芽孢不突出菌體，形成的芽孢為橢圓形或圓柱形；第二類的芽孢囊突出菌體，形成的芽孢為橢圓形；第三群的芽孢囊突出菌體形成的芽孢為球形。 蠟樣芽胞桿菌屬于第一群。該群內(nèi)細(xì)菌，根據(jù)營養(yǎng)型細(xì)胞的寬度可以又分為兩類，其中寬度0.9m者稱大細(xì)胞群，該群有蠟樣芽胞桿菌、蕈狀芽孢桿菌、紫云金芽孢桿菌、炭疽芽胞桿菌、巨大芽孢桿菌。這幾種與蠟樣芽胞桿菌形態(tài)上相似的4個菌種必須用微生物學(xué)和生化學(xué)試驗進(jìn)行鑒別。,4 證實試驗,L-酪氨酸瓊脂培養(yǎng)基,預(yù)實驗營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基,菌落形態(tài)觀察,鏡檢觀察菌體,生化實驗,卵磷脂酶實驗,L-酪氨酸分解實驗,動力與硝酸鹽還原實驗,革蘭染色,MYP瓊脂平板,動力-硝酸鹽生化鑒定管,鑒別試驗,1 形態(tài)觀察,本菌革蘭染色陽性，呈短鏈或長鏈，芽孢位于菌體中央或偏端，不是菌體脹大。,1 MYP平板上：粉紅色菌落，菌落周圍產(chǎn)生粉紅色渾濁圈。 2 L-酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基：菌落周圍形成透明圈。 3 觸酶試驗：加入過氧化氫后30秒產(chǎn)生氣泡。 4 TSSB平板上：菌落周圍產(chǎn)生的溶血圈。（在菌落周圍出現(xiàn)一個大小不一的完全透明清楚的寬帶）。 紫云金芽孢桿菌和蕈狀芽孢桿菌呈現(xiàn)弱得溶血現(xiàn)象，而炭疽芽胞桿菌通常不溶血。 5 動力-硝酸鹽生化鑒定管：細(xì)菌沿穿刺線擴(kuò)散生長，加硝酸鹽試劑后培養(yǎng)基變紅。 蕈狀芽孢桿菌常常呈絨毛狀生長，蠟樣和紫云金芽孢桿菌通常運動極為活潑，而炭疽芽胞桿菌則不運動。,2 實驗結(jié)果,實驗結(jié)果,3 計數(shù)（表面涂布法）,1克樣品中含的蠟樣芽孢桿菌數(shù)：,舉例：將