[生物醫(yī)藥論文精品]雷公藤藥材及制劑的HPLC指紋圖譜研究.doc

雷公藤藥材及制劑的hplc指紋圖譜研究 摘要 目的：建立雷公藤藥材及制劑的hplc指紋對(duì)照測(cè)定法，為雷公藤質(zhì)量控制提供參考。方法：采用c18色譜柱，甲醇-水為流動(dòng)相梯度洗脫，測(cè)定雷公藤藥材及制劑的hplc指紋圖譜，統(tǒng)計(jì)分析確定共有模式；以最接近共有模式的雷公藤藥材和制劑為指紋對(duì)照，采用夾角余弦法和相對(duì)歐氏距離法，分別從化學(xué)成分定性和含量?jī)蓚€(gè)方面對(duì)不同產(chǎn)地雷公藤藥材和主要市售雷公藤片劑的hplc指紋圖譜進(jìn)行定性與定量相似性評(píng)價(jià)。結(jié)果：建立的雷公藤藥材及制劑的hplc指紋圖譜測(cè)定條件分離良好、專屬性強(qiáng)，可用于全面控制雷公藤的質(zhì)量。結(jié)論：以指紋對(duì)照品為參照進(jìn)行雷公藤藥材及制劑指紋圖譜相似性評(píng)價(jià)，重復(fù)性和耐用性良好。測(cè)得雷公藤藥材及制劑的指紋特征差異顯著。關(guān)鍵詞：雷公藤藥材；雷公藤片劑；雷公藤內(nèi)酯醇；指紋圖譜；高效液相色譜法study of tripterygium wilfordii hook. f and tripterygium tablets by hplc fingerprint chromatogram abstract objective: to establish a stable and repeatable hplc reference fingerprint chromatogram standard for the quality analysis and control of tripterygium wilfordii hook. f. and its preparations. methods: hplc separation was performed on a c18 column with methanol-water as mobile phase in a gradient elution mode. the reference fingerprint chromatogram was determined as the most typical chromatogram that represented most properties of tripterygium wilfordii hook. f. and tripterygium tablets, respectively, from both constitutes and quantity view of points, established by statistical and similarity analyses. results: the results indicate that the quality assessments of tripterygium wilfordii hook. f. and tripterygium tablets with reference to the concomitantly measured hplc reference fingerprint chromatograms have good ruggedness, specificity, and reproducibility. conclusion: the fingerprint chromatograms of tripterygium wilfordii hook. f. and its preparations can be quantitatively and qualitatively evaluated by comparison with the established fingerprint reference standards by using cosine q and relative euclid distance methods, respectively. the fingerprint chromatograms of both tripterygium wilfordii hook. f. and its preparations varies significantly.key words: tripterygium wilfordii hook. f.; tripterygium tablets; triptolide; fingerprint chromatogram; hplc 雷公藤(tripterygium wilfordii hook. f.)系衛(wèi)矛科雷公藤屬植物，產(chǎn)于浙江、安徽、江西、湖南、廣東、廣西、福建、云南等地，同屬植物還包括昆明山海棠(tripterygium hypoglaucum hutch)、東北雷公藤(tripterygium regelii sprague et takeda)。雷公藤是一味傳統(tǒng)中藥，具有抗炎、免疫抑制、抗腫瘤、抗生育等活性1，這些作用是由其所含的二萜和三萜內(nèi)酯、及生物堿等多種成分的協(xié)同作用所產(chǎn)生的2。雷公藤多苷是從衛(wèi)矛科植物雷公藤根中提取出來(lái)的一些次代謝物的混合體,具有抗炎和免疫抑制作用，在臨床上雷公藤多苷片廣泛用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎3，并在抗腫瘤方面具有良好的應(yīng)用前景4，其抗生育活性也曾受到關(guān)注5。但是，雷公藤藥材和制劑都有明顯的毒副作用，臨床安全使用的治療劑量較小、治療窗較窄，藥材、分離制備工藝、服用劑量不合理等多種因素都會(huì)導(dǎo)致服藥后的毒性反應(yīng)6。 盡管已有大量的雷公藤化學(xué)成分的分離鑒定研究和雷公藤內(nèi)酯(雷公藤多苷)的藥理研究報(bào)道2,69，但是臨床上廣泛使用的“雷公藤多苷”產(chǎn)品大都僅對(duì)所含的雷公藤內(nèi)酯醇(雷公藤甲素)或雷公藤酯甲進(jìn)行測(cè)定控制1012，中藥成方制劑標(biāo)準(zhǔn)13-14中分別以雷公藤酯甲與雷公藤內(nèi)酯醇作為指標(biāo)，使用薄層掃描法進(jìn)行測(cè)定，控制指標(biāo)準(zhǔn)確性較差。其化學(xué)成分的整體系統(tǒng)分析控制研究和實(shí)際應(yīng)用很少，僅見(jiàn)有對(duì)雷公藤葉提取物指紋圖譜的報(bào)道15。 中藥指紋圖譜是目前已被國(guó)內(nèi)外廣泛接受的一種天然藥物質(zhì)量評(píng)價(jià)模式，本文以“指紋對(duì)照品對(duì)照” 16，分別采用夾角余弦法和相對(duì)歐氏距離法17從化學(xué)成分定性和定量?jī)蓚€(gè)方面對(duì)雷公藤藥材及其制劑進(jìn)行雷公藤內(nèi)酯整體質(zhì)量進(jìn)行多指標(biāo)化學(xué)成分分析控制，為雷公藤制劑質(zhì)量的整體控制提供參考，以保障臨床用藥的安全。1 儀器與試藥 shimadzu 2010高效液相色譜儀(日本島津公司)，lc solution色譜數(shù)據(jù)工作站(日本島津公司)；satorious電子分析天平(德國(guó)賽多利斯股份公司)；kq3200e醫(yī)用超聲清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。無(wú)水甲醇、無(wú)水乙醇、乙酸乙酯、乙醚、二氯甲烷和石油醚均為分析純(南京化學(xué)試劑廠)；中性氧化鋁(100200目)；水為重蒸水。 雷公藤藥材為tripterygium wilfordii hook. f.的干燥根及根莖，分別于20072008年購(gòu)自廣西、福建、四川、浙江、湖南等地，由南京師范大學(xué)生命科學(xué)院龔祝南教授鑒定(見(jiàn)表1)。雷公藤片劑：市售(見(jiàn)表2)。 雷公藤內(nèi)酯醇(批號(hào)111567-200502)、雷公藤酯甲(批號(hào)111597-200402)對(duì)照品分別購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所。表1 雷公藤藥材來(lái)源tab. 1 origin of tripterygium wilfordii hook. f. 表2 雷公藤多苷片來(lái)源tab. 2 origin of tripterygium tablets2 溶液的制備2.1 藥材供試品溶液的制備 取雷公藤藥材粉末(過(guò)40目篩)約5.0g，精密稱定，加無(wú)水乙醇100ml，浸泡過(guò)夜后水浴加熱回流2h，慢速濾紙抽濾，用20ml無(wú)水乙醇分次洗滌殘?jiān)?，合并濾液，將濾液于50水浴減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，精密加入無(wú)水乙醇20ml復(fù)溶，定量移取15ml，置中性氧化鋁柱中性氧化鋁5.0 g，柱內(nèi)徑0.81.0 cm，用石油醚(6090)-乙酸乙酯(1:4)5 ml預(yù)洗上，用石油醚-乙酸乙酯(1:4)50 ml洗脫，收集洗脫液，于45水浴減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，殘留物精密加入1ml甲醇-水(80:20)溶解，用微孔濾膜(0.45 m)濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。2.2 制劑供試品溶液的制備 取雷公藤片劑10片，除去薄膜衣，精密稱定，研細(xì)，取細(xì)粉約0.5g，精密稱定，置25 ml量瓶中，加無(wú)水乙醇約20 ml，密塞，超聲處理(120 w，40 khz)60 min，冷至室溫，加無(wú)水乙醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液15 ml，置中性氧化鋁柱中性氧化鋁1.0 g，柱內(nèi)徑0.81.0 cm，用石油醚-乙酸乙酯(1:4)5 ml預(yù)洗上，用石油醚-乙酸乙酯(1:4)30 ml洗脫，收集洗脫液，于45水浴減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，后續(xù)步驟同“2.1” 項(xiàng)。3 指紋圖譜的建立3.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性 用phenomenex luna c18 (4.6 mm250 mm, 5 m)色譜柱，甲醇(a)-水(b)為流動(dòng)相，梯度洗脫：0min(a40%)120min(a70%)；流速1.0 ml min-1；檢測(cè)波長(zhǎng) 218 nm；柱溫為35 。在上述色譜條件下，雷公藤內(nèi)酯醇色譜峰與相鄰色譜峰分離度大于1.5。3.2 測(cè)定方法 精密量取供試品溶液20 l，注入色譜儀，記錄色譜圖。以雷公藤內(nèi)酯醇的保留時(shí)間和峰面積為參比計(jì)算各指紋峰的相對(duì)保留時(shí)間()和相對(duì)峰面積(ar%)。按夾角余弦和相對(duì)歐氏距離法分別計(jì)算指紋圖譜定性和定量相似度。3.3 特征峰的確定 分別測(cè)定各批雷公藤藥材和制劑的hplc指紋圖譜，經(jīng)比較分析后確定藥材指紋共有峰32個(gè)，制劑共有峰30個(gè)。圖1為雷公藤藥材和制劑的典型hplc指紋圖譜和空白樣品色譜圖。選擇主要特征有效成分雷公藤內(nèi)酯醇峰為參照峰(s峰)。圖1 hplc指紋圖譜(a)雷公藤藥材， (b)雷公藤片fig. 1 hplc fingerprint chromatograms of (a) tripterygium wilfordii hook. f. and (b) tripterygium tablets3.4 方法驗(yàn)證 在“2.1”項(xiàng)的條件下制備福建藥材供試樣品，在“2.2”項(xiàng)的條件下制備上海復(fù)旦復(fù)華藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的雷公藤片劑(批號(hào)070302)為制劑供試樣品。對(duì)同一供試品溶液，連續(xù)測(cè)定6次，考察精密度；對(duì)同一供試品溶液分別放置0，2，4，6，12，24 h分別測(cè)定，考察穩(wěn)定性；取同一批供試品，制備供試品溶液6份，分別測(cè)定，考察重復(fù)性。結(jié)果表明：以雷公藤內(nèi)酯醇為參比，藥材和制劑各指紋色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積重復(fù)性良好，rsd均小于5.0%，符合指紋圖譜的要求。4 特征成分含量測(cè)定4.1 雷公藤內(nèi)酯醇含量測(cè)定4.1.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取雷公藤內(nèi)酯醇對(duì)照品適量，加甲醇溶解，制成每1 ml含雷公藤內(nèi)酯醇44 g的對(duì)照溶液。4.1.2 線性關(guān)系 精密稱取雷公藤內(nèi)酯醇對(duì)照品適量，少量甲醇溶解后用甲醇-水（80:20）定量逐級(jí)稀釋配制成濃度分別為8，16，40，80，和160 mgl-1的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，在“3.1”項(xiàng)色譜條件下測(cè)定，以質(zhì)量濃度(c，mgl-1)為橫坐標(biāo)，以峰面積(a)為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸。結(jié)果表明，雷公藤內(nèi)酯醇進(jìn)樣濃度在8160 mg l-1范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系，回歸方程為：a=4.304104c+2.091104 r=0.9999。4.1.3 回收率 精密稱取福建產(chǎn)地藥材和南京軍區(qū)南京總醫(yī)院 (批號(hào)060530)已測(cè)知雷公藤內(nèi)酯醇含量的樣品各9份，分別加入相當(dāng)于樣品中已知量80%，100%和120%的對(duì)照品溶液(44 gml-1)后分別照“2.1”項(xiàng)和“2.2”項(xiàng)下方法制備藥材及制劑回收率測(cè)定用樣品溶液，低、中、高濃度各3份，在“3.1”項(xiàng)色譜條件下測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表3。平均回收率及rsd均符合中藥質(zhì)量控制的要求。表3 雷公藤內(nèi)酯醇加樣回收率結(jié)果tab. 3 the addition recovery of triptolide4.1.4 樣品測(cè)定 分別按“2.1”項(xiàng)和“2.2”項(xiàng)下方法制備雷公藤藥材(見(jiàn)圖2)和雷公藤片劑(見(jiàn)圖3)供試品溶液，在“3.1”項(xiàng)色譜條件下測(cè)定，以外標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算各產(chǎn)地、廠家供試品溶液雷公藤內(nèi)酯醇的含量，結(jié)果見(jiàn)表4。圖2 不同產(chǎn)地雷公藤藥材hplc指紋圖譜 （18樣品編號(hào)，同表1）fig. 2 fingerprint chromatogram of tripterygium wilfordii hook. f samples from different origins (sample no., same as tab 1)圖3 不同廠家生產(chǎn)的雷公藤片劑hplc指紋圖譜 （19樣品編號(hào)，同表2）fig. 3 fingerprint chromatogram of tripterygium tablets samples from different manufactory (sample no., same as tab 2)表4 含量測(cè)定結(jié)果(平均值sd, n= 3；樣品編號(hào)同表1、表2)tab 4 assay results (meansd, n= 3; sample no., same as tab 1 and tab 2)5 指紋圖譜相似度評(píng)價(jià) 以?shī)A角余弦為定性相似度指標(biāo)，對(duì)“4.3”項(xiàng)下所測(cè)得8批雷公藤藥材和8批雷公藤片劑樣本（9號(hào)制劑與其它制劑有顯著性差異，不用于共有模式建立）的指紋圖譜分別以平均值法建立共有模式，以?shī)A角余弦法和相對(duì)歐氏距離法分別進(jìn)行定性和定量相似度計(jì)算，分析確定最接近共有模式的藥材和制劑為指紋對(duì)照品。結(jié)果，桂林產(chǎn)藥材和黃石飛云制藥有限公司生產(chǎn)的雷公藤片劑分別被確定為藥材和制劑的指紋對(duì)照品。以指紋對(duì)照品圖譜為參照，分別計(jì)算各藥材樣本與參照之間的定性相似度(cosq)和定量相似度(red)。結(jié)果見(jiàn)表5。結(jié)果表明，無(wú)論是不同產(chǎn)地的藥材還是不同廠家生產(chǎn)的制劑，在定性和定量相似度上都有較大差異。表5 雷公藤藥材和制劑的相似度計(jì)算結(jié)果(樣品編號(hào)同表1、表2)tab. 5 the result of similarity of tripterygium wilfordii hook. f. and tripterygium tablets (sample no., same as tab 1 and tab 2)6 lc-ms/ms法分析雷公藤制劑化學(xué)成分6.1 供試品溶液制備 分別按上述“2.1”項(xiàng)和“2.2”項(xiàng)制備福建產(chǎn)地藥材和上海復(fù)旦復(fù)華藥業(yè)有限公司樣品(批號(hào)070302)供試品溶液。6.2 液相色譜條件 色譜柱：agilent hc-c18 (4.6mm250mm,5m)；柱溫35 ；流動(dòng)相a：甲醇，流動(dòng)相b：水；梯度洗脫：060 min時(shí)流動(dòng)相a 為35%52%，60140 min 時(shí)流動(dòng)相a為52%70%，140143 min時(shí)流動(dòng)相a為70%90%，143145 min時(shí)流動(dòng)相a為90%35%，145150 min時(shí)流動(dòng)相a為35%，流速：1.0 ml min-1。6.3 質(zhì)譜檢測(cè)條件 大氣壓化學(xué)離子化(apci)正離子檢測(cè)，電流8.0ma，霧化溫度450，霧化氣壓30psi，輔助氣壓力10psi，毛細(xì)管溫度350，碰撞氣氬氣壓力1.2mtorr，碰撞能量30ev。采用一級(jí)離子全掃描和子離子全掃描兩種方法進(jìn)行測(cè)定。對(duì)供試品溶液的lc-ms/ms全掃描質(zhì)量范圍分為300400、400500和700950三部分。6.4 主要特征色譜峰的鑒別 對(duì)供試品溶液先在液相色譜條件下取得較好分離，按照一級(jí)質(zhì)譜全掃描方式獲得加合離子峰的信息，圖4為一級(jí)質(zhì)譜全掃描的總離子流色譜圖；再在30ev的碰撞能量下進(jìn)行二級(jí)質(zhì)譜子離子全掃描，獲得的主要色譜峰的加合離子及特征碎片離子。圖 4 一級(jí)質(zhì)譜全掃描的總離子流色譜圖：a 雷公藤多苷片，b 雷公藤藥材fig. 4 fullscan chromatogram of sample: a tripterygium tablets, b tripterygium wilfordii hook. f. 經(jīng)過(guò)相應(yīng)對(duì)照品溶液比對(duì)，1、2、14、17號(hào)峰分別為雷公藤內(nèi)酯三醇、雷公藤內(nèi)酯醇、雷公藤吉堿和雷公藤次堿，并將lc-ms/ms測(cè)定的結(jié)果與已有文獻(xiàn)報(bào)道的化合物相對(duì)照，對(duì)主要特征色譜峰進(jìn)行初步鑒別，表6列出了對(duì)應(yīng)于相應(yīng)質(zhì)荷比可能存在的生物堿名稱、特征碎片離子、分子式和分子量。表6 特征色譜峰鑒別tab. 6 active components of chromatogram7 討論與小結(jié)7.1 提取條件的選擇 提取雷公藤藥材時(shí)，由提取溶劑種類、液料比、回流時(shí)間三因素設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)，并結(jié)合工業(yè)生產(chǎn)的實(shí)際情況對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)一步優(yōu)化。結(jié)果表明使用無(wú)水乙醇為溶劑，與藥材比例20:1，回流提取2h為最優(yōu)條件，藥材中各主要成分提取較完全。另外，在此基礎(chǔ)上結(jié)合文獻(xiàn)18考察了制劑的不同提取方法和提取時(shí)間，由于制劑中主要成分含量較高且較易提取，最終選擇了較為簡(jiǎn)便的無(wú)水乙醇超聲提取方法。7.2 脫色與洗脫條件選擇 試驗(yàn)采用中性氧化鋁脫色，目的是除去樣品中的色素與極性雜質(zhì)。研究比較了無(wú)水乙醇、乙酸乙酯、乙醚、二氯甲烷、不同比例的乙酸乙酯-石油醚等多種洗脫劑。結(jié)果表明乙酸乙酯-石油醚(4:1)可較好地將藥材和制劑中包括雷公藤內(nèi)酯醇在內(nèi)的內(nèi)酯類成分洗脫出來(lái)。洗脫劑用量考察發(fā)現(xiàn)，洗脫劑體積分別為50 ml和30 ml可分別將5.0g藥材及0.5g制劑樣品中內(nèi)酯類成分洗脫完全，并有效消除色素干擾。7.3 色譜條件的選擇 由于雷公藤含有的成分較多，極性差別大， hplc等度洗脫法難以完全分離。故采用hplc梯度洗脫法測(cè)定，分離度高，重現(xiàn)性好，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。雷公藤內(nèi)酯醇僅有uv末端吸收，故選擇218 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。7.4 指紋參照峰的選擇 雷公藤內(nèi)酯醇是雷公藤藥材中已知主要有效成分之一，亦是有毒成分之一，生藥中也多以雷公藤內(nèi)酯醇評(píng)價(jià)藥材質(zhì)量的好壞19，以其作為主要檢測(cè)指標(biāo)。中藥成方制劑標(biāo)準(zhǔn)中也以雷公藤內(nèi)酯醇與雷公藤酯甲作為檢測(cè)指標(biāo)。在建立的色譜條件下，雷公藤內(nèi)酯醇色譜峰與相鄰色譜峰分離度良好，且與雷公藤內(nèi)酯醇相比其它成分單體對(duì)照品較難得到，故選擇雷公藤內(nèi)酯醇為指紋參照。7.5 雷公藤酯甲含量測(cè)定 雷公藤酯甲是雷公藤三萜類的強(qiáng)活性代表物質(zhì)，為此類制劑質(zhì)量控制的另一個(gè)重要檢測(cè)指標(biāo)，但由于雷公藤酯甲與雷公藤內(nèi)酯醇極性差異較大，很難在一定時(shí)間的梯度洗脫程序內(nèi)同時(shí)檢測(cè)，故本實(shí)驗(yàn)另外建立了測(cè)定雷公藤酯甲的方法。色譜柱：agilent hc c18色譜柱(4.6 mm150 mm,5 m)；流動(dòng)相：甲醇-0.1%磷酸(80：20)；流速：1.0 ml min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)：210 nm；樣品處理方法同上述“2.1”項(xiàng)和“2.2”項(xiàng)。各產(chǎn)地藥材及各廠家制劑含量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表4，結(jié)果顯示無(wú)論藥材還是制劑中雷公藤酯甲含量差異均較大。7.6 雷公藤藥材與制劑指紋圖譜比較與探討 從指紋圖譜和相似度計(jì)算結(jié)果均可看出，無(wú)論是不同產(chǎn)地的藥材還是不同廠家生產(chǎn)的制劑，在定性和定量相似度上都有較大差異。藥材的差異主要是由于不同部位、不同產(chǎn)地、不同采收期的化學(xué)成分分布與含量的不同。而制劑的差異除了采用的藥材具有以上差異之外，不同的生產(chǎn)工藝是另一個(gè)主要因素。 本實(shí)驗(yàn)比較了藥材不同部位的差別：取浙江麗水產(chǎn)地雷公藤全株藥材的干燥根、莖、葉分別處理測(cè)定。結(jié)果表明：雷公藤葉中雷公藤內(nèi)酯醇含量顯著高于根和莖，其它成分的含量相對(duì)較少；根中生物堿成分占絕大部分，萜類成分含量很少；莖較根而言生物堿成分含量相對(duì)較少而萜類成分含量相對(duì)較多。因此，選取的藥材部位不同或者不同部位的比例不同可能為不同廠家生產(chǎn)的雷公藤片劑質(zhì)量差異較大的原因之一。例如，南京軍區(qū)南京總醫(yī)院生產(chǎn)的雷公藤制劑是采用雷公藤葉提取而成，得到的指紋圖譜與其它以雷公藤的根莖為原料廠家生產(chǎn)的雷公藤制劑的指紋圖譜有很大的差異，整體輪廓上不符合共有特征，且雷公藤內(nèi)酯醇含量較大,與文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)果相一致15。 即便是同一產(chǎn)地、相同部位的藥材也會(huì)有較大差異。采收期不同，所含化學(xué)成分及含量不同可能為主要因素。同一產(chǎn)地于夏季和冬季采收的雷公藤葉提取物中主要成分，尤其是雷公藤內(nèi)酯醇含量相差較大15。另有文獻(xiàn)報(bào)道20夏季采收的雷公藤藥材毒性最大，而冬季采收的雷公藤藥材毒性較小。 制劑樣品68指紋圖譜表明其生物堿成分峰數(shù)量相對(duì)較少且含量小，可能與采用雷公藤莖為原料，并在生產(chǎn)工藝中分離去除了生物堿成分相應(yīng)。不同廠家生產(chǎn)的制劑樣品4和5，7和8不論定性還是定量相似度都很高，這可能與它們藥材來(lái)源、部位相同，并使用相似的生產(chǎn)工藝相關(guān)。由于藥材部位、來(lái)源、采收期和生產(chǎn)工藝的不同和不穩(wěn)定性，導(dǎo)致目前市售的雷公藤片劑質(zhì)量差異較大，從而影響臨床使用的有效性與安全性。因此，建立雷公藤指紋圖譜標(biāo)準(zhǔn)，可以平行地整體監(jiān)控和比較產(chǎn)品內(nèi)在質(zhì)量，從而保障臨床應(yīng)用的有效與安全。表1 雷公藤藥材來(lái)源tab. 1 origin of tripterygium wilfordii hook. f.sample no.originspecies1taining country, fujian provincetripterygium wilfordii hook. f.2guilin city, guangxi provincetripterygium wilfordii hook. f.3yunnan provincetripterygium wilfordii hook. f.4xichang city, sichuan provincetripterygium wilfordii hook. f.5yulin city, guangxi provincetripterygium wilfordii hook. f.6chongqing citytripterygium wilfordii hook. f.7chengdu city, sichuan provincetripterygium wilfordii hook. f.8lishui city, zhejiang provincetripterygium wilfordii hook. f.表2 雷公藤多苷片來(lái)源tab. 2 origin of tripterygium tabletssample no.manufactorylot no.labled amount1shanghai fudan fuhua pharm. co.,ltd.070302liquid extracts10 mg per tablet2jiangsu meitong pharm. co.,ltd.070321liquid extracts10 mg per tablet3hunan xieli pharm. co.,ltd.20070501liquid extracts10 mg per tablet4huangshi fy pharmaceutical co.,ltd.20070301liquid extracts10 mg per tablet5sanjiu huangshi pharmaceutical factory060207liquid extracts 33 g triptolide per tablet6fujian huitian biological pharmacy co.,ltd.060701liquid extracts10 mg per tablet7zhejiang deende pharmaceutical co.,ltd.0701103liquid extracts10 mg per tablet8zhejiang apeloa natural medicine co.,ltd.070401liquid extracts10 mg per tablet9nanjing general hospital of nanjing military command.060520total lactones80 g per tabletab圖1 hplc指紋圖譜(a)雷公藤藥材， (b)雷公藤片fig. 1 hplc fingerprint chromatograms of (a) tripterygium wilfordii hook. f. and (b) tripterygium tablets表3 雷公藤內(nèi)酯醇加樣回收率結(jié)果tab. 3 the addition recovery of triptolidesample typeweight/gbackground/gadded/mlrecovery/ %average recovery/%rsd/%tripterygium wilfordii hook. f.2.50211.50.297.71011.595.52.48611.498.52.52011.60.2595.80811.597.32.49911.596.62.51211.50.3103.69711.5103.72.48911.4103.8tripterygium tablets0.24943.80.899.299.00.80.24543.098.10.25144.299.60.24643.11.00.24543.098.70.25344.597.20.25044.01.299.55544.998.50.24643.297.9圖2 不同產(chǎn)地雷公藤藥材hplc指紋圖譜 （18樣品編號(hào)，同表1）fig. 2 fingerprint chromatogram of tripterygium wilfordii hook. f samples from different origins (sample no., same as tab 1)圖3 不同廠家生產(chǎn)的雷公藤片劑hplc指紋圖譜 （19樣品編號(hào)，同表2）fig. 3 fingerprint chromatogram of tripterygium tablets samples from different manufactory (sample no., same as tab 2)表4 含量測(cè)定結(jié)果(平均值sd, n= 3；樣品編號(hào)同表1、表2)tab 4 assay results (meansd, n= 3; sample no., same as tab 1 and tab 2)(sample no.)(tripterygium wilfordii hook. f.)(tripterygium tablets)triptolide/ gg-1wilforlide/ gg-1triptolide/ g per tabletwilforlide/ g per tablet 16.210.1213.510.0514.280.6967.150.8527.590.0313.380.1213.430.6264.501.5037.380.225.640.036.571.67499.10.70415.990.305.290.051.040.28314.41.6059.170.15nd20.860.4021841.00615.920.269.460.1010.890.4241.001.00714.780.026.120.083.540.04127.23.2085.940.0534.070.202.890.03210.011.09-155240nd表5 雷公藤藥材和制劑的相似度計(jì)算結(jié)果(樣品編號(hào)同表1、表2)tab. 5 the result of similarity of tripterygium wilfordii hook. f.and tripterygium tablets (sample no., same as tab 1 and tab 2)(sample type)(sample no.)(reference with common mode)(reference with fingerprint reference substance)cosqredcosqredtripterygium wilfordii hook. f.10.82440.69740.71421.12032*0.92190.17501.0000*0.0000*30.86380.80070.82780.889240.65220.81760.44131.441950.51010.90370.52131.483660.86350.75650.83160.895670.36390.90770.29961.507780.81601.61640.72801.6019tripterygium tablets10.71340.53700.64721.064520.74321.33870.67331.690730.58310.76140.49071.27164*0.97620.63761.0000*0.0000*50.96271.40020.97400.997560.62390.63570.52620.988370.38030.85740.22091.149480.36000.88450.20841.1402ab圖 4 一級(jí)質(zhì)譜全掃描的總離子流色譜圖：a 雷公藤多苷片，b 雷公藤藥材fig. 4 fullscan chromatogram of sample: a tripterygium tablets, b tripterygium wilfordii hook. f. 20表6 特征色譜峰鑒別tab. 6 active components of chromatogrampeak no.nameadduct ionsfragment ionsmolecular formulamol wt1triptriolide379361,343,301,269,241,213,185,157,131,91,79,43c20h26o73782triptolide361333,297,267,239,195,169,145,119,91,79,43c20h24o63603wilfordsuine/wilfordlongine780752, 674,572, 277,259,194,176,134,106c36h45no1877942-o-deacetyleuonine/7-o-deacetyleuonine764206,178,160c36h45no177635alatusinine/unreported822804,720, 558,462, 222,176c38h47no198216762,632, 222,204,176,134,1067unreported818681,638,556,443,361,320,279,203,191,1788178pertassines a/euonine/euonymine806788,728,686,206,178,160c38h47no188059206,188,17810788,746,718, 206,186,17611wilfordconine/wilfortrine/isowilfortrine874856,832,176,134c41h47no2087312hypodiolide319301,258,213,199,186,173,165,157,145,133,121,115,105,95,91,82c25h30o331813wilfordconine/wilfortrine/isowilfortrine874837,778, 672,614,205,194,176c41h47no2087314wilforgine858206,178,106c41h47no1985715wilfordine/wilfordsine884814,797,674,592,540,423,326,221c43h49no1988316wilforzine826790,748,206c41h47no1782517wilforine868808,790,686,206,178,160c43h49no1886718hyponines e921903,206,188c45h48n2o1892019forrestine/hyponines c868686,206c43h49no1886720hyponines d931913,206c47h50n2o1893021ebenifoline e-930912,894c48h51no18929references1 he j p, wang w y, gao w y, et al. determination of triptoquinone h in tripterygium wilfordii and its tablet by hplc j. chin tradit herb drugs, 2005,36(6):8372 wei h l, chen y, zhang j r. advances in pharmacological research of tripterygium hook. f. on immune system and inflammatory reaction j . chin j new drugs, 2004,13(9):7803 wu j q, pan w h.different rattan 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