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細(xì)胞免疫熒光技術(shù),實(shí)驗(yàn)?zāi)康?掌握免疫熒光技術(shù)的基本原理 熟悉細(xì)胞免疫熒光技術(shù)的方法 了解在免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)中如何獲得好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,實(shí)驗(yàn)原理,原位檢測(cè) 抗原抗體特異反應(yīng) 間接法,間接熒光抗體染色法示意圖,Hela細(xì)胞,Vinculin,實(shí)驗(yàn)用品,試劑： 固定液：4%PFA 細(xì)胞通透：0.2%TritonX 封閉試劑：10%正常山羊血清 一抗：小鼠源抗Vinculin單克隆抗體 二抗:Alexa Fluor555標(biāo)記的山羊抗小鼠IgG DAPI（4,6-二脒基-2-苯基吲哚） PBS洗滌緩沖液：PH7.4,材料： Hela細(xì)胞 細(xì)胞培養(yǎng)皿 儀器： 熒光顯微鏡,實(shí)驗(yàn)步驟,一，細(xì)胞制備和細(xì)胞固定,實(shí)驗(yàn)步驟,二，細(xì)胞免疫熒光ICC染色,0.2% TritonX 處理5min,封閉 室溫30min,4過(guò)夜,371-2小時(shí),375-10min,熒光顯微鏡觀察,實(shí)驗(yàn)結(jié)果,三，觀察,human HeLa cells,實(shí)驗(yàn)中應(yīng)注意的問(wèn)題,細(xì)胞不要鋪的過(guò)密:60-70% 防止細(xì)胞污染 固定時(shí)間不要太長(zhǎng),一般10-30min TrionX處理時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，膜蛋白可不必處理 選擇合適的封閉液 二抗孵育后,一定要洗干凈 必要時(shí)用恒溫?fù)u床搖洗,1. 免疫熒光技術(shù) 2. 免疫酶技術(shù) 3. 免疫親和技術(shù) 4. 膠體金技術(shù),標(biāo)記物 使抗體或抗原 抗體復(fù)合物在 各種顯微鏡下 可見(jiàn)的物質(zhì),免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù),免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)注意事項(xiàng),選擇合適的方法 材料要留好 選擇抗體 選擇標(biāo)記酶 封閉液的選擇 設(shè)定對(duì)照實(shí)驗(yàn),思考題,檢測(cè)Hela細(xì)胞中蛋白A定位情況，思考應(yīng)選擇什么方法， 用什么儀器觀察？,疑難解答

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