人感染H7N9禽流感病毒培訓(xùn)ppt課件.ppt

人感染H7N9禽流感 實(shí)驗(yàn)室采樣與檢測(cè)技術(shù),1,H7N9禽流感病毒介紹,2,病原學(xué)特征,禽流感病毒屬正粘病毒科 流感病毒按照病毒核蛋白（NP）和基質(zhì)蛋白（MP）的差異可以分成甲、乙、丙型流感病毒 甲型流感根據(jù)病毒血凝素(HA)和神經(jīng)氨酸酶(NA)的差異可以分成不同的亞型，目前可分為16個(gè)H亞型（H1H16）和9個(gè)N亞型（N1N9）。 禽甲型流感病毒除感染禽外，還可感染人、豬、馬、水貂和海洋哺乳動(dòng)物。可感染人的禽流感病毒亞型為H5N1、H9N2、H7N7、H7N2、H7N3，此次報(bào)道的為H7N9禽流感病毒。該病毒為新型重配病毒，其內(nèi)部基因來(lái)自于H9N2禽流感病毒。,3,病原學(xué)特征,病毒基因組結(jié)構(gòu) 甲、乙型病毒分為8節(jié)段 丙型病毒分為7個(gè)節(jié)段（缺少編碼NA的節(jié)段） 單鏈、負(fù)鏈RNA 單純的病毒RNA不具感染性,4,6個(gè)內(nèi)部片段來(lái)源于H9N2 最新的研究表明，該病毒可能是 H7N3（鴨） H7N9（野禽） H9N2 中國(guó)科學(xué)院研究顯示，H7N9禽流感病毒基因來(lái)自于東亞地區(qū)野鳥(niǎo)和中國(guó)上海、浙江、江蘇雞群的基因重配。,病毒基因組特征,5,理化特征,禽流感病毒普遍對(duì)熱敏感，對(duì)低溫抵抗力較強(qiáng)，65加熱30分鐘或煮沸（100）2分鐘以上可滅活。病毒在較低溫度糞便中可存活1周，在4水中可存活1個(gè)月，對(duì)酸性環(huán)境有一定抵抗力，在pH4.0的條件下也具有一定的存活能力。在有甘油存在的情況下可保持活力1年以上。,6,人感染H7N9禽流感病毒 標(biāo)本采集運(yùn)輸及實(shí)驗(yàn)室檢測(cè),7,臨床樣本的選擇,采樣對(duì)象：不明原因肺炎、人禽流感待查病例 最佳采集時(shí)間：發(fā)病后3天內(nèi)，一般不超過(guò)7天 要有醫(yī)院專(zhuān)家組的會(huì)診記錄,8,病例定義,不明原因肺炎病例應(yīng)同時(shí)具備以下4條，不能明確診斷為其它疾病的肺炎病例： 發(fā)熱（腋溫38）； 具有肺炎的影像學(xué)特征； 發(fā)病早期白細(xì)胞總數(shù)降低或正常、淋巴細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)減少； 經(jīng)規(guī)范抗菌藥物治療35天 監(jiān)測(cè)病例（同時(shí)具備以下4項(xiàng)）： 發(fā)熱(腋下體溫38) 具有肺炎的影像學(xué)特征 發(fā)病早期白細(xì)胞總數(shù)降低或正常,或淋巴細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)減少 不能從臨床或?qū)嶒?yàn)室角度診斷為常見(jiàn)病原所致肺炎,9,病例定義,疑似病例： 符合臨床癥狀及血常規(guī)/生化及胸部影像學(xué)特征 甲型流感病毒通用引物陽(yáng)性并排除季節(jié)性流感 可以有流行病學(xué)接觸史 確診病例： 符合疑似病例診斷標(biāo)準(zhǔn) 呼吸道標(biāo)本中分離出H7N9禽流感病毒 呼吸道標(biāo)本中H7N9禽流感病毒核酸檢測(cè)陽(yáng)性 動(dòng)態(tài)檢測(cè)雙份血清H7N9禽流感病毒特異性抗體水平呈4倍或以上升高,10,標(biāo)本類(lèi)型,上呼吸道標(biāo)本 咽拭子、鼻咽拭子、鼻咽抽取物、咽漱液和鼻洗液等 下呼吸道標(biāo)本 氣管吸取物、肺洗液、肺組織標(biāo)本等 血清標(biāo)本 急性期血清：發(fā)病7天內(nèi)，盡量采集 恢復(fù)期血清：間隔2-4周的 尸檢組織標(biāo)本 肺組織、氣管、支氣管組織等,11,采樣液要求,常用的采樣液有：普通肉湯（只用于雞胚，對(duì)細(xì)胞有毒性），PH 7.4-7.6的Hanks液，Eagels培養(yǎng)液或水解乳蛋白溶液或不加抗菌素的生理鹽水（漱口液）。 為防止采樣液生長(zhǎng)細(xì)菌和真菌，在采樣液中需加入抗菌素，加入慶大霉素（終濃度0.1mg/ml可高至0.5mg/ml ）、抗真菌藥物（終濃度2ug/ml）。加入抗菌素以后重新調(diào)節(jié)pH值為7.4， 配制好的采樣液，分裝每個(gè)采樣管3-4ml，-20凍存。 慶大霉素:80mg（萬(wàn)單位）2ml,12,Eagels基礎(chǔ)培養(yǎng)基,13,咽拭子 用滅菌棉簽（最好用塑料柄、尼龍拭子，因?yàn)槟绢^柄棉拭子會(huì)抑制PCR實(shí)驗(yàn)）擦拭雙側(cè)咽扁桃體及咽后壁，將棉簽頭部浸入3-4ml采集液中，尾部棄去,14,15,采咽拭子的器材和容器,16,17,標(biāo)本采集要求,同時(shí)采集 呼吸道標(biāo)本：34ml 血清標(biāo)本：12ml 盡量采集 病例發(fā)病早期的呼吸道標(biāo)本 特別是下呼吸道標(biāo)本 填寫(xiě)標(biāo)本采集登記表 務(wù)必填寫(xiě)清楚，不要缺漏項(xiàng)目 復(fù)印一份交收樣單位，簽字蓋章,18,19,20,標(biāo)本送檢,送檢單位 縣級(jí)疾控中心/臨床醫(yī)院 送檢時(shí)限 在24小時(shí)內(nèi)送達(dá) 接受單位 流感監(jiān)測(cè)網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室（設(shè)區(qū)市疾控中心）,21,標(biāo)本的運(yùn)送要求 新鮮的臨床采集標(biāo)本 應(yīng)在4條件下24小時(shí)內(nèi)運(yùn)送至全國(guó)流感監(jiān)測(cè)網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室; 未能24小時(shí)內(nèi)送至實(shí)驗(yàn)室的，應(yīng)置-70或以下保存 凍存的臨床采集標(biāo)本 應(yīng)在凍存的條件下，低溫送至實(shí)驗(yàn)室,22,生物安全,23,傳播風(fēng)險(xiǎn)及管理,病毒特征分析表明存在人間傳染的風(fēng)險(xiǎn) 暫時(shí)按“高致病性禽流感病毒”類(lèi)型管理 參考人間傳染的病原微生物名錄 需重點(diǎn)考慮生物安全 標(biāo)本采集 標(biāo)本運(yùn)輸 實(shí)驗(yàn)室活動(dòng),24,標(biāo)本采集和運(yùn)輸,標(biāo)本采集 重點(diǎn)做好采樣人員的個(gè)人防護(hù) 必須佩帶N95口罩、防護(hù)服、手套等防護(hù)用品 采樣后器材高壓消毒 標(biāo)本運(yùn)輸 經(jīng)過(guò)行政審批 包裝 臨床樣品：B類(lèi)， UN3373包裝 病毒分離物： A類(lèi)， UN2814包裝 專(zhuān)人專(zhuān)車(chē)運(yùn)輸并注意防護(hù),25,感染性物質(zhì)包裝分類(lèi),航空運(yùn)輸B類(lèi)包裝（ UN號(hào)3373,26,A類(lèi)、 B類(lèi)包裝的區(qū)別,27,檢測(cè)活動(dòng),標(biāo)本分裝、滅活和核酸提取 BSL-2+生物安全柜 核酸擴(kuò)增 BSL-2 病毒培養(yǎng) BSL-3：細(xì)胞及雞胚的接種 ABSL-3：動(dòng)物感染實(shí)驗(yàn) 活動(dòng)需要行政審批、報(bào)備 個(gè)人防護(hù) BSL-2：N95口罩、眼鏡、防護(hù)服等 BSL-3：按相關(guān)要求,28,病原學(xué)檢測(cè),核酸檢測(cè) Real-time RT-P