藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目和分析方法—王玉（上海）2015.10

藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目 和分析方法,王 玉,一 質(zhì)量研究一般原則 二 指標(biāo)、限度和方法 三 雜質(zhì)研究與方法 四 分析方法驗(yàn)證、轉(zhuǎn)移和確認(rèn),第一部分 質(zhì)量研究一般原則,質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立過(guò)程： 1 確定質(zhì)量研究的內(nèi)容； 2 方法學(xué)研究； 3 確定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的項(xiàng)目及限度； 4 制訂及修訂質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。,第一部分 質(zhì)量研究一般原則,（一）質(zhì)量研究?jī)?nèi)容的確定 質(zhì)量研究是質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制訂的基礎(chǔ)，內(nèi)容應(yīng)盡可能全面，既要考慮一般性要求，又要有針對(duì)性。 應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品（原料藥或制劑）的特性、制備工藝，并結(jié)合穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果。,第一部分 質(zhì)量研究一般原則,1 藥物的特性 原料藥：結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)等。制劑：劑型特點(diǎn)、臨床、復(fù)方不同成分間的相互作用，以及輔料的影響(如防腐劑、抗氧劑或穩(wěn)定劑等)。 2 工藝的影響 原料藥：起始原料及試劑、中間體及副產(chǎn)物，及有機(jī)溶劑等。制劑：所用輔料、不同工藝的影響，以及降解產(chǎn)物等。還應(yīng)考慮生產(chǎn)規(guī)模的不同對(duì)質(zhì)量的影響。 3 藥物的穩(wěn)定性 應(yīng)參考穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果，如貯藏過(guò)程中的變化和包裝材料對(duì)質(zhì)量的影響。,第一部分 質(zhì)量研究一般原則,（二）方法學(xué)研究 包括方法的選擇和方法的驗(yàn)證。 根據(jù)選定的研究項(xiàng)目及試驗(yàn)?zāi)康倪x擇試驗(yàn)方法?？刹捎盟幍涫蛰d的方法。鑒別項(xiàng)的專屬性；檢查項(xiàng)專屬性、靈敏度和準(zhǔn)確性；有關(guān)物質(zhì)檢查和含量測(cè)定通常要采用兩種或兩種以上的方法進(jìn)行研究，比較方法的優(yōu)劣，擇優(yōu)選擇。,第一部分 質(zhì)量研究一般原則,（三）質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目及限度的確定 應(yīng)在充分的質(zhì)量研究基礎(chǔ)上，根據(jù)藥物的特性確定。 既有通用性項(xiàng)目，又有針對(duì)產(chǎn)品自身特點(diǎn)的項(xiàng)目，能靈敏地反映質(zhì)量的變化情況。 限度的確定基于安全性、有效性，還應(yīng)注意生產(chǎn)產(chǎn)品與研究樣品質(zhì)量的一致性。 一般雜質(zhì)，可參照CHP或國(guó)外藥典確定其限度。特殊雜質(zhì)，需限度確定的試驗(yàn)或文獻(xiàn)的依據(jù)。,第一部分 質(zhì)量研究一般原則,（四）質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制訂 根據(jù)項(xiàng)目和限度，參照藥典，制訂出合理、可行的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。 藥品名稱（通用名、漢語(yǔ)拼音名、英文名），化學(xué)結(jié)構(gòu)式，分子式，分子量，化學(xué)名（對(duì)原料藥），含量限度，性狀，理化性質(zhì)（原料藥），鑒別，檢查（原料藥純度檢查，與劑型相關(guān)的檢查等），含量（效價(jià)）測(cè)定，類別，規(guī)格（制劑），貯藏，制劑（原料藥），有效期等項(xiàng)內(nèi)容。各項(xiàng)目應(yīng)有相應(yīng)的起草說(shuō)明。,第一部分 質(zhì)量研究一般原則,（五）質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的修訂 臨床研究用質(zhì)量限度應(yīng)符合臨床研究安全性和有效性的要求； 生產(chǎn)用試行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)可根據(jù)生產(chǎn)工藝研究或工業(yè)化生產(chǎn)規(guī)模產(chǎn)品質(zhì)量的變化情況，結(jié)合臨床研究的結(jié)果對(duì)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的項(xiàng)目或限度做適當(dāng)?shù)恼{(diào)整和修訂；還要注重質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)用性； 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)試行期間，需繼續(xù)對(duì)項(xiàng)目的設(shè)置、采用的方法及設(shè)定的限度進(jìn)行研究，積累多批產(chǎn)品的實(shí)測(cè)數(shù)據(jù)，在試行標(biāo)準(zhǔn)轉(zhuǎn)正時(shí)進(jìn)行修訂。,第一部分 質(zhì)量研究一般原則,三、藥物的質(zhì)量研究 （一）質(zhì)量研究用樣品和對(duì)照品 需采用多批樣品，其工藝和質(zhì)量應(yīng)穩(wěn)定。 臨床前:一定規(guī)模制備的樣品（至少3批）。 臨床:中試或工業(yè)化生產(chǎn)規(guī)模的多批樣品。 新對(duì)照品:結(jié)構(gòu)確證和質(zhì)量研究工作，并制訂質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，先自行標(biāo)定。,第一部分 質(zhì)量研究一般原則,（二）原料藥質(zhì)量研究的一般內(nèi)容 1、性狀 1.1 外觀、色澤、臭、味、結(jié)晶性、引濕性等；1.2 溶解度；1.3 熔點(diǎn)或熔距；1.4 旋光度或比旋度；1.5 吸收系數(shù)；1.6 其他 相對(duì)密度、凝點(diǎn)、餾程、折光率、黏度 碘值、酸值、皂化值、羥值等是脂肪與脂肪油類藥物的重要理化性質(zhì)指標(biāo)。,第一部分 質(zhì)量研究一般原則,（二）原料藥質(zhì)量研究的一般內(nèi)容 2、鑒別 2.1 化學(xué)反應(yīng)法 官能團(tuán)專屬化學(xué)反應(yīng)。 2.2 色譜法 GC、HPLC、TLC。 2.3 光譜法 IR、Raman、UV等。,第一部分 質(zhì)量研究一般原則,3、檢查 3.1 一般雜質(zhì) 3.2 有關(guān)物質(zhì) 3.3 殘留溶劑 3.4 晶型、異構(gòu)體 3.5 粒度 3.6 溶液的澄清度與顏色、溶液的酸堿度 3.7 干燥失重和水分 3.8 其他 如異常毒性、內(nèi)毒素或無(wú)菌等。,第一部分 質(zhì)量研究一般原則,（二）原料藥質(zhì)量研究的一般內(nèi)容 4、含量（效價(jià)）測(cè)定 凡用理化方法測(cè)定藥物含量的稱為“含量測(cè)定”，凡以生物學(xué)方法或酶化學(xué)方法測(cè)定藥物效價(jià)的稱為“效價(jià)測(cè)定”。 應(yīng)選擇適當(dāng)?shù)姆椒▽?duì)原料藥的含量（效價(jià)）進(jìn)行研究。,第一部分 質(zhì)量研究一般原則,（三）制劑質(zhì)量研究的一般內(nèi)容 1、性狀 考察樣品的外形和顏色。片劑是什么顏色的壓制片或包衣片，片芯的顏色，以及片劑形狀，如異形片；片面有無(wú)印字或刻痕或商標(biāo)記號(hào)等。膠囊劑內(nèi)容物的顏色、形狀等。注射液一般為澄明液體（水溶液），但也有混懸液或粘稠性溶液，需注意對(duì)顏色的描述，還應(yīng)考察貯藏過(guò)程中性狀是否有變化。,第一部分 質(zhì)量研究一般原則,（三）制劑質(zhì)量研究的一般內(nèi)容 2、鑒別 通常采用靈敏度較高、專屬性較強(qiáng)、操作較簡(jiǎn)便、不受輔料干擾的方法對(duì)制劑進(jìn)行鑒別。鑒別試驗(yàn)一般至少采用二種以上不同類的方法，如化學(xué)法和HPLC法等。必要時(shí)對(duì)異構(gòu)體藥物應(yīng)有專屬性強(qiáng)的鑒別試驗(yàn)。,第一部分 質(zhì)量研究一般原則,（三）制劑質(zhì)量研究的一般內(nèi)容 3、檢查 制劑的檢查項(xiàng)目，除應(yīng)符合制劑通則中規(guī)定外，還應(yīng)根據(jù)特性、工藝及穩(wěn)定性結(jié)果，制訂其他的檢查項(xiàng)目：如溶出度、釋放度，雜質(zhì)等，含量均勻度；pH值、顏色，干燥失重或水分，大體積注射液檢查重金屬與不溶性微粒等，以及滲透壓摩爾濃度等檢查。,第一部分 質(zhì)量研究一般原則,（三）制劑質(zhì)量研究的一般內(nèi)容 4、含量（效價(jià)）測(cè)定 通常應(yīng)采用專屬、準(zhǔn)確的方法對(duì)藥物制劑的含量（效價(jià)）進(jìn)行測(cè)定。,第一部分 質(zhì)量研究一般原則,（四）方法學(xué)研究 1、方法的選擇及驗(yàn)證的一般原則 應(yīng)針對(duì)研究項(xiàng)目的目的選擇有效的質(zhì)量研究用試驗(yàn)方法。方法的選擇要有依據(jù)，包括文獻(xiàn)的、理論的及試驗(yàn)的依據(jù)。常規(guī)方法或針對(duì)性方法，如不是中國(guó)藥典收載方法，應(yīng)經(jīng)過(guò)詳細(xì)的方法學(xué)驗(yàn)證，確認(rèn)方法的可行性。,第一部分 質(zhì)量研究一般原則,（四）方法學(xué)研究 2、常規(guī)項(xiàng)目試驗(yàn)的方法 可參照中國(guó)藥典收載的方法，如溶解度、熔點(diǎn)、旋光度、吸收系數(shù)、重金屬、熾灼殘?jiān)?、溶液的澄清度與顏色、崩解時(shí)限、熱原、異常毒性、不溶性微粒、融變時(shí)限、裝重量差異等。若采用與現(xiàn)行版藥典不同的方法，則應(yīng)進(jìn)行詳細(xì)的方法學(xué)研究。,第一部分 質(zhì)量研究一般原則,（四）方法學(xué)研究 3、針對(duì)所研究藥品的試驗(yàn)方法 針對(duì)所研究藥品的試驗(yàn)方法，如鑒別、雜質(zhì)檢查、殘留溶劑檢查、制劑的溶出度或釋放度檢查，以及含量測(cè)定等，均應(yīng)在詳細(xì)的方法學(xué)研究基礎(chǔ)上確定適宜的試驗(yàn)方法，并進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證。,第一部分 質(zhì)量研究一般原則,四、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制訂 （一）質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制訂的一般原則 含檢測(cè)項(xiàng)目、方法和限度3方面內(nèi)容。在質(zhì)量研究基礎(chǔ)上，考慮安全性和有效性，以及生產(chǎn)、流通、使用等環(huán)節(jié)的影響，確定項(xiàng)目和限度，制訂出合理、可行的、能反映藥品特征和質(zhì)量變化的標(biāo)準(zhǔn)，以保證質(zhì)量一致性及穩(wěn)定性。應(yīng)符合“準(zhǔn)確、靈敏、簡(jiǎn)便、快速”的原則，而且要有一定的適用性和重現(xiàn)性，還應(yīng)考慮原料藥和其制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的關(guān)聯(lián)性。,第一部分 質(zhì)量研究一般原則,四、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制訂 （二）質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目和限度的確定 1、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目確定的一般原則 既要通用性，又要有針對(duì)品自身的特點(diǎn)，并能靈敏地反映產(chǎn)品質(zhì)量的變化情況。 2、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)限度確定的一般原則 首先應(yīng)基于對(duì)藥品安全性和有效性的考慮，并應(yīng)考慮分析方法的誤差。,第一部分 質(zhì)量研究一般原則,四、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制訂 （三）質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的格式和用語(yǔ) 應(yīng)按中國(guó)藥典和國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)工作手冊(cè)的格式和用語(yǔ)進(jìn)行規(guī)范，注意用詞準(zhǔn)確、語(yǔ)言簡(jiǎn)練、邏輯嚴(yán)謹(jǐn)。 （四）質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的起草說(shuō)明 是質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的注釋，如項(xiàng)目設(shè)置及限度確定的依據(jù)或項(xiàng)目不訂入的理由等。是研究工作總結(jié)，含方法的原理、方法學(xué)驗(yàn)證、實(shí)際測(cè)定結(jié)果及綜合評(píng)價(jià)等。執(zhí)行和修訂質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的重要參考資料。,第二部分 項(xiàng)目、限度和方法,一 性狀項(xiàng) 對(duì)性狀的描述很重要，既要嚴(yán)謹(jǐn)，又要實(shí)事求是、切合實(shí)際；即寬嚴(yán)適度。 1 原料藥 固體原料藥：本品為白色結(jié)晶性粉末；無(wú)臭，無(wú)味。本品為白色或類白色結(jié)晶性粉末；有類似蒜的臭氣，味酸；有引濕性。本品為白色至淺黃色結(jié)晶性粉末或顆粒。,第二部分 項(xiàng)目、限度和方法,液體原料藥：本品為無(wú)色的澄明液體或含無(wú)色的結(jié)晶塊；有強(qiáng)烈的特臭。本品為無(wú)色至微黃色油狀液體；微臭。 溶解度：根據(jù)品種特性和檢測(cè)需要選擇適合的溶劑種類試驗(yàn)，實(shí)事求是地描述，訂入標(biāo)準(zhǔn)中。如本品在熱水中溶解，在水中微溶，在乙醇中不溶，在稀鹽酸或氫氧化鈉溶液中溶解。必要時(shí)，可用無(wú)水甲醇和無(wú)水乙醇，一般用甲醇或乙醇。,第二部分 項(xiàng)目、限度和方法,2 制劑 片劑：本品為白色片或類白色片；本品為糖衣片，除去包衣后顯白色或類白色；本品為薄膜衣片，除去包衣后顯類白色至淡黃色。 膠囊劑：本品內(nèi)容物為類白色至微黃色粉末或顆粒；本品內(nèi)容物為淡黃色至淡棕黃色油狀液體；本品內(nèi)容物為白色球形小丸。,注射劑：本品為無(wú)色澄明液體；本品為無(wú)色至微黃色的澄明液體；本品為無(wú)色至淡黃色的澄明油狀液體。 本品為白色凍干粉末，在水或氯化鈉注射液中呈白色顆粒懸浮液，靜置后顆粒沉降于瓶底；本品為白色凍干塊狀物或粉末。,第二部分項(xiàng)目、限度和方法,二 鑒別項(xiàng) 藥物的鑒別試驗(yàn)(identification test)是用于鑒別藥物的真?zhèn)?，一般在藥品檢驗(yàn)中作為首先項(xiàng)目。鑒別試驗(yàn)主要用于證實(shí)鑒別對(duì)象是否為所標(biāo)示的藥物，但常不用于鑒別未知物。,鑒別的主要項(xiàng)目,1、性狀：也可以列為鑒別項(xiàng)下，主要反映藥物特有的物理性質(zhì)，如外觀、臭、味、溶解度及其物理常數(shù)等。 其中溶解度、熔點(diǎn)、比旋度和吸收系數(shù)等或受被測(cè)物晶型、顆粒大小等因素影響，會(huì)使批間有差異；直接反映原料藥的質(zhì)量，但也會(huì)影響制劑的質(zhì)量。在制劑鑒別試驗(yàn)中雖較少但有時(shí)也要考慮。,鑒別的主要項(xiàng)目,2、一般鑒別試驗(yàn)(general identification test)是以藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)及其物理化學(xué)性質(zhì)為依據(jù)，通過(guò)化學(xué)反應(yīng)來(lái)鑒別藥物的真?zhèn)?。一般鑒別試驗(yàn)可能只證實(shí)為某一類藥物，而不能證實(shí)是哪一種藥物，需進(jìn)行專屬鑒別試驗(yàn)，方可確認(rèn)。,鑒別的主要項(xiàng)目,3、專屬鑒別試驗(yàn)(specific identification test)是證實(shí)某一種藥物的依據(jù)，是根據(jù)藥物間化學(xué)結(jié)構(gòu)的差異及其物理化學(xué)特性的不同，選用某種藥物特有的靈敏定性反應(yīng)來(lái)鑒別藥物的真?zhèn)巍?鑒別項(xiàng)的選擇,選擇原則： 專屬性 靈敏性 簡(jiǎn)便性。 原料藥：以光譜法和理化方法為主，色譜法為輔的組合；以振動(dòng)光譜法為首選。 制劑：以色譜法和理化方法為主，光譜法為輔的組合；色譜法較簡(jiǎn)便、可靠。,鑒別項(xiàng)的選擇,IR和Raman是最具專屬性的鑒別方法，是鑒別原輔料的首選方法；但用于制劑有局限性，要考慮輔料干擾，復(fù)方制劑API相互間以及輔料的干擾更為復(fù)雜。 IR或Raman制劑鑒別應(yīng)用實(shí)例不多。前處理提純?nèi)コ蓴_是常用的方法；結(jié)合化學(xué)計(jì)量學(xué)、或采用微光譜（化學(xué)成像等）是進(jìn)行制劑鑒別新方法。 其他光譜法如紫外法、理化反應(yīng)（顏色、沉淀）等在制劑鑒別中有一定的應(yīng)用，但專屬性不強(qiáng)，色譜法，特別是HPLC法的應(yīng)用實(shí)例越來(lái)越多。,鑒別項(xiàng)選擇實(shí)例,鑒別項(xiàng)選擇實(shí)例,第二部分 項(xiàng)目、限度和方法,三 檢查項(xiàng)（1原料藥） 原料藥檢查項(xiàng)的就是檢查原料藥的純度或所含雜質(zhì)，主要有：溶劑殘留、有關(guān)物質(zhì)、異構(gòu)體和元素雜質(zhì)；酸（堿）度 、溶液的澄清度與顏色 、溶液的透光率、氯化物 、硫酸鹽 、氰化物、硫化物、重金屬、熾灼殘?jiān)?、水分、干燥失重和熱原、微生物限度等?不同品種有不同項(xiàng)目組合。溶劑殘留、有關(guān)物質(zhì)（異構(gòu)體）和無(wú)機(jī)元素雜質(zhì)是重點(diǎn)和難點(diǎn)。另行討論 。,第二部分 項(xiàng)目、限度和方法,例1-溶液的澄清度與顏色 取本品5瓶，按標(biāo)示量分別加水制成每1ml中含阿莫西林50mg的溶液，溶液應(yīng)澄清無(wú)色；如顯渾濁，與2號(hào)濁度標(biāo)準(zhǔn)液（附錄IX B）比較，均不得更濃；如顯色，與黃色或黃綠色6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)比色液（附錄IX A 第一法）比較，均不得更深。 例2-堿性溶液的澄清度與顏色 取本品0.5g，加氫氧化鈉試液5ml溶解后，加水5ml，溶液應(yīng)澄清無(wú)色；如顯渾濁，與2號(hào)濁度標(biāo)準(zhǔn)液（附錄IX B）比較，不得更濃；如顯色，與黃色3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)比色液（附錄IX A 第一法）比較，不得更深。,第二部分 項(xiàng)目、限度和方法,例3-溶液的澄清度與顏色 取本品0.5g，加水10ml溶解后，溶液應(yīng)澄清無(wú)色；如顯渾濁，照紫外-可見(jiàn)分光光度法（附錄IV A），在640nm的波長(zhǎng)處測(cè)定，吸光度不得大于0.018；如顯色，與黃色1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)比色液（附錄IX A 第一法）比較，不得更深。 例4-三氯甲烷溶液的澄清度與顏色 取本品1.0g，加三氯甲烷10ml溶解后，溶液應(yīng)澄清無(wú)色。如顯色，與黃色3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)比色液（附錄IX A 第一法）比較，不得更深。,第二部分 項(xiàng)目、限度和方法,重金屬檢查法 重金屬檢查法有多種，有化學(xué)比色法、原子吸收分光光度法、原子熒光光度法、ICP-OES、ICP-MS等。除原子熒光光度法外，上述方法在中國(guó)藥典中均有收載。 本法系指在規(guī)定實(shí)驗(yàn)條件下能與硫代乙酰胺或硫化鈉作用顯色的金屬雜質(zhì)：如鉛、汞、鉍、銻、砷、鈷、鎳、錫、鎘、鉬等。但以鉛的限量來(lái)表示重金屬限度。又分為3種檢查法，分別適用于不同的品種。 USP33版、BP2010年、Ph.Eur.6.0和JP XV版也均采用硫代乙酰胺或硫化鈉作顯色劑，以鉛的限量來(lái)表示重金屬限度，但檢查方法（包括樣品消解處理）各有所不同。,第二部分 項(xiàng)目、限度和方法,在建立重金屬檢查法時(shí)，或在檢驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)已有標(biāo)準(zhǔn)方法存在問(wèn)題時(shí)，應(yīng)進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證，包括標(biāo)準(zhǔn)鉛加樣監(jiān)控試驗(yàn)，并根據(jù)方法學(xué)驗(yàn)證結(jié)果確定檢查方法中是否需要增設(shè)監(jiān)控管，對(duì)于不適合采用本法檢查的重金屬，應(yīng)另選用其他合適的方法進(jìn)行檢查。 微波消解法具有操作簡(jiǎn)便、省時(shí)、重金屬損失小等優(yōu)點(diǎn)，已廣泛應(yīng)用于金屬元素測(cè)定的樣品前處理，但是必須選擇適宜的消解處理法及與其相適用的元素測(cè)定法，并經(jīng)過(guò)相應(yīng)的分析方法驗(yàn)證方可使用。 注意操作細(xì)節(jié)，提高可操作性和可行性。,第二部分 項(xiàng)目、限度和方法,干燥失重測(cè)定法 烘干法 取供試品，精密稱定，除另有規(guī)定外，在105干燥至恒重。由減失的重量和取樣量計(jì)算供試品的干燥失重。 減壓干燥 用減壓干燥器（通常為室溫）或恒溫減壓干燥器（溫度應(yīng)按各品種項(xiàng)下的規(guī)定設(shè)置，生物制品除另有規(guī)定外，溫度為60），除另有規(guī)定外，壓力應(yīng)在2.67kPa（20mmHg）以下。干燥器中常用的干燥劑為五氧化二磷、無(wú)水氯化鈣或硅膠；恒溫減壓干燥器中常用的干燥劑為五氧化二磷。 應(yīng)根據(jù)樣品特性選擇以上方法。,第二部分 項(xiàng)目、限度和方法,干燥失重系指藥品在規(guī)定的條件下干燥后所減失重量的百分率。減失的重量主要為樣品在規(guī)定條件下失去的附著水和結(jié)晶水，也包括其他可揮發(fā)性物質(zhì)如殘留溶劑等。 藥品中水分可分為結(jié)晶水和附著水。結(jié)晶水的準(zhǔn)確測(cè)定與否直接影響著化學(xué)結(jié)構(gòu)的判定和含量測(cè)定的結(jié)果。藥品中水分含量的多少，對(duì)藥品的含量、穩(wěn)定性、理化性質(zhì)和藥理作用等均有影響，因此，對(duì)藥品中的水分進(jìn)行檢查并控制其限度非常重要。,第二部分 項(xiàng)目、限度和方法,例1 干燥失重 取本品，以五氧化二磷為干燥劑，在70減壓干燥3小時(shí)，減失重量不得過(guò)1.0%（二部附錄VIII L）。 例2 干燥失重 取本品，以五氧化二磷為干燥劑，在室溫減壓干燥至恒重，減失重量不得過(guò)7.0(一部附錄 G)。 例3 干燥失重 取本品粗粉，置硫酸減壓干燥器內(nèi)，干燥至恒重，減失重量不得過(guò)2.0(一部附錄G)。 注意：一部干燥失重和水分測(cè)定的異同點(diǎn)。,第二部分 項(xiàng)目、限度和方法,水分測(cè)定法（2015年版） 第一法 (費(fèi)休氏法) A 容量滴定法 主要用于化學(xué)藥品、注意溶劑的選擇。 B 庫(kù)侖滴定法 主要用于含微量水分( 0.1)藥品的測(cè)定，特別適用于測(cè)定化學(xué)惰性物質(zhì)如烴類、醇類和酯類中的水分。 第二法(烘干法) 第三法（減壓干燥法） 用于較貴重或特殊的化學(xué)藥和中藥（一、二法不適用）的水分測(cè)定。 第四法(甲苯法) 主要用于中藥。 第五法（氣相色譜法） 較少使用。,第二部分 項(xiàng)目、限度和方法,美國(guó)藥典34版收載滴定法（分直接滴定法、剩余滴定法和庫(kù)侖滴定法）、甲苯法和重量法（即干燥失重法）。 英國(guó)藥典收載滴定法、甲苯法和庫(kù)侖法等。 2010年版水分測(cè)定收載費(fèi)休氏法（容量滴定法和庫(kù)侖滴定法）和甲苯法。 日本藥局方收載方法同2010年版中國(guó)藥典。 2015年版合并了一部、二部和三部。,第二部分 項(xiàng)目、限度和方法,注意： 1 卡氏法的適用性：容量法和庫(kù)侖法； 2 選擇合適的卡氏法溶劑：醇化劑和堿化劑； 3 烘干法、減壓干燥法和卡氏法在化學(xué)藥中應(yīng)用區(qū)別； 4 甲苯法 很少用于化學(xué)藥； 5 氣相法 結(jié)果可靠，但操作、儀器不宜。 應(yīng)根據(jù)樣品特性和實(shí)際操作簡(jiǎn)便性選擇。,第二部分 項(xiàng)目、限度和方法,例1 水分 取本品約0.2g，加10%咪唑的無(wú)水甲醇溶液使溶解，照水分測(cè)定法(附錄VIII M 第一法A)測(cè)定，含水分不得過(guò)6.0%。 例2 水分 取本品約0.5g，精密稱定，加無(wú)水甲醇-三氯甲垸（1：l20ml，使溶解，照水分測(cè)定法（附錄VIII M第一法A)測(cè)定，含水分不得過(guò)5.0%。,第二部分 項(xiàng)目、限度和方法,例3 水分 照水分測(cè)定法（附錄VIII M第二法），取甲苯250ml置A瓶中，加干燥氯化鋇10g; 另取本品l.0g , 用一小張玻璃紙包裹后置入A瓶，自“將儀器各部分連接”起，依法操作，檢讀水量，作為空白測(cè)定值；然后精密稱取本品約7g，用玻璃紙包裹后投入上述A瓶中，再依法緩緩加熱，直至水分完全餾出，放冷至室溫，檢讀第二次水量；兩者之差即為供試量中的含水量。含水分不得過(guò)52.0%。,第二部分 項(xiàng)目、限度和方法,中國(guó)藥典中水分測(cè)定法與干燥失重法 一部水分測(cè)定法分為四法，水分項(xiàng)下多采用第一法（烘干法）和第二法（甲苯法），用第三法（減壓干燥法）品種有3 個(gè)，用第四法（GC）品種僅有1個(gè)。采用干燥失重的品種較多。 二部水分測(cè)定法分為兩法，照水分測(cè)定法有67個(gè)品種，66個(gè)采用第一法A（卡氏法容量法），僅有1個(gè)品種是采用第二法（甲苯法）。采用干燥失重的品種也很多。,第二部分 項(xiàng)目、限度和方法,水分測(cè)定、干燥失重法熱分析法 水分測(cè)定；與庫(kù)侖法的區(qū)別 晶型的考察； 熔點(diǎn)的測(cè)定； 分解溫度點(diǎn)的確定； 純度的測(cè)定; 含量等。,第二部分 項(xiàng)目、限度和方法,三 檢查項(xiàng)（2制劑，僅和制劑相關(guān)） 制劑檢查項(xiàng)隨劑型不同而不同。重要的有： 固體制劑：重量差異、片重差異、含量均勻度，崩解、溶出度和釋放度和有關(guān)物質(zhì)（異構(gòu)體、降解產(chǎn)物等雜質(zhì)）等； 液體制劑：可見(jiàn)異物，溶液顏色，澄清度，無(wú)菌，熱原、細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法和有關(guān)物質(zhì)（異構(gòu)體、降解產(chǎn)物等雜質(zhì)）等。,第二部分 項(xiàng)目、限度和方法,四 含量測(cè)定 1 原料藥：容量（重量）法首選，色譜法或紫外法次之，色譜法和紫外法的比較； 2 制劑：無(wú)干擾時(shí)可選紫外法，色譜法在復(fù)方或已有有關(guān)物質(zhì)方法時(shí)可首選，一般不用容量法； 3 充分利用容量法、紫外法和色譜法的特性和優(yōu)缺點(diǎn)； 4 實(shí)驗(yàn)研究要深入，不以表象否定方法。,第二部分 項(xiàng)目、限度和方法,容量法要確定參加反應(yīng)的是藥物分子活性部分，而不應(yīng)是次要的酸根或堿基部分。如鹽酸西替立嗪，用氫氧化鈉液滴定時(shí)，測(cè)定的是其中鹽酸的含量，不能代表其活性成分有機(jī)堿的含量，這種方法不能準(zhǔn)確把握其有效成分含量。,第二部分 項(xiàng)目、限度和方法,（1）容量分析法的驗(yàn)證：精密度；準(zhǔn)確度：測(cè)定原料精制品（含量99.5%）的回收率（測(cè)定值與理論值的比值）計(jì)算；滴定終點(diǎn)確定的依據(jù)：包括滴定曲線的繪制，如用指示劑法確定終點(diǎn)，應(yīng)用電位法校準(zhǔn)終點(diǎn)顏色，提供指示劑顏色與電位變化情況的對(duì)比結(jié)果；耐用性。,第二部分 項(xiàng)目、限度和方法,（2）HPLC法的驗(yàn)證： 精密度； 準(zhǔn)確度：回收率對(duì)原料藥無(wú)意義（比對(duì)），制劑回收率（必要）； 線性范圍； 專屬性：輔料、有關(guān)物質(zhì)或降解產(chǎn)物峰應(yīng)無(wú)干擾； 耐用性； 靈敏度：作為常量測(cè)定，無(wú)意義不作為（主要）要求。,第二部分 項(xiàng)目、限度和方法,（3）UV法的驗(yàn)證： 精密度； 準(zhǔn)確度：方法和要求同HPLC法； 線性范圍； 專屬性：輔料、有關(guān)物質(zhì)或降解產(chǎn)物峰應(yīng)無(wú)干擾； 耐用性； 靈敏度：作為常量分析法，此項(xiàng)可不作主要要求。 原料藥回收率試驗(yàn)無(wú)意義，可免做。結(jié)果最好與用其他方法的結(jié)果比較。,第三部分 雜質(zhì)研究與方法,雜質(zhì)研究,雜質(zhì)研究涉及雜質(zhì)分析方法的建立與驗(yàn)證、雜質(zhì)確認(rèn)、雜質(zhì)限度的確定及雜質(zhì)控制等諸方面。,一 雜質(zhì)定義和種類,ICH將藥品中雜質(zhì)按其屬性分為無(wú)機(jī)雜質(zhì)、揮發(fā)性雜質(zhì)和有機(jī)雜質(zhì)三類。包括：,無(wú)機(jī)雜質(zhì),無(wú)機(jī)雜質(zhì)可能來(lái)源于生產(chǎn)過(guò)程，它們通常是已知和已鑒定的，包括試劑、配位體、催化劑，重金屬或其他殘留金屬，無(wú)機(jī)鹽，其他物質(zhì)（如過(guò)濾介質(zhì)、活性炭等）等。 在新藥的研制過(guò)程中應(yīng)對(duì)殘留催化劑進(jìn)行評(píng)估，在標(biāo)準(zhǔn)中是否收載相應(yīng)的檢查項(xiàng)目，應(yīng)進(jìn)行分析討論。標(biāo)準(zhǔn)限度應(yīng)根據(jù)藥典標(biāo)準(zhǔn)或已知的安全性數(shù)據(jù)來(lái)制定。,無(wú)機(jī)雜質(zhì),采用 ICP-MS 分析各類陽(yáng)離子，離子色譜分析陰離子的技術(shù)已相對(duì)成熟，但目前國(guó)內(nèi)對(duì)無(wú)機(jī)雜質(zhì)的控制要求仍相對(duì)簡(jiǎn)單，將是一個(gè)重要的研究方向。 USP制訂藥品重金屬或限量元素總體控制解決新方案，增加三個(gè)新通則：元素雜質(zhì)-限度、元素雜質(zhì)-測(cè)定法、膳食補(bǔ)充劑中的污染元素。,無(wú)機(jī)雜質(zhì),新通則目的是規(guī)定藥物中元素雜質(zhì)含量的限度，這些元素以雜質(zhì)存在于原料藥和制劑（包括天然物和rDNA生物制品）、國(guó)家處方集的輔料、和美國(guó)藥典膳食補(bǔ)充劑綱要的膳食補(bǔ)充劑和營(yíng)養(yǎng)成分中。 膳食補(bǔ)充劑在通則-膳食補(bǔ)充劑中元素雜質(zhì)（2232）中另有規(guī)定。,無(wú)機(jī)雜質(zhì),中元素雜質(zhì)的每日允許暴露量（PDE）與ICHQ3D是一致的。在新通則中，著重描述了測(cè)定元素雜質(zhì)的兩種常用方法：ICP-AES(方法1)和ICP-MS(方法2)，并提出選擇方法的原則。,揮發(fā)性雜質(zhì),目前的焦點(diǎn)是殘留溶劑分析，參照ICH“Q3C雜質(zhì)：殘留溶劑的指導(dǎo)原則”，按照常用的69種有機(jī)溶劑對(duì)人體和環(huán)境的危害程度分為4類控制限度，是指在藥物合成中使用的（或用于制備溶液或混懸液的）有機(jī)或無(wú)機(jī)液體，由于它們一般具有已知毒性，故較易選擇控制方法。 根據(jù)各品種生產(chǎn)工藝確定控制對(duì)象；推薦采用頂空毛細(xì)管氣相色譜法進(jìn)行分析檢測(cè)。,有機(jī)雜質(zhì),包括：起始物、副產(chǎn)物、中間體和降解產(chǎn)物等，如何按照QbD (quality by design)的指導(dǎo)思想，建立有效的分析方法并保證分析方法的耐用性則是有機(jī)雜質(zhì)譜分析的關(guān)鍵。 對(duì)于藥物制劑，需要進(jìn)行控制的雜質(zhì)還包括其活性組分的降解產(chǎn)物或活性組分與賦形劑和(或)內(nèi)包裝/密封系統(tǒng)的反應(yīng)產(chǎn)物。,有機(jī)雜質(zhì),藥物中的雜質(zhì)隨不同來(lái)源（不同生產(chǎn)廠或不同工藝過(guò)程）而異（見(jiàn)右圖）。,有機(jī)雜質(zhì),丁溴東莨菪堿含有酯鍵，在一定pH溶液中發(fā)生水解生成雜質(zhì)。在注射劑工藝中用鹽酸調(diào)節(jié)pH值。采用HPLC法測(cè)定不同pH條件下丁溴東莨菪堿降解產(chǎn)物托品酸濃度，根據(jù)數(shù)據(jù)擬合降解曲線（圖2），研究穩(wěn)定性，可為生產(chǎn)和貯存提供重要的參考依據(jù)。,二 雜質(zhì)研究主要思路,制劑由至少一種API添加各種輔料（或不加）按一定工藝制成，其雜質(zhì)包括原料藥帶入的雜質(zhì)，在制劑制備過(guò)程和貯藏期間產(chǎn)生的降解產(chǎn)物，以及藥物之間、藥物與輔料之間相互作用產(chǎn)生的降解產(chǎn)物。由于制劑比原料藥所含雜質(zhì)的來(lái)源具有多樣性，數(shù)目也可能要多，使制劑的雜質(zhì)研究較原料藥復(fù)雜，復(fù)方制劑又較單方制劑更復(fù)雜。,二 雜質(zhì)研究主要思路,確定各雜質(zhì)的來(lái)源，對(duì)其定性和歸屬，限度確定必須以歸屬為基礎(chǔ)。如對(duì)于毒性雜質(zhì)，需明確歸屬才能嚴(yán)格控制，制定合理的限度。即使對(duì)于微量的未知雜質(zhì)，由于來(lái)源于不同主藥，其可接受的限量可能不同，一般也應(yīng)確定來(lái)源，除非雜質(zhì)的量小于制劑中含量最小藥物可接受的未知雜質(zhì)限量。 歸屬是雜質(zhì)研究首先要解決的問(wèn)題之一。,二 制劑雜質(zhì)研究主要思路,復(fù)方制劑有關(guān)物質(zhì)控制基本原則和單方一樣，可看作是在做兩個(gè)或者三個(gè)產(chǎn)品，不過(guò)是同時(shí)分析幾個(gè)物質(zhì)。相關(guān)的指導(dǎo)原則有ICH Q3A和Q3B和FDA相關(guān)的工業(yè)指南。 首先通過(guò)對(duì)原料藥化學(xué)結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)、穩(wěn)定性等分析，初步預(yù)測(cè)制劑中可能存在的降解產(chǎn)物（雜質(zhì)的分析預(yù)測(cè)），然后通過(guò)進(jìn)一步的試驗(yàn)，對(duì)雜質(zhì)來(lái)源進(jìn)行歸屬。,三 雜質(zhì)研究方法與步驟 3. 1 文獻(xiàn)調(diào)研和資料收集, API生產(chǎn)廠的技術(shù)資料，一般有DMF的會(huì)提供可公開(kāi)的部分，包括工藝流程，合成路徑和所有潛在雜質(zhì)的信息。 同品種在USP、EP中的情況，如雜質(zhì)種類和限量。 初步了解制劑中可能存在的潛在雜質(zhì)和降解產(chǎn)物。 了解原研單位的相關(guān)資料和如何控制雜質(zhì)的，如仿制藥的進(jìn)口注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)是非常重要的信息。,3.2 雜質(zhì)來(lái)源的分析預(yù)測(cè),原料藥引入的雜質(zhì)不是制劑雜質(zhì)研究重點(diǎn)，主要關(guān)注降解產(chǎn)物。通過(guò)對(duì)各原料藥化學(xué)結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)、穩(wěn)定性等分析，初步預(yù)測(cè)可能存在的降解產(chǎn)物。如酯鍵、酰胺鍵易水解，通過(guò)分析可確定水解產(chǎn)生的雜質(zhì)。 原料藥及單方制劑穩(wěn)定性試驗(yàn)對(duì)（復(fù)方）制劑中雜質(zhì)的預(yù)測(cè)具重要參考意義，原料藥及單方制劑貯藏中易出現(xiàn)的降解產(chǎn)物在（復(fù)方）制劑中一般也會(huì)存在。如對(duì)原料藥穩(wěn)定性及降解研究有助于確定不同制劑工藝（如是否接觸水分、是否經(jīng)高溫處理、是否避光等）可產(chǎn)生的雜質(zhì)；通過(guò)對(duì)各原料藥化學(xué)結(jié)構(gòu)分析，可初步判斷主藥間是否存在作用而產(chǎn)生雜質(zhì)。,3.3 建立可靠的分析方法,分析方法是獲取雜質(zhì)信息的重要手段，因此，要選擇合適的分析方法。分析方法的建立是一個(gè)復(fù)雜工程，原則就是方法要簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好、專屬性強(qiáng)。 方法應(yīng)能有效分離各雜質(zhì)，靈敏度除應(yīng)符合一般要求外，還要關(guān)注對(duì)制劑中含量較小的藥物所產(chǎn)生雜質(zhì)的檢出能力。 含量測(cè)定和有關(guān)物質(zhì)都有穩(wěn)定性指示功能的要求，因此，含量和有關(guān)物質(zhì)測(cè)定一般采用相同的色譜條件。評(píng)價(jià)方法是否具有穩(wěn)定性指示功能的主要依據(jù)就是stress study(破壞實(shí)驗(yàn))。, 關(guān)注不同方法間的互補(bǔ)與驗(yàn)證,HPLC-UV法被認(rèn)為是一種理想的檢測(cè)手段，在雜質(zhì)研究中普遍采用，但是，對(duì)于雜質(zhì)檢測(cè)來(lái)講，得到的色譜圖不一定能真實(shí)反映實(shí)際情況。 極性太強(qiáng)化合物可能被掩蓋(與溶劑峰重疊)，極性太小化合物保留在柱上難以被洗脫。 無(wú)紫外吸收不能被檢出，或在檢測(cè)波長(zhǎng)處吸收相差較大的多種化合物不能被同時(shí)有效檢出。如圖A是某注射液穩(wěn)定性考察中286nm檢測(cè)有關(guān)物質(zhì)的色譜圖，圖B為改用230nm檢測(cè)的色譜圖。, 關(guān)注不同方法間的互補(bǔ)與驗(yàn)證, 關(guān)注不同方法間的互補(bǔ)與驗(yàn)證,檢測(cè)波長(zhǎng)應(yīng)兼顧主藥和各雜質(zhì)的吸收情況來(lái)選擇，必要時(shí)在分別在特定波長(zhǎng)下檢測(cè)特定雜質(zhì)。 對(duì)無(wú)紫外吸收的雜質(zhì)，可改用其他類型檢測(cè)器，如選擇蒸發(fā)光散射檢測(cè)器，其靈敏度高于示差折光檢測(cè)器。ECD檢測(cè)器對(duì)于無(wú)紫外吸收的雜質(zhì)檢測(cè)在靈敏度方面更具優(yōu)勢(shì)，如USP30中阿奇霉素有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)在原HPLC-UV方法基礎(chǔ)上增加HPLC-ECD方法，并作為檢測(cè)結(jié)果的仲裁方法。, 關(guān)注不同方法間的互補(bǔ)與驗(yàn)證,HPLC-MS應(yīng)用已非常廣泛，但在標(biāo)準(zhǔn)中應(yīng)用實(shí)例還不多，要從必要性、實(shí)用性和經(jīng)濟(jì)性等方面考慮選擇。 應(yīng)注意不同原理的分析方法間的相互補(bǔ)充與驗(yàn)證，如HPLC與TLC的互相補(bǔ)充，反相HPLC系統(tǒng)與正相HPLC系統(tǒng)的相互補(bǔ)充，HPLC不同檢測(cè)器的相互補(bǔ)充等。藥物雜質(zhì)多樣性決定了有時(shí)以現(xiàn)有技術(shù)難以使用一種檢測(cè)手段同時(shí)檢測(cè)所有雜質(zhì)，如采用TLC法檢測(cè)無(wú)紫外吸收且極性過(guò)大的雜質(zhì)，用HPLC法檢測(cè)其他雜質(zhì)。, 關(guān)注不同雜質(zhì)色譜行為的差異,雜質(zhì)比較復(fù)雜且多是未知物，極性、油/水分配等特性有時(shí)相差較大，等度洗脫法難以在較短時(shí)間完全洗脫所有雜質(zhì)，梯度洗脫法可在較短時(shí)間內(nèi)有效分離極性相差懸殊的物質(zhì)。合適的梯度不僅可優(yōu)化各物質(zhì)保留時(shí)間，較短時(shí)間內(nèi)全部洗脫各種雜質(zhì)，同時(shí)還可改善峰形，提高檢測(cè)靈敏度。在國(guó)外雜質(zhì)研究中廣為應(yīng)用，呈現(xiàn)出逐步取代等。 但與等度法相比，梯度法操作復(fù)雜，可引起色譜基線漂移，影響結(jié)果精密度。如果等度法可有效檢出相關(guān)雜質(zhì)，應(yīng)作為首選，但方法學(xué)驗(yàn)證中，梯度法在驗(yàn)證等度法是否有效檢出所有相關(guān)雜質(zhì)時(shí)具有重要意義。, 采用新的雜質(zhì)檢測(cè)手段,國(guó)際上雜質(zhì)研究不斷吸納分析科學(xué)新成就，色譜儀器越來(lái)越專業(yè)化（凝膠色譜、離子色譜、逆流色譜等相繼用于檢測(cè)），色譜與光譜聯(lián)用技術(shù)越來(lái)越成熟，如HPLC-UV、HPLC-MS、HPLC-NMR、GC-MS、GC-IR等已經(jīng)成為最重要的方法，但是，在雜質(zhì)結(jié)構(gòu)分析鑒定中，各種光譜技術(shù)（UV、IR、MS、NMR和X-射線衍射法等）仍然是不可或缺的方法。 各類數(shù)據(jù)庫(kù)越來(lái)越豐富，聯(lián)機(jī)智能化解析系統(tǒng)越來(lái)越普及，為雜質(zhì)研究提供了更為完善的利器。, 采用新的雜質(zhì)檢測(cè)手段,雜質(zhì)檢測(cè)逐步呈現(xiàn)出全面檢出（梯度洗脫，多檢測(cè)手段互補(bǔ)、明確靈敏度要求）、有效分離（規(guī)定最難分離物質(zhì)對(duì)色譜峰的分離度）、目標(biāo)明確（特定雜質(zhì)、非特定雜質(zhì)）、準(zhǔn)確定量（外標(biāo)、校正因子、歸一法相結(jié)合）的趨勢(shì)。 反觀國(guó)內(nèi)雜質(zhì)研究情況則基本沿用十幾年一貫制的反相HPLC-UV組合的檢測(cè)方法，色譜柱仍局限于C8、C18及-CN等常規(guī)填料，洗脫方式基本采用簡(jiǎn)單的等度洗脫法，對(duì)雜質(zhì)定量也多為自身對(duì)照法，差距較為明顯。,4 雜質(zhì)譜分析與雜質(zhì)確認(rèn),以雜質(zhì)譜為主線，以安全性為核心，將雜質(zhì)研究與化學(xué)、生產(chǎn)與控制、藥理毒理及臨床安全性研究等環(huán)節(jié)密切聯(lián)系，通盤考量。 遺傳毒性雜質(zhì)對(duì)細(xì)胞DNA產(chǎn)生損傷，不能僅研究主成分、還應(yīng)包括雜質(zhì)的遺傳毒性。 雜質(zhì)譜含所有雜質(zhì)種類、含量、來(lái)源及結(jié)構(gòu)等信息。通過(guò)雜質(zhì)譜分析較為全面地掌握雜質(zhì)概貌（包括來(lái)源和結(jié)構(gòu))；應(yīng)確保雜質(zhì)有效檢出和確認(rèn)；跟蹤雜質(zhì)譜對(duì)安全性或臨床試驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生的影響，評(píng)估雜質(zhì)可接受水平；結(jié)合生產(chǎn)時(shí)雜質(zhì)譜的變化，評(píng)估雜質(zhì)安全性風(fēng)險(xiǎn)，確立安全的雜質(zhì)控制水平。,4 雜質(zhì)譜分析與雜質(zhì)確認(rèn),從制備工藝和產(chǎn)品結(jié)構(gòu)分析入手，評(píng)估、預(yù)測(cè)可能存在的副產(chǎn)物、中間體、降解物以及試劑、催化劑等大體雜質(zhì)概況，考證建立的分析方法是否能夠?qū)⑺鼈冎鹨粰z出，并進(jìn)行相應(yīng)的驗(yàn)證工作，是雜質(zhì)研究的主動(dòng)思維，而傳統(tǒng)的被動(dòng)行為僅從建立的一種檢測(cè)方法所檢出的有關(guān)物質(zhì)歸屬其來(lái)源情況，容易出現(xiàn)雜質(zhì)漏檢的情況，難以全面掌握雜質(zhì)譜。雜質(zhì)譜分析對(duì)于合理確定雜質(zhì)限度、降低雜質(zhì)安全性風(fēng)險(xiǎn)具有重要意義。,4 雜質(zhì)譜分析與雜質(zhì)確認(rèn),雜質(zhì)控制理念變遷為三個(gè)主要階段： 純度控制：通過(guò)對(duì)純度控制間接實(shí)現(xiàn)雜質(zhì)控制。 雜質(zhì)限度控制：?jiǎn)渭兊摹跋薅瓤刂啤崩砟畲嬖谌毕荨?雜質(zhì)譜：諸雜質(zhì)的種類與含量被總稱為雜質(zhì)譜(impurity profiles)。理想的控制理念是針對(duì)藥品中每一個(gè)雜質(zhì)，依據(jù)藥理、毒理學(xué)試驗(yàn)結(jié)果和生理活性逐一制定其質(zhì)控限度。 在標(biāo)準(zhǔn)中按“雜質(zhì)譜控制”的理念對(duì)藥品中雜質(zhì)進(jìn)行控制是雜質(zhì)控制的最終目標(biāo)，而對(duì)雜質(zhì)結(jié)構(gòu)的推斷則是雜質(zhì)研究/控制過(guò)程中最重要環(huán)節(jié)。,5 雜質(zhì)限度確定的基本思路,綜合藥學(xué)、藥理毒理及臨床研究結(jié)果綜合判定， 除用含雜質(zhì)的 樣品也可用該雜質(zhì)進(jìn)行毒理試驗(yàn)，為雜質(zhì)限度的確定提供依據(jù)。 某已知雜質(zhì)的毒性文獻(xiàn)記載，可作為雜質(zhì)限度確定的依據(jù)之一。 對(duì)雜質(zhì)的控制及其限度：還應(yīng)考慮 非臨床安全性和臨床研究用樣品的雜質(zhì)概況， 工藝穩(wěn)定的具有一定代表性批次大生產(chǎn)產(chǎn)品的雜質(zhì)概況匯總和分析。,5 雜質(zhì)限度確定的基本思路,確定雜質(zhì)限度的基本原則是As Low As Reasonable Practicable (ALARP)，包括： 雜質(zhì)的活性或毒性，是評(píng)估雜質(zhì)可接受水平的核心要素，限度確定的首要依據(jù)。 工藝、生產(chǎn)中正常波動(dòng)和制備工藝耐用性反映出的產(chǎn)品質(zhì)量批內(nèi)一致性和批間重復(fù)性。 分析方法能達(dá)到的檢測(cè)水平，可接受的誤差和精密度。 穩(wěn)定性，產(chǎn)品儲(chǔ)運(yùn)過(guò)程中控制降解的方法和措施，以及擬定貯藏條件下能使產(chǎn)品保持其規(guī)定質(zhì)量指標(biāo)的有效期。,6 異構(gòu)體雜質(zhì),藥物的異構(gòu)體也常是藥物的雜質(zhì)，應(yīng)在藥品標(biāo)準(zhǔn)中進(jìn)行控制。 手性異構(gòu)體雜質(zhì)控制 手性藥物質(zhì)量研究的一個(gè)關(guān)鍵就是對(duì)藥物光學(xué)純度的控制。分析手性藥物光學(xué)純度的常用方法有：比旋度法、圓二色光譜法和手性色譜法。比旋度法較為簡(jiǎn)單，但影響比旋度數(shù)值的因素較多，必要時(shí)，可采用圓二色光譜法和手性色譜法，可以更為準(zhǔn)確直觀地反映各立體異構(gòu)體雜質(zhì)的變化情況。,6 異構(gòu)體雜質(zhì), 互變異構(gòu)體分析 在常溫下蘭索拉唑以I和II式兩種構(gòu)型同時(shí)存在于溶液中，兩種構(gòu)型間不斷翻轉(zhuǎn)互變，從而使部分BNR譜線變寬。溫度上升，兩種異構(gòu)體翻轉(zhuǎn)互變速度不斷加快，I式與II式構(gòu)型中某些信號(hào)化學(xué)位移逐步靠近，寬峰變窄，甚至合并成單峰；溫度的下降，兩種異構(gòu)體翻轉(zhuǎn)互變速度下降，在丙酮中溫度降到70C后，化合物以一種穩(wěn)定構(gòu)型存在。,四 雜質(zhì)歸屬研究的注意事項(xiàng),1 分別測(cè)定各原料藥、原料藥按處方比例混合物、輔料、原輔料混合物、制劑樣品在確定的雜質(zhì)檢查色譜條件下的HPLC圖譜，對(duì)上述圖譜進(jìn)行對(duì)比研究，以確定制劑色譜圖中輔料峰、由各原料藥引入的雜質(zhì)峰。另外，可通過(guò)比較各原料藥的HPLC圖譜與原料藥混合物的HPLC圖譜初步確定原料藥之間是否有相互作用；通過(guò)比較原料藥混合物的HPLC圖譜、輔料的HPLC圖譜以及原輔料混合物的HPLC圖譜，可初步確定原輔料之間是否有相互作用；通過(guò)比較原輔料混合物的HPLC圖譜與制劑的HPLC圖譜，可初步確定制劑過(guò)程是否引起主藥的降解和雜質(zhì)的增加。,四 雜質(zhì)歸屬研究的注意事項(xiàng),2 對(duì)各原料藥、原料藥按處方比例混合物、輔料、原輔料混合物、制劑分別進(jìn)行光、熱、濕影響因素試驗(yàn)，測(cè)定試驗(yàn)前后樣品的HPLC圖譜并進(jìn)行比較分析，可明確制劑中藥物在強(qiáng)光、高溫、高濕條件下的主要降解產(chǎn)物，對(duì)（復(fù)方）制劑中的降解產(chǎn)物進(jìn)行歸屬，并可通過(guò)上述比較研究，基本確定藥物與藥物之間、藥物與輔料之間在劇烈條件下是否存在相互作用，是否產(chǎn)生新的雜質(zhì)。,四 雜質(zhì)歸屬研究的注意事項(xiàng),3 對(duì)各原料藥、原料藥混合物、輔料、原輔料混合物、制劑分別進(jìn)行穩(wěn)定性加速試驗(yàn)（試驗(yàn)條件一般選擇40，相對(duì)濕度75），測(cè)定不同時(shí)間樣品的HPLC圖譜并進(jìn)行比較分析，并與制劑長(zhǎng)期留樣試驗(yàn)樣品的測(cè)定結(jié)果進(jìn)行比較。通過(guò)這些研究工作，可進(jìn)一步明確（復(fù)方）制劑中各雜質(zhì)的歸屬，明確藥物在加速試驗(yàn)條件下及一般貯藏條件下的主要降解產(chǎn)物，為確定貯藏條件及質(zhì)量控制重點(diǎn)建立基礎(chǔ)。,第四部分 質(zhì)量分析方法驗(yàn)證,藥品檢驗(yàn)方法驗(yàn)證的重要性 設(shè)計(jì)的檢驗(yàn)方法應(yīng)能達(dá)到預(yù)期的效果，保證測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠，確保藥品的安全有效。CHP藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則，藥審中心-化學(xué)藥物質(zhì)量控制分析方法，USP通則1225藥典分析方法驗(yàn)證、通則1226藥典分析方法確認(rèn)，均依照ICH Q2(R1)。 USP明確規(guī)定：分析方法驗(yàn)證：建立方法要驗(yàn)證，修訂方法要驗(yàn)證；分析方法確認(rèn)：應(yīng)用方法時(shí)要確認(rèn)方法是否適用。,驗(yàn)證的目的（CHP）,“是證明采用的方法適合于相應(yīng)檢測(cè)要求。在建立藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，分析方法需經(jīng)驗(yàn)證；在藥品生產(chǎn)工藝變更、制劑的組分變更、中藥處方變更、原分析方法進(jìn)行修訂時(shí)，則質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法也需進(jìn)行驗(yàn)證。方法驗(yàn)證理由、過(guò)程和結(jié)果均應(yīng)記載在藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)起草說(shuō)明或修訂說(shuō)明中。 生物制品質(zhì)量控制中采用的方法包括理化分析方法和生物學(xué)測(cè)定方法，其中理化分析方法的驗(yàn)證原則與化學(xué)藥品基本相同，所以可參照本指導(dǎo)原則進(jìn)行，但在進(jìn)行具體驗(yàn)證時(shí)還需要結(jié)合生物制品的特點(diǎn)考慮；生物學(xué)測(cè)定有更多的影響因素，一般要使用動(dòng)物、細(xì)胞或生物分子，因此對(duì)于生物學(xué)測(cè)定的判斷標(biāo)準(zhǔn)另作說(shuō)明?！?需驗(yàn)證的項(xiàng)目和內(nèi)容（CHP）,分析項(xiàng)目：鑒別試驗(yàn)、雜質(zhì)限度檢查或定量檢查、原料藥或制劑中有效成分含量測(cè)定，以及制劑中其他成分(如防腐劑等，中藥中如殘留物、添加劑等）的測(cè)定。藥品溶出度、釋放度等檢査中，其溶出量等的測(cè)試方法也應(yīng)進(jìn)行必要驗(yàn)證。 驗(yàn)證內(nèi)容：準(zhǔn)確度、精密度（包括重復(fù)性、中間精密度和重現(xiàn)性）、專屬性、檢測(cè)限、定量限、線性、范圍和耐用性。視具體方法擬訂驗(yàn)證的內(nèi)容。 ICH需驗(yàn)證的分析類型（項(xiàng)目）和驗(yàn)證的分析特性(內(nèi)容)和中國(guó)藥典相似。,一 準(zhǔn)確度 （1 含量測(cè)定方法的準(zhǔn)確度）,原料藥可用已知純度的對(duì)照品或供試品進(jìn)行測(cè)定，或用本法所得結(jié)果與已知準(zhǔn)確度的另一個(gè)方法測(cè)定的結(jié)果進(jìn)行比較。 制劑可在處方量空白輔料中，加入已知量被測(cè)物（原文可用含已知量被測(cè)物的各組分混合物）進(jìn)行測(cè)定。如不能得到制劑輔料的全部組分，可向待測(cè)制劑中加入已知量的被測(cè)物進(jìn)行測(cè)定，或用本法所得結(jié)果與已知準(zhǔn)確度的另一個(gè)方法測(cè)定結(jié)果進(jìn)行比較。 如已測(cè)試并求出了精密度、線性和專屬性，在準(zhǔn)確度也可推算出來(lái)的情況下，此項(xiàng)可豁免驗(yàn)證。,一 準(zhǔn)確度 （2 雜質(zhì)定量測(cè)定的準(zhǔn)確度）,可向原料藥或制劑處方量空白輔料中加入已知量雜質(zhì)進(jìn)行測(cè)定。如不能得到雜質(zhì)或降解產(chǎn)物對(duì)照品，可用本法測(cè)定結(jié)果與另一成熟的方法進(jìn)行比較，如藥典標(biāo)準(zhǔn)方法或經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的方法。 測(cè)定雜質(zhì)或降解產(chǎn)物含量時(shí)，可采用加校正因子的主成分自身對(duì)照法。在無(wú)法獲得雜質(zhì)或降解產(chǎn)物的校正因子的情況下，或校正因子可以忽略時(shí)，也可采用不加校正因子的主成分自身對(duì)照法。 應(yīng)明確表明單個(gè)雜質(zhì)和雜質(zhì)總量相當(dāng)于主成分的重量比（%）或面積比（%）。,一 準(zhǔn)確度 （3 中藥測(cè)定方法的準(zhǔn)確度）,可用已知純度的對(duì)照品進(jìn)行加樣回收率測(cè)定，即于已知被測(cè)成分含量的供試品中再精密加入一定量的已知純度的被測(cè)成分對(duì)照品，依法測(cè)定。用實(shí)測(cè)值與供試品中含有量之差，除以加入對(duì)照品量計(jì)算回收率。在加樣回收試驗(yàn)中須注意對(duì)照品的加入量與供試品中被測(cè)成分含有量之和必須在標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍之內(nèi)；加入的對(duì)照品的量要適當(dāng)，過(guò)小則引起較大的相對(duì)誤差，過(guò)大則干擾成分相對(duì)減少，真實(shí)性差。 回收率=（C-A）/B100% 式中A為供試品所含被測(cè)成分量；B為加入對(duì)照品量；C為實(shí)測(cè)值。,一 準(zhǔn)確度 （4 校正因子的準(zhǔn)確度）,對(duì)色譜方法而言，絕對(duì)(或定量)校正因子是指單位面積的色譜峰代表的待測(cè)物質(zhì)的量。待測(cè)定物質(zhì)與所選定的參照物質(zhì)的絕對(duì)校正因子之比，即為相對(duì)校正因子(簡(jiǎn)稱校正因子)。參照物質(zhì)又稱為參比物質(zhì)或替代物；通常以主成分作為參照物質(zhì)，也可選擇其他成分或加入的任一物質(zhì)作為參照物質(zhì)。校正因子計(jì)算法常用于化學(xué)藥有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定、中藥材及其復(fù)方制劑中多指標(biāo)成分的測(cè)定。校正因子的表示方法很多，本指導(dǎo)原則中的校正因子是指氣相色譜法和高效液相色譜法中的相對(duì)重量校正因子。 校正因子可采用參照物質(zhì)對(duì)照品和待測(cè)物對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率比值進(jìn)行比較獲得；采用紫外吸收檢測(cè)器時(shí)，可將參照物質(zhì)對(duì)照品和待測(cè)物對(duì)照品在規(guī)定的波長(zhǎng)和溶劑條件下吸收系數(shù)比值進(jìn)行比較來(lái)計(jì)算獲得。,一 準(zhǔn)確度 （5 數(shù)據(jù)要求）,在規(guī)定范圍內(nèi)，取相當(dāng)于100%濃度水平的供試品，用至少6次的結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)；或設(shè)計(jì)3個(gè)不同濃度，每個(gè)濃度分別制備3份供試品溶液，用9個(gè)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)。 化學(xué)藥，一般中間濃度加入量與待測(cè)定成分量之比控制在1:1左右，高、中、低濃度對(duì)照品加入量在1.2:1，1:1，0.8:1左右，應(yīng)報(bào)告已知加入量的回收率（%），或測(cè)定結(jié)果平均值與真實(shí)值之差及其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差或可信限； 對(duì)于中藥，一般中間濃度加入量與所取供試品中待測(cè)定成分量之比控制在1:1左右，高、中、低濃度對(duì)照品加入量與所取供試品中待測(cè)定成分量之比在1.5:1，1:1，0.5:1左右，應(yīng)報(bào)告供試品取樣量、供試品中含有量、對(duì)照品加入量、測(cè)定結(jié)果和回收率（%）計(jì)算值，以及回收率（%）的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD%）或可信限（置信度，又稱置信水平，設(shè)定值是95%。）。 對(duì)于校正因子，應(yīng)報(bào)告測(cè)定方法、測(cè)定結(jié)果和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD%）。,一 準(zhǔn)確度 （ 樣品中待測(cè)成分含量與回收率限度）,二 精密度,精密度一般用偏差、標(biāo)準(zhǔn)偏差或相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差表示。 在相同條件下，由同一個(gè)分析人員測(cè)定所得結(jié)果的精密度稱為重復(fù)性；在同一個(gè)實(shí)驗(yàn)室，不同時(shí)間由不同分析人員用不同設(shè)備測(cè)定結(jié)果之間的精密度，稱為中間精密度；在不同實(shí)驗(yàn)室由不同分析人員測(cè)定結(jié)果之間的精密度，稱為重現(xiàn)性。 含量測(cè)定和雜質(zhì)的定量測(cè)定應(yīng)考慮方法的精密度。,二 精密度,1.重復(fù)性 在規(guī)定范圍內(nèi)，取同一濃度（相當(dāng)于100%濃度水平）的供試品，用至少測(cè)定6次的結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)；或設(shè)計(jì)3個(gè)不同濃度，每個(gè)濃度分別制備3份供試品溶液進(jìn)行測(cè)定，用9個(gè)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)。 2.中間精密度 為考察隨機(jī)變動(dòng)因素對(duì)精密度的影響，應(yīng)設(shè)計(jì)方案進(jìn)行中間精密度試驗(yàn)。變動(dòng)因素為不同日期、不同分析人員、不同設(shè)備。,二 精密度,3.重現(xiàn)性 法定標(biāo)準(zhǔn)采用的分析方法，應(yīng)進(jìn)行重現(xiàn)性試驗(yàn)。例如，建立藥典分析方法時(shí)，通過(guò)協(xié)同檢驗(yàn)獲得重現(xiàn)性結(jié)果。協(xié)同檢驗(yàn)的目的、過(guò)程和重現(xiàn)性結(jié)果均應(yīng)記載在起草說(shuō)明中。應(yīng)注意重現(xiàn)性試驗(yàn)用樣品質(zhì)量的一致性及貯存運(yùn)輸中的環(huán)境對(duì)該一致性的影響（原文：應(yīng)注意重現(xiàn)性試驗(yàn)用樣品本身質(zhì)量的均勻性和貯存運(yùn)輸中的環(huán)境影響因素），以免影響重現(xiàn)性結(jié)果。 4.數(shù)據(jù)要求 均應(yīng)報(bào)告標(biāo)準(zhǔn)偏差、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差和可信限。樣品中待測(cè)定成分含量和精密度RSD可接受范圍參考表2。,二 精密度,樣品中待測(cè)定成分含量和精密度RSD可接受范圍,三 專屬性,鑒別反應(yīng)、雜質(zhì)檢査和含量測(cè)定方法，均應(yīng)考察其專屬性。如方法專屬性不夠，應(yīng)采用多種不同原理的方法予以補(bǔ)充。 1.鑒別反應(yīng) 應(yīng)能與可能共存的物質(zhì)或結(jié)構(gòu)相似化合物區(qū)分。不含被測(cè)成分的供試品，以及結(jié)構(gòu)相似或組分中的有關(guān)化合物，應(yīng)均呈負(fù)反應(yīng)。 2.含量測(cè)定和雜質(zhì)測(cè)定 色譜法和其他分離方法，應(yīng)附代表性圖譜，以說(shuō)明方法的專屬性，并應(yīng)標(biāo)明諸成分在圖中的位置，色譜法中的分離度應(yīng)符合要求。,三 專屬性,在雜質(zhì)對(duì)照品可獲得的情況下，對(duì)于含量測(cè)定，試樣中可加入雜質(zhì)或輔料，考察測(cè)定結(jié)果是否受干擾，并可與未加雜質(zhì)或輔料的試樣比較測(cè)定結(jié)果。對(duì)于雜質(zhì)檢查，也可向試樣中加入一定量的雜質(zhì)，考察雜質(zhì)之間能否得到分離。 在雜質(zhì)或降解產(chǎn)物不能獲得情況下，可將含有雜質(zhì)或降解產(chǎn)物的試樣進(jìn)行測(cè)定，與另一個(gè)經(jīng)驗(yàn)證了的方法或藥典方法比較結(jié)果。用強(qiáng)光照射、高溫、高濕、酸（堿）水解或氧化的方法進(jìn)行加速破壞，以研究可能的降解產(chǎn)物和降解途徑。含量測(cè)定方法應(yīng)比對(duì)二法的結(jié)果，雜質(zhì)檢查應(yīng)比對(duì)檢出的雜質(zhì)個(gè)數(shù)，必要時(shí)可采用光二極管陣列檢測(cè)和質(zhì)譜檢測(cè)，進(jìn)行峰純度檢查。,四 檢測(cè)限,檢測(cè)限系指試樣中被測(cè)物能被檢測(cè)出的最低量。鑒別試驗(yàn)和雜質(zhì)檢查法，均應(yīng)通過(guò)測(cè)試確定方法的檢測(cè)限。常用的方法如下。 1.直觀法（原文：非儀器分析目測(cè)法） 用已知濃度的被測(cè)物，試驗(yàn)出能被可靠地檢測(cè)出的最低濃度或量。 2.信噪比法 用于能顯示基線噪聲的分析方法，即把已知低濃度試樣測(cè)出的信號(hào)與空白樣品測(cè)出的信號(hào)進(jìn)行比較，算出能被可靠地檢測(cè)出的最低濃度或量。一般以信噪比為3:1或2:1時(shí)相應(yīng)濃度或注入儀器的量確定檢測(cè)限。,四 檢測(cè)限,3.基于響應(yīng)值標(biāo)準(zhǔn)偏差和標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率法 DL=3.3/S （：響應(yīng)值的偏差；S：標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率） 可以通過(guò)一系列方法測(cè)得，如：（1）測(cè)定空白值的標(biāo)準(zhǔn)偏差；（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線的剩余標(biāo)準(zhǔn)偏差或是截距的標(biāo)準(zhǔn)偏差來(lái)代替 剩余標(biāo)準(zhǔn)偏差SE（即通過(guò)線性回歸法計(jì)算縱坐標(biāo)預(yù)測(cè)值所產(chǎn)生的標(biāo)準(zhǔn)誤差），在Excel中的函數(shù)是STEYX。,四 檢測(cè)限,4.數(shù)據(jù)要求 上述計(jì)算方法獲