ACL-TOP全自動血凝分析儀實驗性能評價.doc

ACL TOP全自動血凝分析系統(tǒng)的建立與性能評價華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院檢驗科唐寧 曹文靜* 夏汛生 張碧玉 田磊*：通訊作者，華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院檢驗科，湖北 武漢 430030 電話103 EMAIL：tj_摘要：目的 對ACL TOP全自動血凝分析儀進(jìn)行全面性能評價，建立優(yōu)化適用的血凝分析系統(tǒng)。方法 按照臨床和實驗室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(CLSI，原名NCCLS)相關(guān)文件的要求，選擇代表三種方法學(xué)的指標(biāo)常規(guī)進(jìn)行重復(fù)性、穩(wěn)定性、線性、抗生物性干擾物質(zhì)實驗；并與同系列ACL Futura型全自動血凝分析儀進(jìn)行比對實驗；收集250份健康體檢者枸櫞酸鈉抗凝血建立ACL TOP全自動血凝分析系統(tǒng)本地區(qū)的生物參考區(qū)間。結(jié)果 凝血酶原時間（PT）、活化的部分凝血活酶時間（APTT）、凝血酶時間（TT）、纖維蛋白原（Fbg, Clauss法）、D-二聚體（D-D）、抗凝血酶（AT）的批內(nèi)及日間變異系數(shù)均小于6%；線性實驗中Fbg、D-D、AT的稀釋變異P值均小于P0.05，線性失擬檢查G值均小于F0.05；輕至中度黃疸、脂血、溶血對各檢測指標(biāo)的影響度均低于6%；與ACL Futura比對，PT、APTT、TT、Fbg的相關(guān)系數(shù)r值分別為：0.9751、0.9248、0.9766、0.9901，僅Fbg在各醫(yī)學(xué)決定水平的相對偏差均低于允許誤差；本地區(qū)PT、APTT、TT、Fbg的參考區(qū)間分別確定為：8.811.8秒、2841秒、1217秒、2.04.4g/L。結(jié)論 ACL TOP血凝儀具有良好的重復(fù)性、穩(wěn)定性、線性和抗生物性物質(zhì)干擾能力，與ACL Futura血凝儀常規(guī)凝血指標(biāo)比對結(jié)果不理想，需重新建立基于ACL TOP血凝分析系統(tǒng)的項目參考區(qū)間。關(guān)鍵詞：全自動分析系統(tǒng)；血液凝固；性能評價Establishment and evaluation of ACL TOP automatic blood coagulation analytical system. TANG Ning, CAO Wenjing, XIA Xunsheng, etc, Department of Laboratary medicine, Tongji Hospital, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan, Hubei 430030Abstract: Objective To evaluate the performance of ACL TOP automatic coagulation analyzer and establish an optimized coagulation analytical system. Methods According to the documents of Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI), we select the tests which represent three analytical methods to perform repeatability, stability, linearity and anti-interference tests and methodologic comparison of ACL TOP to ACL Futura automatic blood coagulation analyzer. Then 250 specimens from healthy population were collected and assayed to determine the reference range for routine tests on ACL TOP. Results The within-run and between-day coefficient of variability (CV) of prothrombin time (PT), activated partial thromboplastin time (APTT), thrombin time (TT), fibrinogen (Fbg, Clauss method), d-dimer (D-D) and anti-thrombin (AT) were both less than 6%, respectively. P values for Fbg, D-D, AT are less than P0.05, according to the linearity test and G values less than F0.05. The extent of influence of low to middle grade of jaundice, fat and hemolysis on each test are all less than 6%. In the comparison to ACL FUTURA, the coefficient of relativity(r value) for PT, APTT, TT and Fbg was 0.9751,0.9248,0.9766 0.9901, respectively. Only the relative error of Fbg on each medical determination level was less than allowed error. The reference range for PT, APTT, TT and Fbg was 8.811.8 s, 2841 s, 1217 s, 2.04.4g/L, respectively. Conclusion The ACL TOP coagulation analyzer has good repeatability, stability, linearity and capability of anti-interference. But the results of comparison to ACL FUTURA are not identical. So it is necessary to determine new reference range for tests on ACL TOP coagulation analytical system.Key Words: Automatic analytical system; Coagulation; Performance evaluation一個標(biāo)準(zhǔn)化實驗室引進(jìn)新的分析儀器及試劑時，必須遵循標(biāo)準(zhǔn)化程序和質(zhì)量管理的要求建立新的分析系統(tǒng)及進(jìn)行性能評價，以確保分析系統(tǒng)的正確運行并充分了解其實驗性能。ACL TOP全自動血凝分析儀是我院在國內(nèi)率先引進(jìn)的美國IL公司生產(chǎn)的新型全自動血凝分析儀，正式投入使用前，根據(jù)臨床和實驗室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會（CLSI，原名NCCLS）相關(guān)文件的要求，對儀器的重復(fù)性、穩(wěn)定性、線性、抗生物物質(zhì)干擾能力等進(jìn)行評價，同時與IL公司同系列的ACL Futura全自動血凝分析系統(tǒng)進(jìn)行比對，并根據(jù)需要建立了本地區(qū)凝血常規(guī)指標(biāo)的新生物參考區(qū)間。1 材料1.1 儀器：ACL TOP全自動血凝分析儀、ACL Futura全自動血凝分析儀（Instrumentation Laboratory, IL, 美國），儀器操作、維護(hù)保養(yǎng)遵循儀器說明書。1.2 試劑：ACL TOP及ACL Futura血凝分析儀均使用IL公司提供的配套試劑；校準(zhǔn)品、質(zhì)控品（IL公司）；膽紅素標(biāo)準(zhǔn)品（上?？迫A公司生產(chǎn)，批號：GF62K）；脂肪乳（主要成分為甘油三酯，華瑞制藥有限公司生產(chǎn)，批號：0510019）；血紅蛋白（日本國際試藥株式會社）。1.3 標(biāo)本：采用隨機的住院病人新鮮全血標(biāo)本進(jìn)行線性、生物干擾、攜帶污染率及比對實驗；收集本院體檢中心250名健康體檢人員全血標(biāo)本建立生物參考區(qū)間。全血標(biāo)本用真空采血管1:9枸櫞酸鈉（109mmol/L, 3.2%）抗凝，并于3000rpm離心10min取得乏血小板血漿4小時內(nèi)完成檢測。2 方法2.1 檢測項目及方法：包括凝血酶原時間（prothrombin time, PT）、活化的部分凝血活酶時間（activated partial thromboplastin time, APTT）、凝血酶時間（thrombin time, TT）均為凝固法；纖維蛋白原（fibrinogen, Fbg）為Clauss法；D-二聚體（d-dimer, D-D）為免疫比濁法；抗凝血酶（antithrombin, AT）為發(fā)色底物法。2.2 儀器項目的校標(biāo)：用相應(yīng)的校準(zhǔn)品對ACL TOP血凝分析儀上的如PT、Fbg、D-D、AT進(jìn)行校標(biāo)，儀器自動按比例稀釋校準(zhǔn)血漿，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線并得出回歸方程和相關(guān)系數(shù)；對于沒有標(biāo)準(zhǔn)品的項目（如APTT、TT），通過檢測IL公司提供的正常值和異常值質(zhì)控品，觀察其結(jié)果是否在質(zhì)控允許范圍內(nèi)。2.3 重復(fù)性實驗（批內(nèi)精密度）：根據(jù)CLSI的EP5-A2文件1對于精密度評價的要求，用正常水平和異常水平定值質(zhì)控品在ACL TOP血凝儀上分別測定APTT、PT、TT、Fbg、D-D、AT，以了解三種檢測原理的重復(fù)性。由于D-D異常質(zhì)控品較難獲得，使用D-D校準(zhǔn)品（D-D = 1050ng/ml）作為異常高值樣品。各項指標(biāo)在3小時內(nèi)各水平連續(xù)測定20次，計算均值（）、標(biāo)準(zhǔn)差（S）、變異系數(shù)（CV）。2.4 穩(wěn)定性實驗（日間精密度）：使用重復(fù)性試驗中的質(zhì)控品在ACL TOP血凝分析儀上測定APTT、PT、TT、Fbg、D-D、AT各水平，每天測定1次，連續(xù)測定20天，計算、S、CV。2.5 線性實驗：根據(jù)CLSI 2對線性評價的要求，分別選取Fbg、D-D、AT的高值和低值病人標(biāo)本，低值標(biāo)本為1號，高值標(biāo)本為5號，二者3:1混合為2號，等份混合為3號，1:3混合為4號，制備成5個濃度梯度的樣品，每個濃度樣品隨機排列在ACL TOP血凝儀上重復(fù)測定4次，根據(jù)檢測結(jié)果進(jìn)行線性回歸分析、稀釋變異試驗及線性失擬檢查。2.6 生物性物質(zhì)干擾實驗：根據(jù)CLSI EP7-A文件3對干擾實驗的相關(guān)要求，采用在體外向正常人混合血漿中加入不同濃度膽紅素、脂肪乳、血紅蛋白的方法評價ACL TOP血凝儀抗黃疸、脂血、溶血干擾的能力，檢測項目為APTT、PT、TT、Fbg，每個濃度水平檢測兩次取均值作為檢測結(jié)果，加入的最高濃度參考臨床標(biāo)本可能出現(xiàn)的最高含量及各試劑說明書的說明。根據(jù)加入干擾物質(zhì)前后的測定值計算影響度，影響度=（加入后測定值-加入前測定值）/加入前測定值100%。2.7 與ACL Futura血凝分析系統(tǒng)的比對實驗：根據(jù)CLSI EP9-A2文件4對能力比對與偏差估計的相關(guān)要求，選取凝血時間正常和異常的住院病人血漿40例，分別在ACL TOP血凝分析儀和ACL Futura血凝分析儀上平行檢測APTT、PT、TT、Fbg，每天8例血漿，按18，81排序檢測兩次，連續(xù)檢測5天。最后對檢測結(jié)果進(jìn)行離群點檢查、相關(guān)性分析及偏差估計。2.8 生物參考區(qū)間的建立：收集250名來我院健康體檢者標(biāo)本，年齡186歲，男127例，女73例。在ACL TOP血凝分析儀上檢測APTT、PT、TT、Fbg，檢測結(jié)果經(jīng)正態(tài)性D檢驗若確定為正態(tài)分布，根據(jù)均值1.96標(biāo)準(zhǔn)差計算各項目參考區(qū)間，否則按百分位數(shù)法計算參考區(qū)間5。2.9 統(tǒng)計方法：使用SPSS11.0軟件分析包。3 結(jié)果3.1 重復(fù)性與穩(wěn)定性：ACL TOP全自動血凝分析儀的重復(fù)性與穩(wěn)定性實驗結(jié)果見表1。各項目批內(nèi)及日間CV值均0.05，可以認(rèn)為檢測數(shù)據(jù)呈正態(tài)分布（見表5），根據(jù)均值1.96標(biāo)準(zhǔn)差的參考區(qū)間并結(jié)合臨床實際，最終確定本室常規(guī)項目APTT、PT、TT（5ml）、Fbg的生物參考區(qū)間分別為28.041.0 s、8.811.8 s、12.017.0 s、2.04.4 g/L。3 討論作為最新型的全自動血凝分析儀，ACL TOP全自動血凝分析儀不僅具有高度自動化、快速檢測和操控界面先進(jìn)的特點，還可同時采用凝固法、免疫比濁法和發(fā)色底物法檢測20多個凝血相關(guān)指標(biāo)。盡管儀器廠商已經(jīng)提供了儀器性能的初步參數(shù)，但由于地區(qū)、人種、實驗室之間的差異，特別是某些試劑制備工藝、劑型改變后生物參考區(qū)間會有顯著改變，各實驗室引進(jìn)使用前應(yīng)重新評估。本研究表明，ACL TOP上各項目批內(nèi)及日間變異系數(shù)均6%，可見該血凝分析儀的三種檢測方法均具有良好的重復(fù)性和穩(wěn)定性。線性試驗結(jié)果表明三種檢測方法不僅具有良好的線性，且Fbg、D-D檢測中儀器可根據(jù)需要自動減少或增加標(biāo)本稀釋倍數(shù)，可獲得較寬的檢測范圍。干擾實驗中，血紅蛋白達(dá)1.2g/L對Fbg（Clauss法）影響度6%，血紅蛋白達(dá)5g/L、甘油三脂達(dá)900mg/dl、膽紅素達(dá)20mg/dl對各指標(biāo)影響度6%，均遠(yuǎn)低于美國臨床實驗室改進(jìn)修正案88（CLIA88）能力驗證分析質(zhì)量要求對室間評估的允許誤差（EA）（PT為15%、APTT為15、Fbg為20），可見該分析系統(tǒng)具有良好的抗黃疸、脂血、溶血等生物性物質(zhì)干擾能力。ACL TOP血凝分析儀配套試劑一個顯著的改變就是PT、APTT試劑中的磷脂由人工合成，PT試劑中的組織因子采用基因工程重組技術(shù)制備。因此，與ACL Futura比對發(fā)現(xiàn)，兩臺儀器僅Fbg檢測結(jié)果同時具有良好的相關(guān)性和符合要求的偏差（R值0.975，相對偏差1/2EA）?？梢娂幢銥橥盗械难龣z測系統(tǒng)，儀器及試劑更換時，也需重新建立各項凝血指標(biāo)的生物參考區(qū)間。本文通過對各年齡段健康體檢人群的調(diào)查，建立了基于本地區(qū)人群及本實驗室檢測方法的凝血常規(guī)項目的生物參考區(qū)間。結(jié)果表明，與試劑說明書提供的數(shù)據(jù)有很大差異。說明不同地區(qū)人群的生物變異、環(huán)境因素、樣本量、試劑制備工藝、劑型改變，均對生物參考區(qū)間有影響，建立各實驗室自己的參考區(qū)間十分必要。需要注意的是，計算參考區(qū)間時，應(yīng)先進(jìn)行數(shù)據(jù)的正態(tài)性檢驗，確定為正態(tài)分布后，才能根據(jù)均值1.96標(biāo)準(zhǔn)差計算參考區(qū)間，否則按百分位數(shù)法計算參考區(qū)間。本研究通過對ACL TOP各項性能的全面評價，初步建立了優(yōu)化適用的ACL TOP全自動血凝分析系統(tǒng)，該系統(tǒng)具有快速、準(zhǔn)確、穩(wěn)定、簡便的檢測特點，適合現(xiàn)代化大型實驗室的工作需要。整個儀器性能評價過程按照CLSI相關(guān)文件要求及本實驗室相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程進(jìn)行，符合標(biāo)準(zhǔn)化實驗室的質(zhì)量管理要求。參考文獻(xiàn)1.NCCLS.Evaluation of Precision Performance of Quantitative Measurement Methods; Approved GuidelineSecond Edition. 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