支原體肺炎診斷及病原學檢測.ppt

支原體肺炎診斷及病原學檢測,肺炎支原體肺炎的診斷,臨床表現影像學表現病原學診斷,臨床表現及實驗室檢查,潛伏期1-3周起病形式多樣，多數患者僅以低熱、疲乏起病部分患者可以突發(fā)高熱并伴有明顯的頭痛、肌痛、惡心等全身中毒癥狀,呼吸道癥狀以干咳最突出，常持續(xù)4周以上，多伴有顯著咽痛，偶有胸痛、痰中帶血；呼吸道以外的癥狀中，以耳痛、麻疹樣或猩紅熱樣皮疹較多見,陽性體征以顯著的咽部充血和耳鼓膜充血較多見外周血白細胞總數和中性粒細胞比例多正常，有些患者可升高,病變多為邊緣模糊、密度較低的云霧樣片狀浸潤影，從肺門向外周肺野放射，肺實質受累時也可呈大片實變影,肺部陽性體征少而影像表現明顯是支原體肺炎的一個重要特點,與普通細菌性肺炎通常表現為下肺單一的實變影或片狀浸潤影相比，支原體肺炎累及上肺者或同時累及雙肺者更多一些，且吸收較慢,肺部影像學表現,病原學診斷,血清特異性抗體檢測傳統(tǒng)檢測方法：明膠凝集法，補體結合試驗。無法區(qū)分IgG和IgM酶免疫試驗或免疫熒光法：可以分別檢測特異性IgG和IgM，1周出現，3周高峰，但部分反復發(fā)生肺炎支原體感染的成年患者，特異性IgM可能持續(xù)陰性血清冷凝集試驗：不再做為肺炎支原體感染的診斷參考快速培養(yǎng)鑒定法基于核酸技術的肺炎支原體檢測方法,最早采血時間應在起病后的7-10天，這樣才能確定是否MP感染,血清學診斷標準,診斷“金標準”：急性期及恢復期的雙份血清標本中，肺炎支原體特異性抗體滴度呈4倍或4倍以上增高，均可確診肺炎支原體感染明膠顆粒凝集試驗特異性抗體滴度l：160，或補體結合試驗特異性抗體滴度1：64，或特異性IgM陽性，也可作為診斷肺炎支原體近期感染或急性感染的依據。MP-IgM陽性代表著近期感染。MP-IgG陽性一般代表著既往感染。,人類對Mp無先天免疫性，尚無可實際應用的有效疫苗，感染后也不能產生完全的保護性免疫Mp特異性的IgM抗體在發(fā)病后不久即可出現升高，14周內達到峰值，然后在幾個月內逐漸下降到沒有臨床意義的水平。急性感染后IgM的持續(xù)時間在不同個體中差異較大。兒童的IgM反應一般強于成人，約50%的成人患者無法在Mp感染后測到IgM的升高IgG的出現時間晚于IgM，5周左右達到峰值，上升速度較慢且在體內的持續(xù)時間較長（4年左右），但在感染數月后就會下降到較低水平。有些兒童無法測得明顯的IgG反應特異性IgA的免疫反應與IgM類似，但其在成年人尤其是老年人中的反應水平更高,MP的免疫性,血清學檢測原理,冷凝集試驗：MP感染患者血清中常含有較高滴度的寒冷紅細胞凝集素（簡稱冷凝集素）。它能與患者自身紅細胞或“O”型人紅細胞于04條件下起凝集反應，在37時已凝集的紅細胞呈可逆性的完全散開。,凝集試驗與ELISA的原理比較,補體結合實驗,冷凝集試驗：冷凝集素是對Mp最早的體液反應，50%的病人在Mp感染第2周時的滴度可達到1:32以上，而6周內即降至感染前的水平。冷凝集試驗雖然簡便、快速，但它不是針對Mp的特異性試驗，多種其他微生物感染（如EB病毒、巨細胞病毒、肺炎克雷伯菌）和自身免疫性疾病時冷凝集素滴度均可升高。同時，該試驗的敏感性也只有5060%，對于12歲以下的兒童其敏感性則更差補體結合試驗(CFT)：十幾年前，CFT仍是Mp血清學試驗的標準方法，但越來越多的研究表明該方法的敏感性和特異性都不夠高。CFT所用的抗原為Mp的氯仿-甲醇糖脂抽提物，它可與人類、細菌及植物的某些抗原表位發(fā)生交叉反應（如腦膜炎時，CFT滴度可明顯升高）。CFT測定的主要是IgM，對IgG不很敏感，導致其整體敏感性偏低。,各血清學檢測方法的特點,間接血凝試驗(PHA)：將提純的Mp抗原連接到紅細胞（禽類或羊）上，與血清中的抗Mp抗體可發(fā)生凝集反應。該試驗的敏感性和特異性均明顯優(yōu)于CFT。PHA不能區(qū)分抗體的類型，因此單份測定出現低滴度的抗體陽性結果并不能確定是既往感染還是新近感染。明膠顆粒凝集試驗(PA)：其原理與間接血凝試驗基本相同，只是用人工合成的明膠顆粒取代了紅細胞作為凝集試驗的載體，從而使結果判定更清晰，靜置穩(wěn)定性更好，非特異性反應大大減少，檢測的敏感性也有了進一步提高（對IgM和IgA更敏感）,酶聯免疫吸附試驗（ELISA）：是目前Mp血清學試驗中常用的方法，可分開檢測IgM、IgG和IgA，敏感性和特異性均能達到較高的水平。雖然單次測定IgM（或IgA）陽性即可基本判定為Mp的新近感染，但陰性時卻無法排除感染的可能性。IgG一般須進行間隔2周以上的雙份血清測定，有4倍以上滴度上升時才能做出Mp新近感染的診斷。因此，在ELISA測定中應強調同時檢測IgG和IgM（或IgA），且最好能對間隔2周以上的雙份配對血清進行抗體轉化情況的測定，從而做出明確的診斷其它方法：間接免疫熒光試驗（IFA）、乳膠凝集試驗（LA）、免疫印跡測定（WB）、黏附抑制試驗、放射免疫沉淀試驗、補體介導的殺傷試驗等,其他病原學檢測方法,PCR、單克隆抗體法等檢測分泌物中抗原及DNA，敏感性、特異性高，可用于早期診斷，但操作復雜，同位素、假陽性的問題限制了推廣和使用，PCR實驗條件要求嚴格，只限于實驗研究。MP的分離培養(yǎng)和鑒定是