支原體肺炎診斷及病原學(xué)檢測(cè).ppt

支原體肺炎診斷及病原學(xué)檢測(cè),肺炎支原體肺炎的診斷,臨床表現(xiàn)影像學(xué)表現(xiàn)病原學(xué)診斷,臨床表現(xiàn)及實(shí)驗(yàn)室檢查,潛伏期1-3周起病形式多樣，多數(shù)患者僅以低熱、疲乏起病部分患者可以突發(fā)高熱并伴有明顯的頭痛、肌痛、惡心等全身中毒癥狀,呼吸道癥狀以干咳最突出，常持續(xù)4周以上，多伴有顯著咽痛，偶有胸痛、痰中帶血；呼吸道以外的癥狀中，以耳痛、麻疹樣或猩紅熱樣皮疹較多見(jiàn),陽(yáng)性體征以顯著的咽部充血和耳鼓膜充血較多見(jiàn)外周血白細(xì)胞總數(shù)和中性粒細(xì)胞比例多正常，有些患者可升高,病變多為邊緣模糊、密度較低的云霧樣片狀浸潤(rùn)影，從肺門(mén)向外周肺野放射，肺實(shí)質(zhì)受累時(shí)也可呈大片實(shí)變影,肺部陽(yáng)性體征少而影像表現(xiàn)明顯是支原體肺炎的一個(gè)重要特點(diǎn),與普通細(xì)菌性肺炎通常表現(xiàn)為下肺單一的實(shí)變影或片狀浸潤(rùn)影相比，支原體肺炎累及上肺者或同時(shí)累及雙肺者更多一些，且吸收較慢,肺部影像學(xué)表現(xiàn),病原學(xué)診斷,血清特異性抗體檢測(cè)傳統(tǒng)檢測(cè)方法：明膠凝集法，補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)。無(wú)法區(qū)分IgG和IgM酶免疫試驗(yàn)或免疫熒光法：可以分別檢測(cè)特異性IgG和IgM，1周出現(xiàn)，3周高峰，但部分反復(fù)發(fā)生肺炎支原體感染的成年患者，特異性IgM可能持續(xù)陰性血清冷凝集試驗(yàn)：不再做為肺炎支原體感染的診斷參考快速培養(yǎng)鑒定法基于核酸技術(shù)的肺炎支原體檢測(cè)方法,最早采血時(shí)間應(yīng)在起病后的7-10天，這樣才能確定是否MP感染,血清學(xué)診斷標(biāo)準(zhǔn),診斷“金標(biāo)準(zhǔn)”：急性期及恢復(fù)期的雙份血清標(biāo)本中，肺炎支原體特異性抗體滴度呈4倍或4倍以上增高，均可確診肺炎支原體感染明膠顆粒凝集試驗(yàn)特異性抗體滴度l：160，或補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)特異性抗體滴度1：64，或特異性IgM陽(yáng)性，也可作為診斷肺炎支原體近期感染或急性感染的依據(jù)。MP-IgM陽(yáng)性代表著近期感染。MP-IgG陽(yáng)性一般代表著既往感染。,人類(lèi)對(duì)Mp無(wú)先天免疫性，尚無(wú)可實(shí)際應(yīng)用的有效疫苗，感染后也不能產(chǎn)生完全的保護(hù)性免疫M(jìn)p特異性的IgM抗體在發(fā)病后不久即可出現(xiàn)升高，14周內(nèi)達(dá)到峰值，然后在幾個(gè)月內(nèi)逐漸下降到?jīng)]有臨床意義的水平。急性感染后IgM的持續(xù)時(shí)間在不同個(gè)體中差異較大。兒童的IgM反應(yīng)一般強(qiáng)于成人，約50%的成人患者無(wú)法在Mp感染后測(cè)到IgM的升高IgG的出現(xiàn)時(shí)間晚于IgM，5周左右達(dá)到峰值，上升速度較慢且在體內(nèi)的持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)（4年左右），但在感染數(shù)月后就會(huì)下降到較低水平。有些兒童無(wú)法測(cè)得明顯的IgG反應(yīng)特異性IgA的免疫反應(yīng)與IgM類(lèi)似，但其在成年人尤其是老年人中的反應(yīng)水平更高,MP的免疫性,血清學(xué)檢測(cè)原理,冷凝集試驗(yàn)：MP感染患者血清中常含有較高滴度的寒冷紅細(xì)胞凝集素（簡(jiǎn)稱(chēng)冷凝集素）。它能與患者自身紅細(xì)胞或“O”型人紅細(xì)胞于04條件下起凝集反應(yīng)，在37時(shí)已凝集的紅細(xì)胞呈可逆性的完全散開(kāi)。,凝集試驗(yàn)與ELISA的原理比較,補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn),冷凝集試驗(yàn)：冷凝集素是對(duì)Mp最早的體液反應(yīng)，50%的病人在Mp感染第2周時(shí)的滴度可達(dá)到1:32以上，而6周內(nèi)即降至感染前的水平。冷凝集試驗(yàn)雖然簡(jiǎn)便、快速，但它不是針對(duì)Mp的特異性試驗(yàn)，多種其他微生物感染（如EB病毒、巨細(xì)胞病毒、肺炎克雷伯菌）和自身免疫性疾病時(shí)冷凝集素滴度均可升高。同時(shí)，該試驗(yàn)的敏感性也只有5060%，對(duì)于12歲以下的兒童其敏感性則更差補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)(CFT)：十幾年前，CFT仍是Mp血清學(xué)試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)方法，但越來(lái)越多的研究表明該方法的敏感性和特異性都不夠高。CFT所用的抗原為Mp的氯仿-甲醇糖脂抽提物，它可與人類(lèi)、細(xì)菌及植物的某些抗原表位發(fā)生交叉反應(yīng)（如腦膜炎時(shí)，CFT滴度可明顯升高）。CFT測(cè)定的主要是IgM，對(duì)IgG不很敏感，導(dǎo)致其整體敏感性偏低。,各血清學(xué)檢測(cè)方法的特點(diǎn),間接血凝試驗(yàn)(PHA)：將提純的Mp抗原連接到紅細(xì)胞（禽類(lèi)或羊）上，與血清中的抗Mp抗體可發(fā)生凝集反應(yīng)。該試驗(yàn)的敏感性和特異性均明顯優(yōu)于CFT。PHA不能區(qū)分抗體的類(lèi)型，因此單份測(cè)定出現(xiàn)低滴度的抗體陽(yáng)性結(jié)果并不能確定是既往感染還是新近感染。明膠顆粒凝集試驗(yàn)(PA)：其原理與間接血凝試驗(yàn)基本相同，只是用人工合成的明膠顆粒取代了紅細(xì)胞作為凝集試驗(yàn)的載體，從而使結(jié)果判定更清晰，靜置穩(wěn)定性更好，非特異性反應(yīng)大大減少，檢測(cè)的敏感性也有了進(jìn)一步提高（對(duì)IgM和IgA更敏感）,酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）：是目前Mp血清學(xué)試驗(yàn)中常用的方法，可分開(kāi)檢測(cè)IgM、IgG和IgA，敏感性和特異性均能達(dá)到較高的水平。雖然單次測(cè)定IgM（或IgA）陽(yáng)性即可基本判定為Mp的新近感染，但陰性時(shí)卻無(wú)法排除感染的可能性。IgG一般須進(jìn)行間隔2周以上的雙份血清測(cè)定，有4倍以上滴度上升時(shí)才能做出Mp新近感染的診斷。因此，在ELISA測(cè)定中應(yīng)強(qiáng)調(diào)同時(shí)檢測(cè)IgG和IgM（或IgA），且最好能對(duì)間隔2周以上的雙份配對(duì)血清進(jìn)行抗體轉(zhuǎn)化情況的測(cè)定，從而做出明確的診斷其它方法：間接免疫熒光試驗(yàn)（IFA）、乳膠凝集試驗(yàn)（LA）、免疫印跡測(cè)定（WB）、黏附抑制試驗(yàn)、放射免疫沉淀試驗(yàn)、補(bǔ)體介導(dǎo)的殺傷試驗(yàn)等,其他病原學(xué)檢測(cè)方法,PCR、單克隆抗體法等檢測(cè)分泌物中抗原及DNA，敏感性、特異性高，可用于早期診斷，但操作復(fù)雜，同位素、假陽(yáng)性的問(wèn)題限制了推廣和使用，PCR實(shí)驗(yàn)條件要求嚴(yán)格，只限于實(shí)驗(yàn)研究。MP的分離培養(yǎng)和鑒定是