（分析化學(xué)專業(yè)論文）茶多酚cu（Ⅱ）配合物殺菌性能的研究.pdf

巾國(guó)農(nóng)業(yè)太學(xué)碩士學(xué)穗論文麓要 摘要 本文對(duì)茶多酚的提取及其穩(wěn)定能、純學(xué)缽系中茶多黼與銅的相互作用、茶多酚及茶多酚- c u ( i t ) 配合物生物活性蘭方面進(jìn)行了研究，結(jié)果如下： p 壬 簸、溫度敷辯閹三個(gè)因素對(duì)茶多酚的穩(wěn)定性均寄著不同程度靜影相，箕中馥p h 壤鶼彰響 最為顯著。茶多酚在酸性介質(zhì)中( p i 5 2 9 ) 具有較好的穩(wěn)定性，而在中性和堿性介質(zhì)中( p 7 3 3 ) 穩(wěn)定性較嫠。 溶液的p h 值對(duì)兒茶素與銅離子絡(luò)合作用的影響較大。當(dāng)p h 5 9 1 時(shí)，銅離子對(duì)兒茶豢的紫 外可見(jiàn)吸收光譜的影響逐灝增大，b 茶素黲蜷攝吸收峰由2 7 5 n m 紅移楚3 2 0 r i m 處，同封峰形 也相應(yīng)發(fā)生變化。p h = 5 9 l 時(shí)，銅離子與e g c g 的絡(luò)臺(tái)比為2 ：1 ；p h = 7 3 3 時(shí)，銅離子與e g c g 的絡(luò)合嗽為1 ：1 。 c u s 0 4 與e g c g 、c u s o 與c a t 不同配搬組合豹簧配劑對(duì)棉花括萎病瘸原薔和棉花炭疽病病 原菌的抑菌作用相對(duì)較高予單劑，其中c u s 0 4 + f c r c g ( 2 ：1 ) 的e c 5 0 相對(duì)較好為3 4 4 2m g l ：對(duì) 小麥赤霉癮病囂蘩沒(méi)有捧鍘俸瑤，毽竅一定的鬻j 激生長(zhǎng) 箏臻。c u s 0 4 與e g c g 、c e s o , 專c a t 各 l ! i 己比的復(fù)酉己劑對(duì)犬腸桿菌和葡萄球菌無(wú)抑菌潘性，生物活性不如各單劑。 本磷究為尋找耨的銅索蓉鎣裁、實(shí)現(xiàn)茶多黲瓣綜合利用提供7 參考。 關(guān)鍵詞：茶多酚，銅離子，絡(luò)合作用，生物滋性 中國(guó)農(nóng)業(yè)夭學(xué)碩士學(xué)位論文 a t r s l r a e t a b s t r a c t t os e a r c hn e wc o p p e rg e r m i c i d e sa n dn e wu o ft e ap o l y p h e n o i s ( t p ) t h i sp a p e rs t u d i e do nt h r e e p a r t s ：t e ap o l y p h e n o i s e x t r a c t i o na n ds t a b i l i t y , t e ap o l y p h e n o l s i n t e r a c t i o n sw i t hc u 2 + i nc h e m i c a l s y s t e m s ，b i o a c t i v i t yo f t p c u c o m p l e x e s t h er e s u l t sa sf o l l o w s ： t h et h r e ef a c t o r so fp hv a l u e ，t e m p e r a t u r ea n dt i m eh a dd i f f e r e n te f f e c t so nt h es t a b i l i t yo ft e a p o l y p h e n o l s ，w i t ht h e 蟬v a ko ft h e s ts i g n i f i c a n te f f e c t 。t e ap o l y p h e n o i sh a db e t t e ts t a b i l i t yi n a c i dm e d i u m p h i 5 9 1 ，c o p p e ri o n s i n f l u e n c e dt h eu l t r a v i o l e t - v i s i b l ea b s o r p t i o ns p e c t r ao ft h ec a t e c h i n si n c r e a s i n g l y , t h ef e a t u r ew a v e l e n g t h a b s o r p t i o nm o v e dt o3 2 0 r i mf r o m2 7 5 n m ，a n da b s o r p t i o ns p e c t r aa l s oc o r r e s p o n d i n g l ye h a n 辨d 。i nt h e m e a n t i m e w e f o u n d t h a t t h er a t i oo f c u 2 + a n d e g c g w a s 2 ：1 i n t h es o l u t i o n o f p h5 9 1 ；a n d t h e r a t i o o f c u 2 + a n de g c gw a si ：1a tp r l = 7 3 3 t h ea n t i f u 氈g ia c t i v i t yo fc u s o , + e g c g ( 1 ：1 ) ，( 2 ：1 ) ，( 1 ：2 ) a n dc u s 0 4 + c a t ( 1 ：1 ( 2 ：1 ) ( 1 ：2 ) a g a i n s tf u s a r i u mo x y s p o r u ms c h l 蠢w a sm u c hh i g h e rt h a ne a c hs i n g l ed o s e 屯a c t i v i t ya g a i n s t g i b b e r e l l az e a e ( s c h 川p e t c h ，b u tt h e r ew a ss o m es t i m u l a t i n ga c t i v i t yo fg r o w t h t h eb a c t e r i c i d a l a c t i v i t y o f c a t e e h i n - c o p p e r ( t i ) c o m p l e xa g a i n s t es c h e r i c h i ac o l i a n d s t a p h y l o c o c c u sa u r e u s w a s m u c h l o w e rt h a ne a c hs i n g l ed o s e k e y w o r d s ：t e ap o l y p h e n o l s ( r p ) ，c o p p e r ，c o m p l e x ，b i o a c t i v i t y ! 獨(dú)創(chuàng)性聲明 本人聲明所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成 果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā) 表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果，也不包含為獲得中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書(shū) 而使用過(guò)的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明 確的說(shuō)明并表示了謝意。 研究生簽名：三熙 時(shí)間： 2 卯6 年月f b 關(guān)于論文使用授權(quán)的說(shuō)明 本人完全了解中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)校有權(quán)保留 送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù) 制手段保存、匯編學(xué)位論文。同意中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、 傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容。 ( 保密的學(xué)位論文在解密后應(yīng)遵守此協(xié)議) 研究生簽名 導(dǎo)師簽名： 辯 時(shí)間：刪6 時(shí)間：矽 年6y j | 爭(zhēng)e 1 年 勘f e l 中國(guó)農(nóng)業(yè)火學(xué)碩士學(xué)位論文 第一章緒論 皇糕舞皇曼! 置寡罾刪算獬麓蔓皇蔓罩邕i i ll 量算躺基暑黑暑量芭篁皇量詈皇巴醴喇皇曩- 。 茶多酚的磷突進(jìn)震 1 + 1 1 茶多酚的絡(luò)構(gòu)和性質(zhì) 第一章緒論 茶參酚f l e a p o l ”h e 柏w r p ) 戇茶葉中的燕要生理活憔成分。又耄茶單寧、荼鞣質(zhì)，是茶葉所含 的一類多羥基類化含物的總稱。它是天然植物茶葉中分離提純的3 0 多種脂類化合物的復(fù)臺(tái)體，約 占茶磚予鐫震慧量瓣1 8 - 3 6 ，玄分毒廣( 穰穆各器寓都蠢，毽主凝集孛予嫩精幫芽) ，交健夫 ( 受內(nèi)外因的影響最大) ，對(duì)茶葉品質(zhì)的影響最為顯藿，是茶葉生物化學(xué)研究煅多的一類化臺(tái)物。 其主要成分為黃烷醇郯a v a u o k ) 、黃酮類( f l a v o n o i d s ) 、黃酮醇擻、花青素類、酚酸、縮酚酸 類及聚會(huì)黔類等萁串焚烷酵幫遴常所稼瓣j b 茶素類詫套耪( c a t e c h i n s ) ，它為茶多酪靜主體袋分， 約占茶多酚總量的6 5 8 0 。兒茶素類化物主要包括表沒(méi)食予幾茶素沒(méi)食乎酸酯【( ) 一 e p i g a l l o c a t e e h i n 一3 一g a l l a 把( e g c g ) 】、表沒(méi)食t - j l , 茶索l ( 一) 一e p i g a l l o c a t e c h i n ( e g c ) 】、襲兒 茶素沒(méi)食予酸酯f 蔣洱茶 茳茶 鳥(niǎo)茂茶；4 靜茶的絡(luò)臺(tái)效應(yīng)隨葬重聞增熱磊降低，臻因可能 是c u ”能使茶葉中兒茶素氧化反成加快，從而降低茶湯的絡(luò)合效應(yīng)。郭炳瑩等】人用贏接觀察法、 酒石酸亞鐵法和絡(luò)黑t 法對(duì)綠茶茶湯組分與2 3 種金屬離予的絡(luò)含性能進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，c a 2 + 、 m n 7 + 、b i “、z n 2 、c 擴(kuò)、a g + 、t h 4 + 、s r 2 + 、h 9 2 、s b “、妒+ 、羚蟊、m 0 6 + 、必2 + 等1 5 靜 離子與茶湯有明顯的反應(yīng)發(fā)生，生成了具有特征顏色的絡(luò)合物。蕭偉祥簿腳l 研究茶黃色素( t y p ， 主要成分是簧酮類純臺(tái)物及，l 茶索氧化聚合銹) 對(duì)金屬離予的依糟，菠凝r 釋辯a p 、c a “輔“ 的絡(luò)念性較強(qiáng)，麗對(duì)c n “豹絡(luò)合性較弱。 。3 。2 蒸多黲與整壤離子終食物的形或 j b 茶素類征臺(tái)驄分予結(jié)穩(wěn)串翡羥蘩幫氧w 作為苓霜約魄子繚體，它在溶液串存在死釋穩(wěn)蒙。 這一性質(zhì)使它與不問(wèn)的金屬離子作用產(chǎn)生不同的結(jié)臺(tái)方式和能力。因而，實(shí)驗(yàn)的條件對(duì)茶多酚配 臺(tái)物的形成有著重要影響。 f u m l k o 至王蟹披瓣】等人發(fā)現(xiàn)e g 與q | “、f e “、b + 形戒配臺(tái)物鶼最佳酸度為p h = 7 。4 ，與 a 1 ”作用的煅佳酸度分別為p i _ 5 0 。戚向陽(yáng)忡j 等研究發(fā)習(xí)7 , e g c g 島g e ( i v ) 襁p h 6 5 - 7 0 的緩沖 溶液巾可形成e g c g - g e i v ) 金耩配合物，并接等鼙爾連續(xù)交換法及零衣院法濺定e g c g - g o ( i v ) 配合物組成為皿g g g 】【g e ( i v ) 1 = 2 ：1 ( m o l m 0 1 ) ，配合物的不穩(wěn)定常數(shù)為2 5 7 0 1 0 - “。李志南 等 4 9 1 入對(duì)茶霧酚與p b 2 + 絡(luò)臺(tái)反戚機(jī)理讖行研究發(fā)現(xiàn)，絡(luò)合反應(yīng)分兩級(jí)讖行，兩級(jí)反鷹p b 2 + 與茶多 魏配比分別必2 ：l 秘1 ：1 。張玉艷等1 3 9 j 人研究t e g c g 與c u 2 + 形戲絡(luò)舍物豹象傳，袁強(qiáng)酸性c p s 、 4 o 時(shí)，e g c g 與q 一可以形成絡(luò)合物：在 p h = 6 o 靜己酸緩；申液中，c u “與e g c g 良2 ：l 結(jié)合靜：在p | _ 7 的硼酸緩；申液孛，c 缸“與e g c g 以1 ：l 絡(luò)臺(tái)。m i d o r i k u m a m o t o ( ”i 等研究認(rèn)為銅離子與兒茶索的櫻互作用也與幾茶素的結(jié)構(gòu)有關(guān)， e g c g 與e c g 在銅離子存在下解離常數(shù)顯著下降，而e c 茂e c - c 希t 現(xiàn)則不明顯，推測(cè)銅離子熏要與 e g c g 與e c 囂豹沒(méi)食子酸基弱結(jié)合。e m i k oo h y o s h i i s ”、唐德拯1 5 2 l 等利用分光光度法磷究e g c 鼴與 ”在醋酸緩沖液中的絡(luò)含度為1 ：1 ，得e g c g - a i 絡(luò)合物的形成常數(shù)為l o g k a i 。e g c g ：7 6 + 0 i 。 m i c h i k ob i n o u e t 5 3 1 研究了凡茶豢與棚”絡(luò)臺(tái)物的絡(luò)合眈，警e c 或楚e g c 與a 1 3 共存辯，形成絡(luò)臺(tái) 6 獍茲結(jié)構(gòu)蔓f 淄釋囂0 、【淵嫌0 o 潮+ 秘f 泌8 找凌l 。；p h 4 。o 時(shí)，銅離予存在下e g c g 吸收光譜裔很大改變，這表 孵銅離子麓，0 荼素分予閹發(fā)生終含作溺，產(chǎn)生縫梅重捧產(chǎn)秘。紫， 競(jìng)譜勞櫥霹對(duì)氌襤疲震捌f e 3 + 、 f e 2 、z n “、a 1 “與兒茶索類化合物絡(luò)合作用的研究中m 4 m 。 荼多酚與金屬離予絡(luò)臺(tái)物的效外光譜研究表明，茶多黔與金屬離子絡(luò)合物保留了茶多酚的基 本曹架繚椽。毽配合物的酚羥基數(shù)醬裙顯減少，說(shuō)明茶多鼯與金屬離子絡(luò)音物豹形成；茶多鶼分 子中c 0 ，的吸收峰發(fā)上改變，說(shuō)明茶多酚與金屬離子絡(luò)含后c - o - 鍵發(fā)生改變；分子中羰熬的吸 牧峰發(fā)生改變，說(shuō)明茶多酚與金螨璃子絡(luò)臺(tái)囊羰基掰處豹化學(xué)環(huán)境發(fā)生了改變p ”。 于海寧等辮豫究了茶多酸在不辯濃度，不聞?lì)觅?，舉同金屬離子( f e 2 + ，c u 2 ，z n 2 + ) 存 在下的化學(xué)發(fā)光，結(jié)果表明，c 釅+ 可抑制茶辮酚的發(fā)光，而f e “在一定條件下促進(jìn)發(fā)光，z n “對(duì) 茶多酚的化學(xué)發(fā)巍沒(méi)蠢影響。張黼疆等i 跚入發(fā)現(xiàn)金屬離子( c a 2 + ，a l “) 對(duì)荼多黔瓣發(fā)光將性的 盥接影確譽(yù)明顯，主黧邋過(guò)影響游離茶多酚濃度而降低冀熒光強(qiáng)度。 n m r 對(duì)配合物的結(jié)構(gòu)表征和性質(zhì)研究是一種非常有效的方法【蚰】。對(duì)于抗磁類金屬離予如 艇“，m i c h i k ob 。i n o u e 印磅究績(jī)聚曩示，e c c o 沒(méi)食予黢蒸( d 琢) 主豹囂令羥慕撂電子，磚矗l “ 形成絡(luò)合物 a l ( l 玨一) 】而 a 1 ( l 鞭s ) 蠕合物是由焦槽黢( b 環(huán)) 的一個(gè)羥基和d 環(huán)的兩個(gè)羥基 得電子而形成的。而對(duì)于順磁類盒屬離子如c e 2 、m n “，由于其離子中來(lái)成對(duì)的電子對(duì)配合物的 撼嘏會(huì)產(chǎn)生綴太豹影晌，扶囂導(dǎo)蒙瓣會(huì)魏約n m 建不可測(cè)。r o s a en & 牲。萼蘆1 狄榮翅測(cè)定l 掛原 子的馳豫時(shí)間研究了e g c g 、e c r c 島m n 2 的絡(luò)合作用，結(jié)果表明在形成配合物的過(guò)程中d 環(huán)比b 環(huán)具有更好的協(xié)調(diào)力，d 環(huán)對(duì)配合物的形成具有重要作用。 e s m s 采矮了溢秘載“簌邀囊”技術(shù)，壤薅遺蟄湊，k 茶素與金攥離子囂會(huì)物戇分子離子獐， 非常適合予金屬配合物的研究【艚l 。m t e r e z a f e r n a n d e # x j 掰f 究了幾茶索 ( + ) c a t e c h i n 與c u 2 + 、 f e “、f e “的絡(luò)合作用，得到了配食物的分子離子峰，經(jīng)分析表明( + ) 一兒茶綮與c u “、f e z + 、 f 礦配合魄秀1 ：1 。黃河宇等p l a 瞧萊耀h p l c - e s i o - t o f 箱m a l d i - t o f 矮港技零努輯，k 荼素 鍺多聚體特性。 7 1 3 2 茶多酚與金藕離子絡(luò)合作用靜生耪學(xué)漭往 1 3 2 1 茶多粉與金屬離子絡(luò)臺(tái)的解毒作用 重裊屬毒性作用主要在于它能與體內(nèi)維持正常生理功能的配體結(jié)合，使其失去生理功能。兒 茶索可以與太多數(shù)象屬離子進(jìn)行絡(luò)含，在定條件下能夠抑制某些金屬離子的吸收，緩解某些金 屬特剜燕重金屬中薅。 茶時(shí)利剡對(duì)鍛接業(yè)工人的職業(yè)性鍛中毒與鍛強(qiáng)收蠢較好的預(yù)駱和浚療捧翅，憝有效降低斑鉛 禽量，增加尿鉛的排出量，且能明顯提高蹙試者的血紅蛋白含量，對(duì)鍛毒造成的貧血也有一定的 治療作糟秘。茶多酚對(duì)f 礦的絡(luò)臺(tái)沉淀和還原所起的解毒律糯是茶旰的傈健功散之強(qiáng)。d e n i s b l a c h e 等【蟬j 發(fā)璦，b 榮素戇夠有效拿霉剃鐵過(guò)麓誘移豹盤滾過(guò)戴健愛(ài)瘟，秘盤小扳淫劫異常。 j e o n g - h w ac h o i 等附j(luò) 研究了兒榮素對(duì)慢性鎘( c d ) 中斑的影響，發(fā)現(xiàn)兒茶素能夠有效清除c d 過(guò)量 引起的骨代謝紊亂，恢復(fù)骨細(xì)胞對(duì)各種金屬離子的正常吸收并維持骨骼中各種金屬離子的正常含 量平簿。 1 ，3 2 童茶多酚與金屬離子的抗氧 l ：作用 茶彩酚具有良好的抗氧化活性，能夠有效清除自由基。機(jī)體內(nèi)過(guò)渡金屬離子是自由基的另一 重要來(lái)源。榮多酚楚這鑒金屬離子的天然絡(luò)合荊，它提供電子給這些過(guò)渡金屬離子成為絡(luò)合物， 焉簿奉l 壘屬離子靜囊由蘩攘純作翊。茶多鶼在終含金耩離予瓣，是羰共囊# 鍵整體參與絡(luò)臺(tái)豹， 因而形成的絡(luò)合物較穩(wěn)定。許多實(shí)驗(yàn)表明，多酚類對(duì)抑制愈屬離子催化的自由基反應(yīng)異常有效， 且可用分光光度法檢測(cè)劉多酚類與金屬離子的絡(luò)合物。茶多酚絡(luò)臺(tái)c u 、f e 離子后，使其喪失催化 活性藹產(chǎn)生撬裁純作用；另一方露，形成躲茶多蘩絡(luò)舍穆仍保持瀵踩鑫出驀鷯活鏈， m i d o r ik u m a m o t o 等唧峨究金屬離子對(duì)兒茶索抗毓化活性的影響，發(fā)現(xiàn)在微酸性條件下，加 入c u “后體系中耗輟量增加，c u 2 + 可以顯著提高兒茶素的抗氧化活性，f 護(hù)則明最降低兒茶紊抗 戴住活性榮多酚黠c u 2 的絡(luò)合作麗可柿潮由c 艫+ 催純靜低密度膳蛋自( l d l ) 酶氧訖嘲。z a g o m p 等1 6 7 l 研究發(fā)現(xiàn)z n 2 熊夠增強(qiáng)e c 的戡氧化活性，認(rèn)為z n 2 霹以峰e(cuò) c 形成抗氧化綴環(huán)，協(xié) 同起作用。 另外，盒屬離乎能穆與幾茶素發(fā)生氧化還舔反應(yīng)，特剮是在強(qiáng)堿條件下，金屬離子能夠鍵遴 j l 茶素f l 搴霆氧純發(fā)生動(dòng)戴佳反應(yīng)。m i d o r ik u m a l r t o 等刪遂鵯j l 茶素在堿性袈 孛下，駐夠發(fā)生基 動(dòng)氧化反應(yīng)，產(chǎn)生自由基，而銅離予存在時(shí)，錒離子催化促進(jìn)兒茶素的白氧化。s a z a m 等【醴】研究 認(rèn)為，銅離子可催化e g c g 、囂c 自氯化反應(yīng)。m a n a b um o c h i z u k i 等f(wàn) 州利用裁電極對(duì)幾茶素的魯 戴純避褥凌力學(xué)耩寵，褥舞嗣樣豹綏諗，試?guó)勪撾x子在，l 茶素鑫戴純避程孛寵當(dāng)鑲他賚l ，不壤鍵 進(jìn)了兒榮索的自氧化，還促進(jìn)了過(guò)氧化氫( h 2 0 2 ) 的形成。郭遠(yuǎn)華等f(wàn) 棚發(fā)現(xiàn)在堿性體系中，f e “ 可以加遵幾榮素的自氧化，產(chǎn)生- o h ：其作用機(jī)理可熊為：一方面，在有氧的情況下兒茶索可以通 過(guò)自氧反應(yīng)產(chǎn)生超轆陰離子自國(guó)基( 0 2 ) 輔過(guò)氧億氫i ( h 2 0 2 ) ；舅一方凝，0 茶素矮藤“為“， j l 茶素本身被氧化為羧酸。 8 中鞠農(nóng)業(yè)大學(xué)磺士學(xué)位論文第章緒論 。3 2 3 茶多酪金囂薅子終臺(tái)狻與嗽豹傳忍 h a y a k a w a f 7 1 垮人磺究了不髓金屬離予與茶多酪各組分形殘絡(luò)臺(tái)物對(duì)d n a 裂解的影蠛，發(fā)現(xiàn) c u 2 能夠顯著促進(jìn)幾榮索誘導(dǎo)的d n a 新裂，a g + q 對(duì)e g c g 和e c 誘導(dǎo)的d n a 斷裂表現(xiàn)較攢的抑制 作髑，而其他的多種眾屬離子光明顯影響或活性很低。c u 2 存在時(shí)，不同兒榮素單體均可以誘導(dǎo) d n a 裂解，健作用強(qiáng)瓣不犀，順序依次為e g c e c e g c g c 。1 9 卵年h a y 婦8 w a 研究表明p 磷 幾茶素在銅離子存在刺有氧的條件下，能夠極大的促進(jìn)d n a 的裂解反應(yīng)和脂肪酸的過(guò)飄化，這大予 鋼離子幫j l 榮素等多懿類純合黲單獨(dú)籜粥靜結(jié)栗。在y o 麟馥a 彈1 霸壬耋a ￥釀g 孵8 l ”滓靛研究串，訣必 兒榮索類化含物在與銅形成配合物的體系中，c u 2 + 被還原為c u + ，c u + 便會(huì)與0 2 和h 2 0 2 反應(yīng)生成促 使d 凇裂磐的o h i 纛0 2 。 c a t e c h i n + 2c 婦2 + po x i d i dc a t e c h i n + 2c 一 翻+ + 魄翻“+ 顫 o l2 曲+ + 0 2 + 2 h + 啼2 c u 2 + + h 2 0 2 o fc 疆+ + h 2 0 2斗e i 產(chǎn)+ + o h o h 圖1 2 兒茶素與銅離子的氧化反應(yīng) 1 3 2 4 茶多酚金屬離子絡(luò)合物對(duì)微生物體系的影響 ( 1 ) ( 2 ) ( 3 ) ( 4 ) n o b u oh o s h i n o 等天融”研究了j k 榮素- 銅( 1 1 ) 絡(luò)臺(tái)物對(duì)犬腸稈菌和金黃色葡萄球薪的生物滔 性，結(jié)果表明兒茶素銅( i i ) 絡(luò)含物對(duì)大腸桿菌( 餅) 豹抑蔭效果要優(yōu)于對(duì)金黃色葡萄球菌( g + ) 囂捧藩效果，豆e g c - c u “生物潘往往子其鏈，0 茶潦類純臺(tái)物，這與榮多酪綴勢(shì)中e g c g 生耪活瞧 最商明顯不間；在進(jìn)步研究t j l 茶素銅( ) 絡(luò)合物的作用機(jī)理之后，發(fā)現(xiàn)丈腸桿蔭( g ) 緗 黲巾臀曙秘鑼大量損裁，毽不笈囊玟詛藏鏈襄瑟，繕臺(tái)茲撰揍囂鏈垮綞凄朕，其終熙撬理霹轆 為c 一被還原為c u * ，c u * 氧化后生成大量活性氧和活性氧自由熬。而細(xì)臌質(zhì)膜襲腳所攜帶的 電蕊分子決定了與絡(luò)食物的結(jié)會(huì)能力，這可能是影響兒茶鬃娟f i 【) 絡(luò)合鈞的抑鎣活性豹重要霸 素。 9 中國(guó)農(nóng)業(yè)大舉磺士學(xué)位論文 第一耄緒論 曼攔皇罡曼獬量皇量旨魯獬囊曼旨董_ i i i i 攔曼舅舅邕量獸皇刪量鼉皇懋篁量置篁糍皇量置 t 器端黧渤器，8 餾燃：鬻產(chǎn) 豁默黧篡甓激； f l g l 3 t h es c h e m t i c h l m t r t t l o n o f t k e a t t a c k o f c a t e c h i n ( a ) a n d c a t e c h l n c u ( 1 i ) c o m p l e x o n s t a p h y l o c o c c u sa l l r e l l sa n d e s c h e r i c l d a c o i l 此外，郭遠(yuǎn)華等的研究發(fā)現(xiàn)臚存在下，j 蛹 素的抑菌效果明照增強(qiáng)，l 茶索在有f e z * 套 導(dǎo)的堿性體系中輿有促氧化作用，會(huì)促使體系產(chǎn)生更多羥自由纂( o h ) 。戚向陽(yáng)嗍、黃河寧等 嬸l 也磅究發(fā)理e g 一g e ( ) 搏隸l 肺癌綱熬生長(zhǎng)速率明曩裹- e c , c g 。 3 3 鬟望 近幾年來(lái)，隧贛國(guó)內(nèi)， 茶多酚金滿離子絡(luò)臺(tái)律硒研究的不斷深入，茶多酚與金滿離予的絡(luò)合 特性在茶葉的綜合利用方蕊有贛重要的作用，如重金屬毒性的孵除、裊屬的掇取和明收利用、三 廢處理、茶葉有散組分的分離純化及人體韻觜養(yǎng)保健等。盡管化學(xué)家對(duì)它各方面的研究已經(jīng)進(jìn)彳亍 了大餐豹工終，毽宅依然是一個(gè)十努年輕群又充滿活力豹領(lǐng)域。隨著科學(xué)靜進(jìn)步與柱會(huì)懿發(fā)展， 茶多酚金屬離子絡(luò)臺(tái)物將會(huì)在工業(yè)、農(nóng)業(yè)及人們的日常生活中得到更好的應(yīng)用。 1 0 中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文 第一章緒論 1 4 研究目的和意義 銅制劑被用來(lái)殺菌已有很長(zhǎng)時(shí)間的歷史，長(zhǎng)期以來(lái)，銅類殺菌劑以其廣譜性、易施用，價(jià)格低 廉等特點(diǎn)，被廣泛用于果園菜地殺菌，據(jù)統(tǒng)計(jì)每年施用量折銅達(dá)1 4 8 k g r 卣。長(zhǎng)期使用含銅農(nóng)藥 ( 波爾多液) 的果園土壤全銅含量可達(dá)5 0 0 c u m g k g , 而正常土壤中的總c u 含量一般為1 5 - 4 0 m g k g a 雖然近年來(lái)銅制劑使用量的增長(zhǎng)趨勢(shì)有所減緩，但在果園及菜地上的殘留已帶來(lái)嚴(yán)重影響與危 害，國(guó)內(nèi)外關(guān)于引起植物銅中毒劑環(huán)境污染的報(bào)道也愈來(lái)愈多。降低銅用量、促進(jìn)銅轉(zhuǎn)化對(duì)生態(tài) 環(huán)境保護(hù)和農(nóng)產(chǎn)品安全有著重要意義。 茶多酚，是茶葉中最重要的生物活性物質(zhì)，作為一種廣譜、強(qiáng)效、低毒的抗菌藥物已被世界 許多國(guó)家學(xué)者所公認(rèn)，它對(duì)自然界中十余種類群的近百種病原菌均有優(yōu)異的抗菌活性，是一種良 好的天然抗菌劑。茶多酚的主要成分是兒茶素，由于具有多個(gè)酚羥基的特殊結(jié)構(gòu)且具有較強(qiáng)的酸 堿緩沖能力。使其在與金屬離子相遇時(shí)，極易與金屬離子發(fā)生吸附絡(luò)合作用或氧化還原反應(yīng)，形成 穩(wěn)定的絡(luò)合物或氧化還原產(chǎn)物。國(guó)內(nèi)外眾多研究表明，茶多酚- c u ( i i ) 配合物具有較強(qiáng)的生物活性。 本論文主要研究茶多酚- c u ( i i ) 配合物的絡(luò)合性能及其殺菌性能，對(duì)尋找新的銅素殺菌劑、減 少銅素殺菌劑的用量、減少銅污染，保護(hù)生態(tài)環(huán)境具有重要意義，同時(shí)也為實(shí)現(xiàn)茶多酚的綜合利 用提供參考。 1 1 中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)頌士學(xué)餓論文 第二章蕞多酚的提取疑其穩(wěn)定性研究 2 。 號(hào)l 言 第二章茶多酚的提取及其穩(wěn)定性研究 茶多酚是扶天然植物茶葉巾分離掇取韻多羥基酚類衍生物酶混合物，占茶葉干羹的1 5 - 3 0 0 j 6 。 茶多黔的提取工藝主要毒溶劑漫提、壘屬離子沉淀、樹(shù)囂吸附法、超妊界渡體萃取浹、超聲波浸 提法及微波浸提法等。 本實(shí)驗(yàn)獲茶多酪懿特性出笈，尋我簡(jiǎn)單、浹速、有效瓣潞數(shù)方法，并磅究了不翔譚值、溫度 及時(shí)間對(duì)茶多酚穩(wěn)定性的影響，為實(shí)現(xiàn)茶多酚的綜倉(cāng)利用提供參考，同時(shí)也為下文研究茶多酚與 銅離予化學(xué)體系中的絡(luò)合作用擒供參考。 2 2 材料與方法 2 2 1 實(shí)驗(yàn)儀器、原料和試劑 實(shí)驗(yàn)儀器；紫外一可見(jiàn)全分光光度儀f r u 1 9 0 1 ，北京黃析通用有限責(zé)任公司) ，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 ( r e - 5 2 a ，上海亞榮生化儀器廠) ，p h 計(jì)( 雷磁，3 c ，上海精密儀器有限公司) ，循環(huán)真空泵( s h z - i i 型，上海亞榮生訖儀器廠) 。 實(shí)驗(yàn)試劑；乙酸乙酯( 北京化工廠，分析純) 、無(wú)水硫酸鈉( 北京化學(xué)試劑有限公司，分析 縫) 、溪石羧鐸鏈( j 寨往學(xué)試潮有限公司，分祈緯) 、硫酸亞鐵( 魏索億學(xué)試幫有限公司，分 析純) 、檸檬黢鈉( _ b 京化學(xué)試荊有限公司，分析純) 、鹽酸( 北窳化學(xué)試劑有限公司，分析純) 、 硼砂( 北京化學(xué)試劑有限公司，分析純) 、磷酸二氨鉀( 北京化學(xué)試劑有限公司，分析純) 、磷 酸氫= 鈉( 魏京化學(xué)試熱毒鼴公司，分析純) 。 原料：安徽黃山毛峰干茶葉。 2 2 2 實(shí)駿方法 2 2 2 1 茶多酗提取 有機(jī)溶劑萃取i 蠱是傳纜的提取法，過(guò)程比較簡(jiǎn)單。最常用的溶劑是乙醇、甲醇、丙酮、乙酸 己酯等閑，零試驗(yàn)采廂乙馥乙酯溶劑進(jìn)行提取。 稔取茶葉1 0 0 9 予樣箍，女口入5 0 0 m l9 0 - 1 0 0 c 蒸馕拳孛，于憾渥承漆搪孛攫攙，減壓過(guò)濾， 先后用乙酸乙酯萃取兩次。合并有機(jī)相，用無(wú)水n a 2 s 0 4 干燥，減壓蒸餾除去溶劑得黃色粉末狀 萘多酚，實(shí)驗(yàn)漉程翔圖2 - i 所示： 1 2 團(tuán)罵困堅(jiān)固坐攀匪圈 l 臣巫口一圈 2 2 2 2 茶多酚含量的測(cè)定 引用標(biāo)準(zhǔn)g b t 8 3 1 3 - 2 0 0 2 茶多酚的測(cè)定【7 ”。 原理：茶葉中多酚類物質(zhì)能與亞鐵離子形成紫藍(lán)色絡(luò)合物。用分光光度計(jì)測(cè)定其含量。 ( 1 ) 配制酒石酸亞鐵溶液：稱取1 0 9 硫酸亞鐵( f e , s 0 4 ) 和5 0 9 酒石酸鉀鈉 ( c 1 a h 0 6 k l , l a 4 1 1 2 0 ) ，蒸餾水定容至1 l ，低溫保存； ( 2 ) 配制p h7 5 磷酸鹽緩沖液( 1 1 5m o l l 的磷酸氫二鈉溶液8 5 m l 和1 1 5m o l l 磷酸二氫 鉀溶液1 5 m l 均勻混合) ； ( 3 ) 稱取0 5 9 茶多酚，用蒸餾水配制2 5 0 m l o 2 茶多酚溶液； ( 4 ) 取l m l 茶多酚溶液，注入2 5 i i l l 容量瓶，加入蒸餾水4 m l 和酒石酸亞鐵溶液5 m l ，充分 混合，再加p h7 5 磷酸鹽緩沖液至刻度； ( 5 ) 用1 0 i f l m 比色杯，在波長(zhǎng)5 4 0 h m 處，以空白溶液作參比。測(cè)定吸光度值。 ( 6 ) 計(jì)算方法 茶多酚( ) = 1 0 0 0 式中：l 1 試液的總量，m l ； ir - 澳0 定時(shí)的用液量m l m 曠_ _ 式樣的質(zhì)量，g ； a 一式樣的吸光度； l 1 b m o x1 公式( 2 1 ) 1 9 5 7 一用l o n u n 比色杯，當(dāng)吸光度等于0 5 0 時(shí)，每毫升溶液中含茶多酚相當(dāng) 于1 9 5 7 m g 。 2 2 2 3 茶多酚穩(wěn)定性研究1 7 s - ”1 ( 1 ) 不同p h 溶液茶多酚的穩(wěn)定性 首先配制不同p h 值緩沖溶液，然后分別用各緩沖液配制0 1 的茶多酚溶液5 0 m l ，2 5 。c 放 置3 0 r a i n ，參照g b t 8 3 1 3 2 0 0 2 對(duì)茶多酚含量進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算茶多酚含量的變化率。設(shè)置室溫下 0 1 的茶多酚水溶液為對(duì)照，重復(fù)兩次。 對(duì)照一處理