T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn).ppt

T-SPOT.TB,楊中平,結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)檢測,T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)（T-SPOT），又叫作結(jié)核感染干擾素釋放試驗(yàn)（InterferonGammaReleaseAssays，IGRAs,結(jié)核的現(xiàn)狀,結(jié)核病是全球嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題之一。據(jù)WHO統(tǒng)計(jì)，全球約有20億人感染結(jié)核分枝桿菌，每年有約200萬人死于結(jié)核。我國是世界上22個結(jié)核病高負(fù)擔(dān)國家之一，結(jié)核感染導(dǎo)致的死亡人數(shù)是其他傳染性疾病總死亡人數(shù)的2倍以上。,基于T淋巴細(xì)胞檢測結(jié)核感染的原理,T-SPOT.TB在診斷結(jié)核感染方面具有良好的敏感性和特異性，在現(xiàn)有結(jié)核診斷方法存在缺陷的今天，T-SPOT.TB可以給臨床診斷提供參考?；诮Y(jié)核抗原特異性T細(xì)胞向病變部位集中的特點(diǎn)，T-SPOT.TB的檢測物已不局限于靜脈血，支氣管肺泡灌洗液、痰液、胸腹水、腦脊液等也可用于對肺內(nèi)及肺外結(jié)核的診斷。,T-SPOT的意義,1:菌陰，結(jié)核病患者的輔助診斷2：肺外結(jié)合的鑒別診斷3：免疫力低下/受抑制患者的結(jié)核診斷/感染篩查4：兒童結(jié)核病的輔助診斷,T-SPOT注意事項(xiàng),1:肝素抗凝全血，常溫保存,不得冷凍或冷藏。2:采血量：三歲以下2ML，3-9歲4ML，9歲以上6ML，免疫力低下或白細(xì)胞低下采6ML（本公司一律兩管）3:樣本必須4小時內(nèi)送達(dá)。4：輸血受試者或PET-CT受試者，兩周后檢測。5：受試者需閱讀知情同意書并填寫申請單。,基于T淋巴細(xì)胞檢測結(jié)核感染的原理,結(jié)核的傳統(tǒng)診斷手段,結(jié)核菌素皮試：低敏感性：免疫力低下人群中其敏感性大大降低。低特異性：與卡介苗接種和其他環(huán)境分枝桿菌有交叉，易造成“假陽性”結(jié)果。細(xì)菌學(xué)檢查：常規(guī)培養(yǎng)：2月；快速培養(yǎng)：1周；陽性率取決于采集標(biāo)本中細(xì)菌數(shù)量，不利于早期診斷。病理學(xué)檢查：陽性率低，對取材標(biāo)本有較高要求，有創(chuàng)傷，對肉芽腫性病變需進(jìn)一步鑒別。,基于T淋巴細(xì)胞檢測結(jié)核感染的原理,結(jié)核感染的免疫應(yīng)答反應(yīng)以細(xì)胞免疫為主，結(jié)核感染后體內(nèi)長期存在抗原特異性的記憶性T細(xì)胞當(dāng)再次遇到抗原刺激時，能迅速活化增殖，釋放r干擾素r干擾素是結(jié)核分枝桿菌感染后機(jī)體免疫應(yīng)答中最重要的細(xì)胞因子,基于T淋巴細(xì)胞檢測結(jié)核感染的原理,T-SPOT.TB技術(shù)：利用結(jié)核桿菌感染者外周血單個核細(xì)胞（PBMC）中存在結(jié)核特異性T細(xì)胞，這些淋巴細(xì)胞在受到結(jié)核特異抗原刺激后分泌r干擾素而設(shè)計(jì)的T細(xì)胞免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)。檢測外周血中受結(jié)核特異抗原刺激釋放r干擾素的T淋巴細(xì)胞，經(jīng)酶聯(lián)免疫顯色后，通過ELISPOT分析系統(tǒng)對斑點(diǎn)進(jìn)行計(jì)數(shù)，1個斑點(diǎn)代表一個細(xì)胞，計(jì)算出抗原特異性細(xì)胞的頻率。,基于T淋巴細(xì)胞檢測結(jié)核感染的原理,空白對照孔內(nèi)斑點(diǎn)數(shù)小于10且陽性對照孔內(nèi)斑點(diǎn)數(shù)大于20時視為試驗(yàn)有效T-SPOT.TB試驗(yàn)結(jié)果用每106PBMCs中斑點(diǎn)形成細(xì)胞（SFCs）的數(shù)目來描述，即SFCs/106PBMCs,基于T淋巴細(xì)胞檢測結(jié)核感染的原理,包,基于T淋巴細(xì)胞檢測結(jié)核感染的原理,T-SPOT.TB的臨床意義,T-SPOT.TB高靈敏度,提問,出報告時間：一、三、五檢測三個工作日出。標(biāo)本類型