腫瘤超早期篩查在體檢中的應(yīng)用.ppt

preMiD腫瘤 超 早期預(yù)警篩查體檢中的應(yīng)用 癌癥分子解析preMiD技術(shù)在腫瘤早期篩查中的應(yīng)用案例分享總結(jié) 主要內(nèi)容 惡性腫瘤現(xiàn)狀 惡性腫瘤已成為人類的 頭號殺手 全球每年新發(fā)腫瘤 1400萬人 死亡約820萬人 預(yù)計2025年 因人口增加和老齡化等因素 每年新增超2000萬病例 2012年中國腫瘤登記年報 數(shù)據(jù)表明 中國每年新發(fā)腫瘤約310萬人 死亡270萬人 右上圖 近60年來癌癥致死率沒有明顯下降 右下圖 世衛(wèi)組織 WHO 早發(fā)現(xiàn)早診斷早治療 三早 是關(guān)鍵 早發(fā)現(xiàn) 是根本 目前還無法攻克癌癥 尤其是中晚期 癌癥可防 可治 癌前階段 可實(shí)現(xiàn)近100 預(yù)防早期癌癥 可以實(shí)現(xiàn)80 治愈率晚期癌癥 僅30 人活過5年 按照平均壽命74歲計算 人一生中患癌幾率是22 從年齡看 45歲以后發(fā)病率上升明顯 應(yīng)在40歲開始重視針對腫瘤的專項(xiàng)檢查 2014世界癌癥報告 抗擊癌癥 重在預(yù)防 癌癥的分子解析 ICGC 癌癥基因組學(xué)研究 國際癌癥基因組聯(lián)盟 InternationalCancerGenomeConsortium ICGC 2014年2月4日公布超過1萬個癌癥基因組的數(shù)據(jù) 2013年12月5日ICGC宣布 在原來白血病 膀胱癌 胃癌的基礎(chǔ)上 中國又發(fā)起針對腸癌 食道癌 肝癌的驅(qū)動基因檢測項(xiàng)目 眼下癌癥診治急需新的途徑 如果能更好地從基因組來了解癌癥 那么將更有利于癌癥的預(yù)防和控制 TomHudson安大略癌癥研究所 OICR 所長 ICGC創(chuàng)始人之一 www icgc org 致癌突變 oncogenicmutations 到腫瘤形成需要10 20年 期間 涉及多基因的異常發(fā)生 具有早期性和特異性 早期性 分子異常是癌癥發(fā)生的早期事件 特異性 分子異常是癌癥發(fā)生的特有標(biāo)記 癌變的分子事件 AlfredG Knudson NatureRev Cancer 1 157 162 2001 CarloM Croce N Engl J Med 358 502 511 2008 原癌基因 Proto oncogene 原癌基因是是細(xì)胞內(nèi)與細(xì)胞增殖相關(guān)的高度保守的基因 原癌基因的結(jié)構(gòu)或調(diào)控區(qū)發(fā)生變異 基因產(chǎn)物增多或活性增強(qiáng)時 此時轉(zhuǎn)化為癌基因 使細(xì)胞過度增殖 抑癌基因 TumorSuppressor 抑癌基因一般調(diào)控DNA的修復(fù)和細(xì)胞凋亡 在被激活情況下它們具有抑制細(xì)胞增殖作用 抑癌基因突變能導(dǎo)致活性降低或消失 從而減弱甚至消除抑癌作用 Sanger研究所 Cosmic數(shù)據(jù)庫 EmerginglandscapeofoncogenicsignaturesacrosshumancancersNatureGenetics45 1127 1133 2013 http cancer sanger ac uk cancergenome projects cosmic 腸癌中基因異常發(fā)生率GaoH etal CancerRes 54 4342 4346 1994 MorganC etal Br J Cancer 89 1314 1319 2003 preMiD技術(shù)在腫瘤早期篩查中的應(yīng)用 傳統(tǒng)檢測 突變檢測 癌癥的 冰山學(xué)說 早期癌癥幾乎沒有癥狀 極其容易被傳統(tǒng)檢測所忽視 一旦檢出 則大部分為中晚期 preMiD超早期防癌檢測 提前約3年預(yù)防發(fā)現(xiàn)潛伏體內(nèi)的癌癥或癌前病變 preMiD 超早期防癌檢測 提前臨床癥狀3 5年預(yù)警 preMiD 技術(shù)檢測的是來自于腫瘤相關(guān)的原癌基因和抑癌基因的異常突變 基因突變類型如下 血液循環(huán)腫瘤DNA ctDNA 來源 NatRevCancer 2011Jun 11 6 426 37 ctDNA由癌變細(xì)胞死亡 凋亡或主動分泌進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)cfDNA的長度一般為100 500堿基 攜帶有癌癥細(xì)胞內(nèi)部所含異常信息 如突變 copy數(shù)變化 甲基化 融合基因及染色體異常等 血液中含有驅(qū)動突變或致癌突變分子 意味身體內(nèi)有癌變細(xì)胞 ctDNA是最有希望發(fā)現(xiàn)早期癌癥 美國約翰霍普金斯大學(xué)LuisDiaz博士Free floatingDNAfromtumorcouldprovideearlywarning USAtoday 分子癌變階段 8 10年 細(xì)胞癌變階段 3 5年 細(xì)胞簇形成 組織形成 早癌 1 3年 中晚期癌 1 不死2 無限增殖3 表型正常 1 逃避免疫監(jiān)視2 形成新血管3 異性增生 常規(guī)手段可以檢測 preMiD可以 血漿突變檢測技術(shù) preMiD preMiD Blocker ASA MCA 突變偏向擴(kuò)增系統(tǒng) ASA PCR引物的3 端位必須和突變擴(kuò)增子匹配 而野生不匹配采用特異探針 實(shí)時PCR反應(yīng) 熔解曲線分析 MeltingCurveAnalysis 熒光vs溫度作圖得到DNA熔解曲線DNA溶解曲線是DNA序列的 指紋 核酸blocker阻滯野生擴(kuò)增設(shè)計野生匹配blocker 含PNA修飾 阻滯對野生片段擴(kuò)增 三種已有技術(shù)的有機(jī)結(jié)合成preMiD 靈敏度達(dá)到0 01 特異性近100 美國斯坦福癌癥研究院近30年調(diào)查研究發(fā)現(xiàn) 癌前階段 癌癥是可逆性 工程 消除突變 抑制癌變 正常DNA DNA突變 腫瘤驅(qū)動基因 DNA修復(fù) 抑癌基因誘導(dǎo)凋亡 免疫監(jiān)視 失敗 癌 干預(yù) 突變逆轉(zhuǎn) 早發(fā)現(xiàn)與早預(yù)防 突變篩查 免疫力 遠(yuǎn)離致癌物 干預(yù) 突變定量分析 1 對于有基因突變的受檢者 同時加做突變定量值 便于后期干預(yù)有效性的對比 2 隨著樣本量的增加 跟蹤后續(xù)發(fā)展變化 將給出突變風(fēng)險提示 突變值 QRAM qPCR相對定量檢測腫瘤特異突變位點(diǎn)在血漿中含量在干預(yù)前后的變化 判斷效果 干預(yù)有效性判斷 主要用途 1 直觀反應(yīng)干預(yù)或治療方案的有效性 避免無效治療 2 評估手術(shù)后患者基本狀態(tài) 如體內(nèi)有無殘留或轉(zhuǎn)移 3 判斷有無復(fù)發(fā) preMiD專業(yè)性 preMiD 德國標(biāo)準(zhǔn)生產(chǎn)質(zhì)控體系 國際公認(rèn)檢測內(nèi)容 COSMIC數(shù)據(jù)庫 包含突變基因及位點(diǎn)信息 屬于國際最權(quán)威機(jī)構(gòu)最新研究成果 國家批準(zhǔn)專有檢測試劑 美國Roche檢測儀器 注冊號 進(jìn) 字2009第3402689號 preMiD 血漿突變技術(shù)驗(yàn)證 NSCLC組織和血漿中EGFR突變一致性研究 試驗(yàn)單位 北京協(xié)和醫(yī)院 浙江大學(xué)附屬第一醫(yī)院 江蘇省腫瘤醫(yī)院 青島大學(xué)附屬醫(yī)院Sanger測序1212例非小細(xì)胞肺癌患者腫瘤組織EGFR突變 preMiD 法檢測對應(yīng)1212例血漿EGFR突變 總體結(jié)果 陽性符合率為80 49 陰性符合率為94 66 總符合率為90 35 唯一完成臨床試驗(yàn)研究 血漿 組織突變一致性最高的結(jié)果 已完成CFDA批準(zhǔn)臨床實(shí)驗(yàn) 2011年12月28號 2013年12月28號 中國唯一入選國際腫瘤學(xué)術(shù)大會ASCO會議的主講報告 中國醫(yī)師協(xié)會preMiD項(xiàng)目專家論證會 ctDNA在國際上的應(yīng)用 NDRG4 BMP3 NDRG4 BMP3 KRAS 總靈敏度 92 sensitivity早期腸癌靈敏度 94 特異性 87 ColonGuard EXACT ColonVantage QUEST ColoVantage檢測血漿中SEPTIN9的甲基化狀態(tài) 達(dá)到檢測和預(yù)警結(jié)直腸癌的目的 ColoVantage是一種無創(chuàng)的檢測方法靈敏度達(dá)到70 特異性達(dá)到89 適用于各個分期的結(jié)直腸癌 ctDNA在甲狀腺癌檢測中的應(yīng)用 基因檢測對甲狀腺腫瘤診斷的準(zhǔn)確率在80 以上突變檢測能夠應(yīng)對病理檢測不能確定的情況 NikiforovYEetal JClinEndocrinolMetab 2011Nov 96 11 3390 7 案例分享 preMiD檢測 FLT3突變 案例一 FLT3基因突變 2年半后診斷大腸癌中晚期 個人不相信 不愿面對 沒有采取必要干預(yù)措施 案例二 KRAS突變 檢測者 男性 35歲 重慶人家族史 其父患肺癌進(jìn)行preMiD檢測 KRAS基因突變 KRAS突變 報告解讀 結(jié)合健康問卷及專家咨詢其父患肺癌作息紊亂干咳 胸悶近期沒有體檢資料結(jié)合該情況給出建議 進(jìn)行胸部增強(qiáng)CT檢查 判斷突變在哪個階段 臨床前期或臨床階段 KRAS突變 2014年5月8日右肺下葉斜裂旁小結(jié)節(jié)影肝左葉多發(fā)小囊腫 KRAS突變 干預(yù)方案 匹多莫德口服液服用方法 1支 10ml 次 2次 日 早晚空腹服用 3個月為一周期 KRAS突變 跟蹤隨訪 2014年9月9日胸部CT增強(qiáng)未發(fā)現(xiàn)腫瘤 干預(yù)后4個月進(jìn)行突變復(fù)查及突變定量分析 復(fù)查結(jié)果 基因仍有突變 并對再次突變情況進(jìn)行與第一次的定量值分析 突變較之前下降 KRAS突變 復(fù)查及定量 案例三 THR 基因突變 檢測者 男性 41歲 南京人進(jìn)行preMiD檢測 THR 基因突變 THR 基因突變 報告解讀 結(jié)合健康專家咨詢作息紊亂20年吸煙史 每日1包近期沒有體檢資料 THR 基因突變 右頸部 頜下多發(fā)小淋巴結(jié) 部分淋巴結(jié)FDG代謝增高 甲狀腺瘤可能 THR 基因突變 干預(yù)方案 胸腺肽a1方法 1支 1 6mg 次 1次 周 皮下注射3個月為一周期 干預(yù)后3個月進(jìn)行突變復(fù)查及突變定量分析 復(fù)查結(jié)果 突變消失 THR 基因突變 干預(yù)方案 病理 肺腺癌 案例四 EGFR突變確診6mm早癌 檢測者男性 62歲 無錫人士 某醫(yī)院院長 體檢發(fā)現(xiàn)肺內(nèi)有6mm孤立影 不能確定其性質(zhì) 經(jīng)preMiD 檢測發(fā)現(xiàn)EGFR突變 該檢測者在上海肺科醫(yī)院行胸腔鏡手術(shù) 取出病理為肺腺癌 案例五 FHIT突變確診胃癌晚期 檢測者男性 62歲 機(jī)關(guān)干部 既往慢性胃病史 平時喜食蒜泥等刺激食物 經(jīng)preMiD 檢測 FHIT突變 后追加蛋白標(biāo)志物FMD1值異常升高 建議進(jìn)一步胃鏡檢查 結(jié)果為低分化腺癌晚期 對化療均不敏感 病理 低分化腺癌 案例六 宮頸癌復(fù)發(fā)監(jiān)控案例 檢測者女性 29歲 2012年12月確診宮頸癌 術(shù)后 放 化療后 2013年5月經(jīng)perMiD檢測發(fā)現(xiàn)FHIT exon8位點(diǎn)和HLA A c 835C T位點(diǎn)有突變 確診為術(shù)后復(fù)發(fā) 案例七 鑒別 前列腺癌or前列腺增生 BPH PSA 700 前列腺癌 PSA 25 BPH 總結(jié) preMiD檢測原理 preMiD 技術(shù)檢測的是來自于腫瘤相關(guān)的原癌基因和抑癌基因的異常突變 ctDNA由癌變細(xì)胞死亡 凋亡或主動分泌進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng) 攜帶有癌癥細(xì)胞內(nèi)部所含異常信息 如突變 copy數(shù)變化 甲基化 融合基因及染色體異常等 血液中含有驅(qū)動突變或致癌突變分子 意味身體內(nèi)有癌變細(xì)胞 男性18腫瘤 肺癌 肝癌 胰腺癌 胃癌 食道癌 腎癌 甲狀腺癌 結(jié)直腸癌 膀胱癌 黑色素瘤 膽管癌 淋巴瘤 腦膠質(zhì)瘤 膽囊癌 頭頸癌 前列腺癌 急性髓性白血病 骨髓增生異常綜合癥女性18腫瘤 肺癌 肝癌 胰腺癌