高中生物實(shí)驗(yàn)方法與常用試劑.doc

高中生物實(shí)驗(yàn)方法與常用試劑1實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)方法是整個實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的精髓，是做好實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的關(guān)鍵所在。現(xiàn)將與中學(xué)實(shí)驗(yàn)有關(guān)的一些最常見的經(jīng)典的實(shí)驗(yàn)方法匯總?cè)缦拢?1)化學(xué)物質(zhì)的檢測方法：淀粉碘液 (藍(lán)色)還原性糖斐林試劑、班氏試劑(磚紅色)CO2Ca(OH)2溶液(澄清石灰水變渾濁) 或酸堿指示劑乳酸pH試紙O2余燼復(fù)燃 無O2火焰熄滅蛋白質(zhì)被蛋白酶水解 、雙縮脲試劑(紫色)脂肪蘇丹染液 (橘黃色)、蘇丹染液 (紅色)DNA二苯胺(藍(lán)色)染色體龍膽紫溶液（紫色），醋酸洋紅溶液（紅色）(2)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的顯示方法：光合速率O2釋放量或CO2吸收量或淀粉產(chǎn)生量水生植物可依氣泡的產(chǎn)生量或產(chǎn)生速率;離體葉片若事先沉入水底可依單位時間內(nèi)上浮的葉片數(shù)目;植物體上的葉片可依指示劑(如碘液)處理后葉片顏色深淺。呼吸速率O2吸收量或CO2釋放量或淀粉減少量原子途徑放射性同位素示蹤法細(xì)胞液濃度大小質(zhì)壁分離和復(fù)原細(xì)胞是否死亡質(zhì)壁分離的復(fù)原甲狀腺激素作用動物耗氧量，發(fā)育速度等（飼喂法）生長激素作用生長速度(體重變化，身高變化)胰島素作用動物活動狀態(tài)（切除、移植胰腺）菌量菌落數(shù)或亞甲基藍(lán)溶液褪色程度大腸桿菌伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基生長素作用向光性(3)實(shí)驗(yàn)條件的控制方法：增加水中氧氣泵入空氣或吹氣或放入綠色植物減少水中氧氣容器密封或油膜覆蓋或用涼開水除去容器中CO2NaOH溶液除去葉片中原有淀粉置于黑暗環(huán)境除去葉片中葉綠素酒精隔水加熱除去光合作用對呼吸作用的干擾給植株遮光如何得到單色光棱鏡色散或彩色薄膜濾光血液抗凝加入檸檬酸鈉線粒體提取細(xì)胞勻漿離心骨的脫鈣鹽酸溶液滅菌方法微生物培養(yǎng)的關(guān)鍵在于滅菌，對不同材料,滅菌方法不同：培養(yǎng)基用高壓蒸氣滅菌；接種環(huán)用火焰灼燒滅菌；雙手用肥皂洗凈，擦干后用75酒精消毒；整個接種過程都在實(shí)驗(yàn)室無菌區(qū)進(jìn)行。(4)實(shí)驗(yàn)中控制溫度的方法：還原糖鑒定：水浴煮沸加熱酶促反應(yīng)：水浴保溫用酒精溶解葉中的葉綠素：酒精要隔水加熱DNA的鑒定：水浴煮沸加熱細(xì)胞和組織培養(yǎng)以及微生物培養(yǎng)：恒溫培養(yǎng)（5）常見器材濾紙：過濾或紙層析紗布、尼龍布：過濾，遮光血球計(jì)數(shù)板：計(jì)數(shù)（探究酵母菌種群數(shù)量變化）2、具體實(shí)驗(yàn)方法、根據(jù)顏色來確定某種物質(zhì)的存在：淀粉+I2(藍(lán)色);還原性糖+斐林試劑(磚紅色);脂肪+蘇丹(橘黃)或+蘇丹(紅色);蛋白質(zhì)+雙縮脲試劑(紫色);大腸桿菌+伊紅和美藍(lán)(菌落為深紫色，有金屬光澤)、用顏色標(biāo)記法來確定原腸胚三個胚層的分化情況。、用熒光標(biāo)記法來證明細(xì)胞膜具有一定的流動性、同位素示蹤法：光合作用產(chǎn)生氧氣的來源; 光合作用中二氧化碳的去向;噬菌體侵染細(xì)菌實(shí)驗(yàn)證明DNA是遺傳物質(zhì)，蛋白質(zhì)不是遺傳物質(zhì);DNA的復(fù)制是半保留復(fù)制。、確定某種元素為植物生長必需的元素的方法:水培法(完全培養(yǎng)液與缺素完全培養(yǎng)液對照)、獲得無籽果實(shí)的方法:用適宜濃度的生長素處理花蕾期已去雄的子房，如無籽蕃茄、誘導(dǎo)染色體變異，如無籽西瓜。、確定某種激素功能的方法：飼喂法，切除注射法，閹割移植法，切除口服法。、確定傳入、傳出神經(jīng)的功能：刺激+觀察效應(yīng)器的反應(yīng)或測定神經(jīng)上的電位變化。、植物雜交的方法雌雄同花：花蕾期去雄+套袋 +開花期人工授粉+套袋雌雄異花：花蕾期雌花套袋+開花期人工授粉+套袋、確定某一顯性個體基因型的方法：測交; 該顯性個體自交。、確定某一性狀為顯性性狀或隱性性狀的方法：具有一對相對性狀的純合體的雜交自交，觀察后代是否有性狀分離。、確定某一個體是否具有抗性基因的方法：確定小麥?zhǔn)欠窬哂锌逛P病基因，用銹病菌去侵染，一段時間后，觀察有無銹斑出現(xiàn)。、鑒定血型的方法：用標(biāo)準(zhǔn)血清與待測血型混合，在顯微鏡下觀察血液的凝集情況。、育種的方法：雜交育種;人工誘變育種;單倍體育種;基因工程育種;細(xì)胞工程育種;多倍體育種等。、測定種群密度的方法：樣方法; 標(biāo)志重捕法、生態(tài)瓶的制作方法;瓶必須透明，且封閉、分離微生物的方法：平板劃線法;用選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)(如：圓褐固氮菌的分離，金黃色葡萄球菌的分離，細(xì)菌和酵母菌的分離)、測定微生物群體生長的方法：測定細(xì)菌的數(shù)目-顯微計(jì)數(shù)測定細(xì)菌的重量-取一定體積的培養(yǎng)基，經(jīng)離心分離，反復(fù)洗滌后，稱濕重，或烘干后稱干重3、生物學(xué)中常用的試劑：1、斐林試劑：成分：0.1g/mlNaOH（甲液）和0.05g/mlCuSO4（乙液）。用法：將斐林試劑甲液和乙液等體積混合，再將混合后的斐林試劑倒入待測液，水浴加熱或直接加熱，如待測液中存在還原糖，則呈磚紅色。2、班氏糖定性試劑：為藍(lán)色溶液。和葡萄糖混合后沸水浴會出現(xiàn)磚紅色沉淀。用于尿糖的測定。3、雙縮脲試劑：成分：0.1g/mlNaOH（甲液）和0.01g/mlCuSO4（乙液）。用法：向待測液中先加入2ml甲液，搖勻，再向其中加入34滴乙液，搖勻。如待測中存在蛋白質(zhì)，則呈現(xiàn)紫色。4、蘇丹：用法：取蘇丹顆粒溶于95%的酒精中，搖勻。用于檢測脂肪?？蓪⒅救境砷冱S色（被蘇丹染成紅色）。5、二苯胺：用于鑒定DNA。DNA遇二苯胺（沸水?。蝗境伤{(lán)色。6、甲基綠：用于鑒定DNA。DNA遇甲基綠（常溫）會被染成藍(lán)綠色。（甲基綠使DNA呈現(xiàn)綠色，吡羅紅使RNA呈現(xiàn)紅色。）7、50%的酒精溶液：在脂肪鑒定中，用蘇丹染液染色，再用50%的酒精溶液洗去浮色。（蘇丹是弱酸性染料，易溶于體積分?jǐn)?shù)為50%酒精）8、75%的酒精溶液：用于殺菌消毒，對于細(xì)菌有強(qiáng)烈的殺傷作用，可以作防腐劑。75%的酒精能滲入細(xì)胞內(nèi)，吸收細(xì)菌蛋白的水分，使蛋白質(zhì)凝固變性而失去功能。低于這個濃度，酒精的滲透脫水作用減弱，殺菌力不強(qiáng)；而高于這個濃度，則會使細(xì)菌表面蛋白質(zhì)迅速脫水，凝固成膜，妨礙酒精透入，削弱殺菌能力。75的酒精溶液常用于手術(shù)前、打針、換藥、針灸前皮膚脫碘消毒以及機(jī)械消毒等。9、95%的酒精溶液：提取含雜質(zhì)較少的DNA。冷卻的體積分?jǐn)?shù)為95%的酒精可用于凝集DNA。DNA不溶于酒精，尤其是體積分?jǐn)?shù)為95%的冷凍酒精，而細(xì)胞中的某些物質(zhì)（蛋白質(zhì)等）可以溶解于酒精。洗去多余的試劑：卡諾氏液可溶于體積分?jǐn)?shù)為95%的酒精中。燃燒加熱：酒精是富含能量的有機(jī)物，燃燒能釋放大量的熱量無水乙醇：提取色素。葉綠體中的各種色素均是有機(jī)物，能溶解在有機(jī)溶劑中，各色素在無水酒精中的溶解度較大，且酒精無毒，方便操作。10、鹽酸：在“探究酶在不同Ph下的活性”的實(shí)驗(yàn)中提供酸性環(huán)境 15%的鹽酸和95%的酒精溶液等體積混合可用于解離根尖。（觀察植物細(xì)胞的有絲分裂,觀察低溫下染色體的數(shù)目變化.）8%的鹽酸:觀察DNA和RNA在細(xì)胞中的分布中，改變細(xì)胞膜的通透性，加速染色劑進(jìn)入細(xì)胞，同時使染色質(zhì)中的DNA與蛋白質(zhì)分離，有利于DNA與染色劑結(jié)合 。11、龍膽紫溶液：(濃度為0.01g/ml或0.02g/ml)用于染色體著色，可將染色體染成紫色，通常染色35分鐘。（也可以用醋酸洋紅染色）12、20%的肝臟、3%的過氧化氫、3.5%的氯化鐵：用于比較過氧化氫酶和Fe3+的催化效率。（新鮮的肝臟中含有過氧化氫酶）13、3%的可溶性淀粉溶液、3%的蔗糖溶液、2%的新鮮淀粉酶溶液：用于探索淀粉酶對淀粉和蔗糖的作用實(shí)驗(yàn)。14、碘液：用于鑒定淀粉的存在。遇淀粉變藍(lán)。15、丙酮：用于提取葉綠體中的色素。16、層析液：（成分：20份石油醚、2份丙酮、和1份苯混合而成，也可用93號汽油）可用于色素的層析，即將色素在濾紙上分離開。17、二氧化硅：在色素的提取的分離實(shí)驗(yàn)中研磨綠色葉片時加入，可使研磨充分。18、碳酸鈣：研磨綠色葉片時加入，可中和有機(jī)酸，防止在研磨時葉綠體中的色素受破壞。19、0.3g/mL的蔗糖溶液：相當(dāng)于30%的蔗糖溶液，比植物細(xì)胞液的濃度大，可用于質(zhì)壁分離實(shí)驗(yàn)。蔗糖溶液還可用于測定植物細(xì)胞液濃度、作為碳源和能源物質(zhì)，也可用于探究生物膜的半透性。20、0.1g/mL的檸檬酸鈉溶液：與雞血混合，防凝血。血液抗凝劑。21、氯化鈉溶液：可用于溶解DNA。當(dāng)氯化鈉濃度為2mol/L、0.015mol/L時DNA的溶解度最高，在氯化鈉濃度為0.14mol/L時，DNA溶解度最低。濃度為0.9%時可作為生理鹽水。22、胰蛋白酶：可用來分解蛋白質(zhì)?？捎糜趧游锛?xì)胞培養(yǎng)時分解組織使組織細(xì)胞分散。 23、秋水仙素：人工誘導(dǎo)多倍體試劑。用于萌發(fā)的種子或幼苗，可使染色體組加倍，原理是可抑制正在分裂的細(xì)胞紡綞體的形成。 24、氯化鈣：增強(qiáng)細(xì)菌細(xì)胞壁的通透性，可用于基因工程。 25石蕊試劑：檢驗(yàn)溶液酸堿性判斷光合速率與呼吸速率快慢的關(guān)系； 26、NaHCO3/ Na2CO3 NaH/ NaH：酸堿緩沖對調(diào)節(jié) NaHCO3：提供CO227溴麝香草酚藍(lán)水溶液：檢測CO2，由藍(lán)變綠再變黃。28.NaOH：用于吸收CO2或改變?nèi)芤旱膒H。用于“探究細(xì)胞表面積與體積的關(guān)系”的實(shí)驗(yàn)。（與酚酞顯色反應(yīng)），觀察物質(zhì)運(yùn)輸效率。29.Ca(OH)2：鑒定CO2。30.瓊脂：激素或其他物質(zhì)的載體或培養(yǎng)基的凝固劑。用于“探究細(xì)胞表面積與體積的關(guān)系”的實(shí)驗(yàn)。31.亞甲基藍(lán)：用于檢測污水的細(xì)菌含量。試劑 檢驗(yàn)物質(zhì) 反應(yīng)顏色斐林（要加熱） 還原糖 磚紅色沉淀雙縮尿 蛋白質(zhì) 紫色蘇丹三/四 脂肪 橘黃/紅碘 淀粉 藍(lán)色DNA 二苯胺（加熱） 藍(lán)色DNA 甲基綠 綠色RNA 吡啰紅 紅色線粒體 健那綠（唯一的活體染色劑）藍(lán)綠色染色體 龍膽紫 紫色染色體 醋酸洋紅 紅/紫紅色乙醇 重鉻酸鉀 灰綠色二氧化碳 溴麝香草酚藍(lán) 由藍(lán)變綠再變黃4、幾種試劑的比較1斐林試劑、班氏試劑與尿糖試紙這三種物質(zhì)均可用來檢驗(yàn)含醛基的有機(jī)物的存在，在醫(yī)學(xué)上用來檢驗(yàn)糖尿病，其原理均是利用了Cu2+的氧化性把醛基氧化，但成分略有不同：斐林試劑：即硫酸銅、氫氧化鈉和酒石酸鉀鈉組成的藍(lán)色混合溶液。分為斐林試劑A和斐林試劑B，A為CuSO4溶液，B為氫氧化鈉和酒石酸鉀鈉的混合溶液，使用時將A、B等體積混合即成斐林試劑。班氏試劑：即硫酸銅、碳酸鈉和檸檬酸鈉組成的混合液，又叫本尼迪克特(Benedict)試劑，它與醛反應(yīng)的結(jié)果是與斐林試劑一致的，只是比斐林試劑更穩(wěn)定，所以在臨床化驗(yàn)中更常使用。尿糖試紙：又叫硫酸銅試紙，呈白色,帶藍(lán)色斑點(diǎn)，用于糖尿病患者的尿糖測試。每片含硫酸銅20毫克,枸櫞酸300毫克,碳酸鈉80毫克，氫氧化鈉235毫克。尿糖試紙法快速、方便，試紙的正確使用方法為：將試紙條放在尿液中浸濕，一秒鐘后取出，在一分鐘內(nèi)觀察試紙的顏色，并與標(biāo)準(zhǔn)色板對照，根據(jù)不同的顏色來確定尿糖陽性的程度。2斐林試劑和雙縮脲試劑的比較相同點(diǎn)：都由NaOH溶液和CuSO4溶液構(gòu)成；斐林試劑甲液和雙縮脲試劑A都為01g/mLNaOH溶液。不同點(diǎn)：CuSO4溶液濃度不一樣：斐林試劑乙液為005g/mLCuSO4溶液， 雙縮脲試劑B為001g/mLCuSO4溶液。 配制比例不一樣：斐