臨床常用免疫學檢查.ppt

臨床常用免疫學檢查 血清免疫球蛋白的檢測 免疫球蛋白是指由漿細胞所產生的 具有抗體活性和 或 抗體樣結構的球蛋白 主要分為IgG IgA IgM IgE和IgD五類 一免疫球蛋白G檢測 IgG是人體含量最多和最主要的Ig 占總Ig的70 80 是唯一能通過胎盤的Ig 具有抗細菌 抗病毒和抗寄生蟲等功能 參考值 單向免疫擴散法 7 6 16 6g L 臨床意義 1 IgG增高 多克隆性增高 IgG IgA IgM均增高 見于慢性感染 慢性肝病 淋巴瘤 肺結核 鏈球菌感染和自身免疫性疾病如SLE RA 單克隆性增高 僅IgG增高 主要為免疫增殖性疾病如分泌型多發(fā)性骨髓瘤IgG型 2 降低 先天性體液免疫 聯合免疫缺陷癥 Bruton s病 獲得性免疫缺陷癥 HIV 重鏈病 輕鏈病 腎病綜合癥 免疫抑制劑應用患者 二免疫球蛋白A檢測 分為血清型 占85 和分泌型 占15 兩種 sIgA存在于外分泌液中 與局部感染 炎癥或腫瘤等病變有密切相關 參考值 單向免疫擴散法 血清IgA710 3350mg L SIgA唾液314mg ml 淚液30 80mg ml 臨床意義 1 增高 IgA型MM SLE RA 肝硬化 濕疹和腎臟疾病 2 降低 反復呼吸道感染 非IgA型MM 重鏈病 輕鏈病 原發(fā)性和繼發(fā)性免疫缺陷癥和自身免疫性疾病 三免疫球蛋白M檢測 IgM是分子量最大的Ig 占總Ig的5 10 具有很強的吞噬 殺菌 凝集作用 在種系發(fā)生 個體發(fā)育及抗原初次免疫后 都首先出現IgM 以后才是IgG 參考值 單向免疫擴散法 0 48 2 12g L 臨床意義 1 增高 病毒性肝炎初期 肝硬化 SLE RA等 原發(fā)性巨球蛋白血癥IgM單克隆性增高 2 降低 先天性免疫缺陷癥 免疫抑制療法后 淋巴系統(tǒng)腫瘤 腎病綜合癥 非IgM型MM 1 免疫球蛋白下降 先天性 見于體液免疫缺損和聯合免疫缺陷病 一種是免疫球蛋白全缺 另一種是球蛋白缺一或二種 最多見的是缺乏IgG易患膿性感染 缺乏IgA易患反復呼吸道感染 缺乏IgM患者易患敗血癥 獲得性 獲得性免疫缺陷病 丟失增多 腎病綜合癥 脫落性皮炎 淋巴網狀系統(tǒng)腫瘤 淋巴瘤 何杰金氏病 中毒性骨髓疾病等 2 高免疫球蛋白血癥 感染 各種感染特別是慢性細菌感染 如慢性骨髓炎 慢性肺膿腫 子宮內感染時臍血或出生后兩日內的新生兒IgM可達0 2 0 3以上 自身免疫性疾病 肝臟疾病 慢活肝 原發(fā)性膽汁肝硬化 隱匿性肝硬化 六血清M蛋白檢測 M蛋白或稱單克隆免疫球蛋白 是一種單克隆B細胞增殖產生免疫球蛋白及其分子片斷 具有相同結構和電泳遷移率 參考值 陰性 臨床意義 見于單克隆免疫球蛋白增殖病 MM 巨球蛋白血癥 重鏈病 重鏈 輕鏈病 輕鏈 半分子病 IgA IgG型 7sIgG病 血清補體檢測 補體 complement C 是一組具有酶原活性的糖蛋白 共有20余種組分 具有溶細胞 調理作用 中和與溶解病毒和炎癥介質 清除免疫復合物等作用 按功能分為經典途徑 旁路激活途徑 膜攻擊組分和調節(jié)分子4種 一總補體溶血活性檢測 CH50 抗原 綿羊紅細胞 抗體 兔抗羊紅細胞抗體 溶血素 補體溶血 100 80 60 40 20 1 2 3 4 血清 ml 溶血 溶血程度與補體含量的關系 參考值 試管法 50 100u ml 臨床意義 主要反映補體傳統(tǒng)途徑活化的活性程度 1CH50增高 見于急性炎癥 組織損傷 風濕熱急性期 結節(jié)性動脈周圍炎 皮肌炎 多發(fā)性關節(jié)炎 傷寒 和某些腫瘤 2CH50降低 更有意義 見于腎小球腎炎 自身免疫性疾病 SLE RA 感染性心內膜炎 病毒性肝炎 慢性肝病和遺傳性血管神經水腫 四補體C3檢測 C3是補體系統(tǒng)中含量最多的物質 在傳統(tǒng)途徑和旁路途經中發(fā)揮重要作用 參考值 單向免疫擴散法 1 14 0 27g l 臨床意義 1增高 急性炎癥 傳染病早期 腫瘤 排斥反應 2降低 消耗增多 腎炎 活動性SLE RA 合成不足 肝病 大量喪失 腎病綜合癥 大面積燒傷等 五補體C4檢測 C4在補體活化 促進吞噬 防止免疫復合物沉著和中和病毒等方面發(fā)揮作用 參考值 單擴 0 55 0 11g L 臨床意義 1增高 組織損傷性疾病 2降低 狼瘡性腎炎 SLE 自身免疫性肝炎 型糖尿病 胰腺癌 多發(fā)性硬化癥 RA IgA型腎炎 遺傳性IgA缺乏癥 細胞免疫檢測 CD clustetrdifferentiation 白細胞分化抗原 CD3 總T細胞 CD4 T輔助細胞 TH CD8 T抑制細胞 TS 參考值 CD3 60 86 CD4 28 58 CD8 19 48 CD4 CD8 0 9 2 0 1 臨床意義 免疫狀態(tài)的檢測指標 CD3下降 自身免疫性疾病 免疫缺陷病 放療 化療后 腎上腺素治療后 CD4下降 惡性腫瘤 免疫缺陷病 免疫抑制劑的使用 病毒感染 嚴重創(chuàng)傷 大手術 CD8下降 自身免疫性疾病 變態(tài)反應疾病 CD4 CD8增高 自身免疫性疾病 惡性腫瘤 病毒感染 變態(tài)反應 CD4 CD8下降 HIV 0 5 傳單 巨細胞病毒感染等 器官移植排斥反應的監(jiān)測 升高預示可能發(fā)生排斥發(fā)應 持續(xù)下降提示感染發(fā)生 0 2必須停止使用免疫抑制劑 病毒性肝炎血清標志物檢測 甲型肝炎病毒標志物檢測 甲型肝炎病毒抗原和RNA檢測 參考值 均陰性 臨床意義 HAVAg陽性 HAVAg在發(fā)病前兩周可從糞便中排出 HAV RNA陽性 早期診斷及特異性診斷 在病人糞便中檢出表明病人急性感染 且病人及其排泄物皆為傳染原 甲型肝炎病毒抗體檢測機體可產生IgM IgG IgA HAV IgM是病毒衣蛋白抗體 HAV IgA是腸道粘膜分泌的局部抗體 HAV IgG可長期存在 參考值 均為陰性 臨床意義 抗HAV IgM陽性 是機體早期診斷指標 說明機體正處于感染期 是感染的特異性指標 抗HAV IgA陽性 早期和急性期在糞便中測得 是早期診斷指標之一 抗HAV IgG陽性 陽性提示既往感染 可作為流行病學調查指標 乙型肝炎病毒標志物檢測 Dane顆粒 乙肝表面抗原 HBsAg 乙肝核心抗原 HBcAg HBe抗原 DNA DNA多聚酶 HBsAg 具有抗原性 無傳染性 參考值 陰性 臨床意義 1 HBsAg為乙肝患者首先出現的病毒標志物 可作為乙肝的早期診斷和普查項目 在急性肝炎潛伏期即可陽性 而臨床表現及肝功異常要在4周后才出現 乙肝發(fā)病時HBsAg達高峰 是診斷乙肝最常用的指標 2 3個月后不轉陰 以變?yōu)槁?慢性遷延性肝炎 慢性活動性肝炎 肝硬化 肝癌3 慢性HBsAg攜帶者 HBsAb 針對HBsAg產生 有一定的中和作用 陽性表明機體有一定免疫力 參考值 陰性 臨床意義 陽性提示急性感染后康復 在發(fā)病后轉陽或效價升高有意義 一般3 6月后出現 可持續(xù)多年 判斷疫苗的質量最主要的指標 接受HBsAb陽性血的受血者 可出現短暫陽性 HBeAg 核心顆粒的可溶性蛋白 具有抗原性 參考值 陰性 臨床意義 HBeAg陽性是乙肝傳染性的標志物 具有傳染性 病人處于活動期 HBeAg與DNA復制成正比 也和肝損成正比 母嬰傳播 判斷急性乙肝的預后 HBeAb 比HBsAb轉陽要早 參考值 陰性 臨場意義 急性肝炎患者HBeAg轉陰 HBeAb出現 認為病情好轉 預后良好 病毒復制水平下降 傳染性降低 但并非無傳染性 潛在HBeAb陽性可能是慢性遷延和惡性變信號 HBcAg 存在于Dane顆粒核心 是一種核心蛋白 被HBsAg包裹 一般測不出來 參考值 陰性 臨床意義 乙肝傳染性活動性病變的標志 HBsAg HBeAg和HBcAb等指標是體內存在乙肝病毒的間接標志 而HBcAg是直接標志 與HBVDNA呈正相關 可反映HBV活動性復制程度 HBcAb 有IgG IgM IgA三種 參考值 陰性 臨床意義 1HBcAb總抗體 主要反映IgG HBV感染的指標 乙肝急性期的輔助診斷 窗口期 流行病學調查的指標 獻血員的篩選 觀察疫苗的安全性 2HBcAb IgM 急性乙肝的診斷 感染早期HBcAb IgM上升 數月后不論HBsAg是否消失 HBcAb IgM都穩(wěn)定 HBsAg陰性急性感染者HBcAb IgM陽性且高滴度 也可診斷 判斷病毒復制的指標 有助于區(qū)別慢活肝或非活動性肝炎 慢活肝HBcAb IgM陽性 低度低 有助于鑒別近期感染或即往感染 3HBcAb IgG 流行病學調查 有助于區(qū)別慢活肝或非活動性肝炎 特別是急性乙肝和乙肝攜帶者急性發(fā)作 前S2和前S2抗體 參考值 陰性 臨床意義 Pre S2陽性提示復制活躍 有傳染性 處于早期感染 抗Pre S2抗體陽性是在乙肝急性期及恢復早期 提示預后良好 HBV DNA 參考值 陰性 臨床意義 乙肝的直接診斷依據 母嬰垂直傳播 丙型肝炎病毒標志物的檢測 HCV RNA 參考值 陰性 臨床意義 早期病原學診斷 判斷預后 HCV IgM 參考值 陰性 臨床意義 急性丙肝患者4周后陽性 6個月內治愈轉陰 否則轉變?yōu)槁?HCV IgG 出現慢 2 6月后陽性 參考值 陰性 臨床意義 抗HCV IgG陽性表明已有HCV 獻血員篩選 腫瘤標志物檢測 腫瘤標志物 tumormarker 腫瘤在發(fā)生和增殖過程中 由腫瘤細胞本身合成 釋放或機體對腫瘤反應而產生的一種物質 反映細胞惡變各階段表型及基因特征性 甲種胎兒蛋白 AFP 早期胎兒肝臟合成 出生后受抑制 當肝臟細胞或生殖腺胚胎組織惡變時顯著增高 參考值 定性 陰性 定量 20ug l 臨床意義 原發(fā)性肝癌的診斷與預后 300ug L 生殖腺胚胎癌中的運用 在睪丸癌 卵巢癌 畸胎癌的診斷 療效觀察和預后判斷中均有意義 其他 鑒別妊娠和絨毛癌 在胎盤梗塞 剝離 羊水栓塞 胎兒先天性開放性神經管畸形 病毒性肝炎 肝硬化 癌胚抗原 CEA 胎兒早期的消化管和某些組織均可合成 孕6個月后下降 出生后極低 參考值 15ug l 臨床意義 由內胚層分化來的惡性腫瘤 尤其是消化道腺體的腫瘤檢出率較高 某些良性腫瘤 直腸息肉輕度一過性增高 結腸炎 胰腺炎 肝臟疾病 肺氣腫 支氣管哮喘 其他體液 良性胸腹水CEA 血清 胃液CEA增高對診斷胃癌有一定價值 癌抗原125 CA 125 屬于糖蛋白性腫瘤相關抗原 存在于卵巢腫瘤的上皮細胞 臨床意義 卵巢癌的診斷 療效觀察 判斷復發(fā) 有重要意義 婦科惡性腫瘤 卵巢上皮細胞腫瘤 透明細胞癌 生殖細胞腫瘤 宮頸癌中均升高 其他 肝癌 胃癌 結腸直腸癌 肺癌 均可增高 良性卵巢腫瘤 子宮肌瘤也可增高 前列腺特異性抗原 PSA 存在于前列腺導管上皮細胞中 可分為復合PSA C PSA 和游離PSA F PSA 參考值 T PSA0 25 臨床意義 有器官特異性 無腫瘤特異性 前列腺癌的篩選 T PSA增高 F PSA T PSA 10 前列腺炎 單純前列腺肥大可輕度升高 自身抗體檢查 自身免疫性疾病 AID 某些原因削弱或破壞健康人的自身免疫耐受 免疫系統(tǒng)對自身組織或成分產生免疫應答 稱自身免疫 由于自身免疫而產生的疾病稱自身免疫病 AID 器官特異性和非器官特異性 抗原為細胞核或胞漿成分 及中間型 抗核抗體 ANA 是以細胞的核成分為靶抗原的自身抗體的總稱 間接免疫熒光檢查有四種熒光圖譜 均質型 抗dsDNA抗體和抗組蛋白抗體 周邊型 抗dsDNA抗體 斑點型或顆粒型 抗U1 RNP 抗Sm 抗Scl 70 抗SS B La 抗SS A Ro等 核仁型 核糖體 U3 RNP RNA聚合酶 自身抗體檢查 抗核抗體 ANA 檢查 抗各種細胞核成分 脫氧核糖核蛋白 DNP DNA 可提取的核抗原 ENA和RNA等 的自身抗體的總稱 參考值 IFA法陰性 血清滴度 1 40為陽性陽性見于SLE 80 100 MCTD 100 原發(fā)性膽汁性肝硬化95 100 DM 30 50 RA等 自身抗體檢查 抗DNA抗體分為 抗ds DNA 抗ss DNA 抗z DNA抗z DNA對SLE有特異性 檢出率在90 以上 抗dsDNA抗體測定的臨床意義見于SLE活動期 陽性率70 90 特異性教高 95 敏感性較低 診斷與治療監(jiān)控 另外參與SLE發(fā)病機制 自身抗體檢查 3 可提取性抗原多肽抗體譜測定抗Sm抗體測定 為SLE所特有 疾病特異度達99 且能反應疾病活動的程度 靈敏度較低 平均為20 與CNS 腎病 肺纖維化及心膜炎有一定關系 抗組蛋白抗體 AHA 測定臨床意義 50 70 的SLE及95 以上的藥物誘導性狼瘡可出現 主要靶抗原為H2A H2B DNA復合物 與SLE活動有關 抗核糖核蛋白 RNP 抗體測定臨床意義 抗U1 RNP抗體主要與MCTD相關 在30 40 的SLE病人中可檢測到 并常與Sm抗體相伴出現 常與下列臨床表現有關 腎臟較少累及 雷諾現象 手腫脹 食管運動不良等 自身抗體檢查 抗SS A Ro抗體測定干燥綜合征有三種不同的自身抗體 SSA SSB SSC RANA 前兩者僅見于原發(fā)性干燥綜合征 后者見于伴類風濕性關節(jié)炎的繼發(fā)性干燥綜合征 SS A Ro抗體見于干燥綜合征 SjS 靈敏度88 96 RA 3 10 SLE 24 60 其他疾病 亞急性皮膚性狼瘡 70 90 新生兒狼瘡 90 補體C2 C4缺乏癥 90 自身抗體檢查 抗SSB抗體 抗La抗體 抗Ha抗體 測定多數情況下與SS A Ro抗體同時出現 干燥綜合征 71 87 新生兒狼瘡綜合征 75 伴先天性心臟傳導阻滯 30 40 抗Scl 70抗體測定抗Scl 70抗體識別的抗原是DNA拓撲異構酶I 該酶參與超螺旋DNA的解螺旋 臨床意義特異性地出現于系統(tǒng)性硬化癥 PPS 的病人 并提示預后不良 自身抗體檢查 自身抗體的檢測 抗核抗體譜 ANA滴度達1 80或以上者需考慮CTD的可能 再進一步檢查ds DNA 抗組蛋白 抗ENA抗體譜的檢查 結締組織病的抗核抗體譜SLE ANA 抗 ds DNA 抗組蛋白 抗Sm 抗SSA pSS 抗SSA 抗SSB DM PM 抗合成酶 jo 1 PL 7 PL 12 抗SRP 抗Mi 2 SSc ACA 抗著絲點 抗Scl 70 抗核仁抗體 MCTD ANA 抗RNP 自身抗體檢查 抗線粒體抗體 AMA 抗心肌抗體 AHA 抗平滑肌抗體 ASMA 抗中性粒細胞胞漿抗體 ANCA 抗磷脂抗體 有抗心脂抗體 狼瘡抗凝物 假陽性梅毒反應等 主要出現在SLE和pSS 并與血小板減少 狼瘡腦病 血管栓塞 習慣性自發(fā)性流產有關 HLA B27 自身抗體檢查 類風濕因子 RF 靶抗原為變性IgG的Fc部分 有IgG IgA IgM IgD IgE五種類型 測定方法 速率散射法或速率比濁法 RIA ELISA法90 RA患者呈陽性 IgA RF與骨質破壞有關 早期升高提示病情嚴重 預后不良 IgE RF升高時已屬病情晚期 感染免疫檢查 抗鏈球菌溶血素o測定 ASO 參考值 乳膠凝集法 500U 臨床意義 增高 A族溶血性鏈球菌感染所引起的疾病 風濕熱 風濕性關節(jié)炎 風濕性心肌炎 急性上呼吸道感染 扁桃體炎 急性腎小球腎炎等 傷寒和副傷寒沙門氏菌的檢測肥達氏反應 Widal 參考值 o凝集效價 1 80傷寒H凝集效價 1 160 副傷寒A B C凝集效價 1 160 臨床意義 1傷寒 O 1 80 H 1 1602副傷寒甲 O 1 80 A 1 160乙 O 1 80 B 1 160丙 O 1 80 C 1 1603單O升高 感染早期或其他沙門氏菌與O抗原交叉反應4單H升高 預防接種或非特異性反應 結核分枝桿菌抗體和DNA測定 參考值 ELISA 結核抗體陰性PCR 結核分枝桿菌DNA陰性 臨床意義 陽性 結核分枝桿菌感染 陽性率80 90 C反應蛋白測定 C reactiveprotein CRP 參考值 免疫比濁法 8 2mg L 臨床意義 1組織損傷 大手術 嚴重創(chuàng)傷 燒傷 心梗2細菌感染 病毒感染升高不明顯3風濕熱活動期4惡性腫瘤 器官移植后排斥反應 TORCH感染免疫檢測 TO toxoplasmagondii 弓形蟲R rubellavirus 風疹病毒C cytomegalovirus 巨細胞病毒H herpessimplexvirus 單純皰疹病毒孕婦感染后可通過胎盤傳染給胎兒 導致流產 死胎 早產 先天畸形和智力障礙 已被作為孕期檢查常規(guī)項目 臨床病原學檢查 病原體所致疾病的實驗診斷原則 1正確 規(guī)范采集和運送標本2直接鏡檢病原體或檢測其抗原成分3運用分子生物學方法檢測病原體核酸4運用免疫學方法測定患者體內的特異性抗體5對病原體進行分離和鑒定 標本采集和運送 標本采集的時間 部位和種類采集要無菌操作 不能接觸消毒劑和抗生素厭氧培養(yǎng)要注意隔絕空氣 血液標本發(fā)熱初期和高峰期采集 如已用抗生素則在下次用藥前采無菌法肘靜脈穿刺10 20ml于血培養(yǎng)瓶 尿液標本采集清潔中段尿標本 最好為晨尿 105cfu ml 為尿路感染 呼吸道標本氣管收集物為理想標本 另痰 鼻咽拭子亦可 糞便標本腹瀉患者糞便取含膿 血或粘液標本 黃豆大小于運送培養(yǎng)基中送檢 腦脊液與其他無菌體液標本無菌采集 保溫送檢或床邊送檢含菌量少 離心后接種 泌尿生殖道標本創(chuàng)傷 組織和膿腫標本 檢測方法 1 直接顯微鏡檢查固定染色鏡檢革蘭氏染色找優(yōu)勢菌找革蘭氏陰性雙球菌抗酸染色墨汁染色 懸滴法或壓滴法利用運動物體對光線的散射作用來實現對有動力的細菌如霍亂弧菌的快速檢驗 2病原體抗原檢測3病原體核酸檢測 聚合酶鏈反應 PCR 變性 退火 延伸DNA探針雜交技術優(yōu)勢 優(yōu)勢出報告快速能在感染早期得到診斷比表型檢測更穩(wěn)定重復性更好 局限不能判定病原體的存活狀態(tài)不能判定機體對病原體的反應狀態(tài)不能判定病原體對藥物的反應性 4病原體分離 培養(yǎng)和鑒定細菌 合適的培養(yǎng)基和條件病毒 立克次體 衣原體等不能人工培養(yǎng) 接種于易感動物 雞胚或細胞培養(yǎng) 5病原體抗體檢測優(yōu)勢能反映機體對病原體感染的反應性 局限存在潛伏期 不能 冷凝集試驗 肺炎支原體與Rh 的O型紅細胞在4發(fā)生凝集 置于37水浴 凝集熔解 1 64外斐反應 OX19 OX2 OXK變性桿菌與某些立克次體有共同抗原 代替立克次體抗原 從而測定立克次體患者血清抗體的凝集試驗 1 160 醫(yī)院感染檢查 醫(yī)院感染又稱院內感染 nosocomialinfection hospitalinfection 或醫(yī)院獲得性感染 指患者在入院時既不存在 亦不處于潛伏期 而在醫(yī)院內發(fā)生的感染 包括醫(yī)院內獲得而在出院后發(fā)病的感染 醫(yī)院感染流行學 病原學細菌最常見 以往以陽性球菌為主 近年變化趨勢陰性桿菌增多 陽性球菌下降 其中有些是在醫(yī)學微生物中根本不討論的 另厭氧菌 深部真菌 病毒都可 感染源和易感人群人員 環(huán)境 醫(yī)療器械和血液制品免疫力低下的住院患者是高危人群 常見的臨床類型下呼吸道感染尿路感染手術切口感染胃腸道感染血液感染皮膚和軟組織感染 醫(yī)院感染病原學檢測 標本采集和送檢基本原則一經發(fā)現及時采集標本嚴格無菌操作立即送檢 最好床邊接種標本容器須滅菌混有正常菌群標本作定量或半定量培養(yǎng)對分離菌作藥敏 提倡 分級報告 涂片鏡檢操作簡便 結果快速 但不能菌種鑒定及藥敏分離培養(yǎng)鑒定法操作簡便 觀察直觀 特異性高 可做藥敏試驗指導臨床用藥 醫(yī)院環(huán)境細菌檢測和消毒滅菌效果檢測 醫(yī)院環(huán)境污染的細菌檢測方法空氣細菌污染的監(jiān)測物體表面細菌的監(jiān)測醫(yī)務人員手部細菌的監(jiān)測 消毒滅菌的效果監(jiān)測高壓蒸汽滅菌 嗜熱脂肪芽孢桿菌ATCC7953紫外線滅菌 枯草芽孢桿菌黑色變種ATCC9372化學消毒劑 使用中污染菌監(jiān)測和效果監(jiān)測 性傳播疾病的檢查 艾滋病 獲得性免疫缺陷病 AIDS 人類免疫缺陷病毒 HIV 感染初篩試