天然產(chǎn)物化學(xué) 銀杏內(nèi)酯.doc

天然產(chǎn)物銀杏內(nèi)酯研究概況摘要：銀杏內(nèi)酯分子具有獨特的十二碳骨架結(jié)構(gòu) ，嵌有一個叔丁基和六個五元環(huán) ，包括一個螺壬烷 ，一個四氫呋喃環(huán)和三個內(nèi)酯環(huán)。銀杏酯對血小板活化因子(PAF)受體有強大的特異性抑制作用，其中銀杏內(nèi)酯的抗PAF活性最高。PAF是血小板和多種炎癥組織分泌產(chǎn)生的一種內(nèi)源性磷脂，是迄今發(fā)現(xiàn)的最有效的血小板聚集誘導(dǎo)劑，它與許多疾病的產(chǎn)生、發(fā)展密切相關(guān)。而銀杏內(nèi)酯目前被認為是最有臨床應(yīng)用前景的天然PAF受體拮抗劑，其拮抗作用活性與化學(xué)結(jié)構(gòu)密切相關(guān)。當內(nèi)酯結(jié)構(gòu)中R3為羥基或羥基數(shù)目增多時，對PAF的拮抗活性減弱;而當R2為羥基且R3為H時，則活性顯著增強，其中以銀杏內(nèi)酯B對PAF產(chǎn)生的操拮抗作用最強，迄今對銀杏內(nèi)酯B的藥理作用研究也最為集中。關(guān)鍵字：理化性質(zhì) 提取分離及純化 藥理作用銀杏（Ginkgobiloba L.）是我國古老樹種之一，作為株羅紀的孑遺植物，基本保持了1.5億年前的生態(tài)特征，因而成為一科一屬一種的特殊植物。銀杏主要含有黃酮、二萜內(nèi)酯類化學(xué)成分。其中黃酮類化合物主要來源于銀杏葉，含量較高，約占2.5%6%，種類約有50種之多。但目前的實驗結(jié)果表明，此類化合物不大可能是銀杏關(guān)鍵性的有效成分。20世紀80年代，研究發(fā)現(xiàn)銀杏內(nèi)酯是血小板活化因子（PAF）的強拮抗劑，對于心腦血管疾病具有顯著的療效，引起國際上銀杏研究的高潮，其中的大部分研究是針對銀杏內(nèi)酯進行的。理化性質(zhì)銀杏內(nèi)酯（ginkgolide）化合物屬于萜類化合物，由倍半萜內(nèi)酯和二萜內(nèi)酯組成，是銀杏葉中一類重要的活性成分。白果內(nèi)酯(hilobalide;BB)屬倍半萜內(nèi)酯，是目前從銀杏葉中發(fā)現(xiàn)的唯一的一個倍半萜內(nèi)酯化合物。銀杏內(nèi)酯A(ginkgolide A；GA)、銀杏內(nèi)酯B(ginkgolide B；GB)、銀杏內(nèi)酯C(ginkgolide C；GC)、銀杏內(nèi)脂M(ginkgolide M；GM)、銀杏內(nèi)脂J(ginkgolide J；GJ)為二萜類化合物，其差別在于含有的羥基數(shù)目和羥基連接的位置不同。其分子結(jié)構(gòu)圖如下。 銀杏內(nèi)酯的提取及純化方法有：溶劑萃取法、柱提取法、溶劑萃取-柱提取法、超臨界提取法及色譜或柱層析純化法等。銀杏提取物中內(nèi)酯類成分的含量測定可采用HPLC-UV法、HPLC-RI法、GC、HPLC-MS、NMR和生物測定方法等等，但因樣品前處理技術(shù)不足，或因靈敏度不夠，或穩(wěn)定性和選擇性相對較差，使結(jié)果均不太理想。目前，報道最有效的分析方法為HPLC-ELSD法。檢測器為蒸發(fā)光散射檢測器(Evaporative Light-Scattering Detector，ELSD)。這是一種HPLC用的新通用質(zhì)量型檢測器，不受外部環(huán)境的干擾，流動相在檢測器中全部揮發(fā)，不干擾檢測。經(jīng)過線形實驗、回收實驗、穩(wěn)定性實驗等證明：ELSD檢測銀杏內(nèi)酯的靈敏度和穩(wěn)定性均能符合含量測定的要求，是一種較理想的簡便實用的檢測方法，其缺點主要是載氣消耗較大。銀杏內(nèi)酯的提取分離方法1、溶劑法 銀杏葉醇提物經(jīng)石油醚脫脂后用乙酸乙酯萃取，萃取物經(jīng)NaHCO3溶液洗滌除去酚性成分后，濃縮即得銀杏內(nèi)酯粗結(jié)晶， 經(jīng)HPLC檢測含銀杏內(nèi)酯81.5%，產(chǎn)率為0.6%。2、樹脂吸附法 銀杏葉醇提物依次經(jīng)吸附樹脂柱處理， 聚酰胺柱除鞣質(zhì)，所得干浸膏經(jīng)HPLC測定含銀杏內(nèi)酯10.6%。3、硅膠柱色譜法Van Beek等對銀杏葉提取物進行溶劑處理后，在含有6.5%NaOAc的硅膠柱上進行中壓柱層析，可大量制備高純度的銀杏內(nèi)酯A B C J及白果內(nèi)酯。4、超臨界流體萃取法Chiu等采用超臨界二氧化碳流體從銀杏葉中提取銀杏內(nèi)酯類成分。單獨的二氧化碳流體并無作用，只有當加入乙醇作為改性劑時才能提取出來， 而且提取能力隨著改性劑的增多而加強。銀杏內(nèi)酯的藥理作用 血小板活化因子(PAF)是一種由多種細胞產(chǎn)生又可作用于多種細胞的內(nèi)源活性物質(zhì),具有廣泛的生物學(xué)作用。1985 年P(guān)iere G.Br aquat 發(fā)現(xiàn)銀杏內(nèi)酯是具有高度專屬性的PAF 受體阻斷劑, 它競爭性地抑制 3H PAF與血小板膜受體結(jié)合, 其IC50 分別為:Ginkgol ide A : 0. 74 LM , Ginkgol ide B :0. 25LM, Ginkgol ide C: 7. 1LM 和Ginkgol ide J: 54. 0LM。其中BN52021( Ginkgol ide B) 活性最強。這一發(fā)現(xiàn)不僅推動了銀杏內(nèi)酯藥理和臨床的深入研究, 使之有望成為治療許多疾病的新型藥物, 還有助于闡明PAF在病理生理過程中的作用, 為PAF研究提供了有價值的參考。因此，從藥理學(xué)和臨床的研究方面而言, 銀杏內(nèi)酯類化合物是最先進的PAF拮抗劑。銀杏內(nèi)酯能競爭性地與PAF受體結(jié)合, 使PAF 失去作用, 從而表現(xiàn)出拮抗活性。其主要藥理作用表現(xiàn)為:1、對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的作用 PAF 是引起腦組織損傷的介質(zhì)之一, 銀杏內(nèi)酯能有效地改變沙土鼠腦行為失調(diào), 阻止腦損傷, 可用于中風(fēng)的臨床治療。靜注PAF 導(dǎo)致鼠腦脊髓炎嚴重惡化, 銀杏內(nèi)酯能阻止病情的惡化, 對治療綜合硬化癥有效。研究表明, 沙土鼠腦中存在PAF 受體, 鼠腦能合成PAF, 在受到刺激時PA F 大大增多,PAF 作為神經(jīng)調(diào)節(jié)劑, 通過改變受體的性質(zhì)影響神經(jīng)元傳遞作用。銀杏內(nèi)酯能拮抗PAF的作用, 對癲癇、焦慮不安等疾病有治療作用。2、抗炎作用 PAF 由多種炎癥細胞( 包括中性粒細胞、巨噬細胞、嗜酸性細胞和血管內(nèi)皮細胞等)和血小板產(chǎn)生, PAF 也可激活它們。對巴豆油所誘導(dǎo)的小鼠耳腫脹, 以消炎痛作對照,銀杏內(nèi)酯混合物0.2Lmol / L,抑制率48.1% ,等劑量的硬脂?；蚜字?DPC)復(fù)合物抑制率達68. 5%,比消炎痛高57.4% 。3、對缺血損傷的保護作用 在血液灌流不足的腦組織, 因血小板聚集可致多發(fā)性腦缺血, 也可導(dǎo)致中風(fēng),在缺血局部血小板聚集使得組織血流減少, 進而阻礙細胞機能的恢復(fù)。在某些病理情況下, 腦內(nèi)PAF 量顯著增加,與腦內(nèi)PAF受體作用可致腦損傷, Ginkgo lide B 能明顯改善缺血狀態(tài),對缺血引起的腦水腫、電解質(zhì)紊亂、炎性細胞浸潤、血小板聚集均有顯著抑制作用。銀杏內(nèi)酯對其它形式的缺血損傷也有保護作用, 如Ginkg olide B 可保護自由基誘導(dǎo)的大鼠缺血再灌注腸粘膜損害, 也可用于防止器官移植中的再灌注損傷。4、抗休克作用 休克是一個多因素參與的復(fù)雜病理過程, PAF 與休克的發(fā)生和發(fā)展關(guān)系密切。Ginkgol ide B 可顯著降低脂多糖( LPS) 所致肺脈管系統(tǒng)和肺液平衡的破壞, 從而對羊因內(nèi)毒素所致休克起到保護作用。Ginkgol ide B 對腎血管的收縮及抗原性休克引起的灌注液中組胺、血栓烷B2 ( T B2 ) 和慢反應(yīng)物質(zhì)A( SRS-A ) 水平的增高有明顯拮抗作用, 亦可減少血栓素的釋放。5、對氣管過敏性的作用 氣管高反應(yīng)性是哮喘的一個重要特征,PAF 是哮喘的重要介質(zhì)之一, 可誘導(dǎo)支氣管高反應(yīng)。Ginkgo lide B 可干擾不同形式的豚鼠自動致敏反應(yīng), 逆轉(zhuǎn)內(nèi)毒素誘導(dǎo)的支氣管對組胺的高反應(yīng)性, 拮抗PAF 對豚鼠氣管的作用, 抑制多種過敏反應(yīng), 對正常人攝入PAF 后引起的支氣管收縮效應(yīng)有部分保護作用。6、對器官移植排斥反應(yīng)的保護作用 Ginkgol ide B 可改善對肺的保護, 有利于肺長期保存后的肺移植, 這與移植肺的供氧、血管張力及順應(yīng)性的改善有關(guān)。Ginkgol ide B 能有效改善人腎移植后的腎功能, 可能與其預(yù)防移植器官缺血性再灌注損傷有關(guān)。研究表明, 口服銀杏內(nèi)酯可大大延長鼠移植皮膚的存活時間, 也延長從豚鼠到老鼠的異種移植心臟的存活時間。7、其它作用PAF 的生物學(xué)作用非常廣泛, 在多種病理生理過程中具有重要意義。銀杏內(nèi)酯為PAF 特異性拮抗劑, 除上述作用外, 對細胞的免疫反應(yīng)、眼睛病變、內(nèi)毒素所致的循環(huán)改變均有抑制作用, 對生殖系統(tǒng)也有作用。此外, 銀杏內(nèi)酯已用于移植排斥、中風(fēng)、早老性癡呆、敗血性休克、多發(fā)性硬化、體外循環(huán)、腦溢血及燒傷等病癥的臨床研究與治療。小結(jié)：銀杏萜內(nèi)酯是一類結(jié)構(gòu)特異的天然有機化合物，是PAF受體的強拮抗劑，具有多種顯著