細胞核增殖相關抗原Ki67在子宮內膜病變中的表達.doc

細胞核增殖相關抗原 Ki67 在子宮內膜病變中的表達 *馬曉欣 李曉晗 李 娜 張淑蘭 陸景明中國醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院婦產科 (沈陽市 110004)摘 要 目的: 研究 Ki67 抗原在子宮內膜病變中表達的規(guī)律及其在子宮內膜癌的發(fā)生和預后評估的臨床價值。方法: 用免疫組化(SP) 法檢測子宮內膜增殖癥及非典型增生各 30 例, 子宮內膜癌 90 例; 對照組 30 例, 其中包括增生期及分泌期子宮內膜各 15 例, 觀察 Ki67 抗原在不同內膜病變及正常內膜中的陽性表達率。結果: Ki67 抗原在分泌期內膜中幾乎沒有表達, 在增生期內膜中有弱表達; 在增殖癥及非典型增生中有表達, 但與對照組比較, 無統(tǒng)計學意義(P0.05) , 且兩者之間比較, 亦無統(tǒng)計學意義(P0.05) ; 在子宮內膜癌組織中表達明顯增高, 顯著高于良性病變組和對照組(P0.05). Compared with control groups respectively, there was no significance too (P0.05). In endometrial carcinoma, the expression increased obviously,which is higher than benign diseases and control group prominently (P0.01). The positive rate of Ki67 antigen increased with the increasing of clinical phase and grade of cellular differentiation. Conclusion: Ki67 antigen is related to the incidence of endometrial carcinoma. The over expression of Ki67 indicates a poor prognosis of pa-tients with endometrial carcinoma.Key words Endometrial disease Ki67 Nuclear proliferation- associated antigen細胞的增殖與腫瘤的發(fā)生、浸潤、種植與轉移過程相關。評價細胞的增殖狀態(tài)對研究腫瘤的生物學行為, 判斷其危險性具有重要意義。Ki67 是一種與增殖細胞相關的核抗原, 是目前應用最廣泛的增殖細胞標志之一, 在乳腺癌、鼻咽癌、膀胱癌等常見, 但在子宮內膜癌報道較少。本文采用免疫組化法檢測Ki67 抗原在正常宮內膜, 宮內膜增殖癥, 非典型增生及子宮內膜癌中的表達, 探討其在子宮內膜癌發(fā)生、發(fā)展中的作用及其作為子宮內膜癌的預后指標的價值。1 材料與方法1.1 材料和試劑所有標本均取自中國醫(yī)科大學附屬二院婦科1990 年 8 月2003 年 8 月經宮腔鏡檢查、診刮及開腹手術子宮切除的子宮內膜組織, 入選病例已除外肝腎疾病, 前 2 周未用激素治療。實驗組: 子宮內膜增殖癥 30 例, 非典型增生內膜 30 例, 子宮內膜癌90 例。子宮內膜癌組年齡 3476 歲, 中位年齡 62歲。期 46 例, 期 21 例, 期 20 例, 期 3 例; 按組織學類型分, 子宮內膜樣腺癌為 86 例, 腺鱗癌 3例, 漿液性乳頭狀腺癌 1 例; 有淋巴結轉移 17 例, 無淋巴轉移 73 例; 高、中、低分化(G1, G2, G3) 各 30 例。對照組: 增生期和分泌期宮內膜各 15 例。所有標本經 10%甲醛常規(guī)固定, 石蠟包埋。所有診斷均經病理證實。試劑: 單克隆抗體 Ki67 及 SP 試劑盒均由廣州中山公司提供。1.2 方法免疫組化采用 SP 法, 取石蠟標本, 4m 連續(xù)切片后, 先經病理確認, 再常規(guī)脫蠟到水, 3%雙氧水溫孵育 10min、水洗, 熱修復(0.01M pH7.4 EDTA) 后降至室溫水洗, 0.05M PBS 浸泡 2min, 10%正常血清封閉, 滴加一抗 Ki67 工作液1:50, 4孵育過夜后升至室溫, 0.05M PBS 洗 3 次, 每次 5min, 滴加二抗(生物素標記) 在 37孵育 35min, 0.05M PBS 洗 3 次, 每次 5min, 二氨基聯(lián)苯胺(DAB) 顯色 5min, 自來水充分水洗, 蘇木素對比染色 10min, 水洗返蘭 30min, 脫水后封片。以 PBS 代替一抗作陰性對照, 已知陽性組織片作陽性對照。1.3 判斷標準Ki67 陽性應為核境界清晰的棕色、棕褐色顆粒, 每張切片隨機計數(shù) 510 個高倍視野 1 000 個細胞中陽性細胞所占百分比。5%為- , 6%25%為+(圖 1), 26%50%為+(圖 2), 51%為+(圖 3)。1.4 統(tǒng)計學方法采用 SPSS 統(tǒng)計軟件包進行 2檢驗。P非典型增生增殖癥正常增殖期內膜正常分泌期內膜。見表 1。*2.2 Ki67 抗原表達與子宮內膜癌的關系子宮內膜癌中 Ki67 陽性率與子宮內膜癌的病理組織分化程度、臨床分期、淋巴結轉移密切相關(P0.01)。見表2。*圖 1 免疫組化 Ki67 染色陽性(+) , 標記在細胞核內免疫組化 SP 法200圖 2 免疫組化 Ki67 染色陽性(+) , 標記在細胞核內免疫組化 SP 法200圖 3 免疫組化 Ki67 染色陽性(+) , 標記在細胞核內免疫組化 SP 法2003 討論腫瘤的生長是一個復雜而有序的多階段生物學過程。Ki67 被認為是癌變人群高危個體的生物學標志物之一1。Ki67 即細胞核相關抗原, 是增殖性細胞核的標記物, 僅分布于細胞核內, 它出現(xiàn)在除 G0期和 G1期所有細胞周期中的特異性非組化蛋白, 與細胞的合成代謝有關2。它表達于增殖細胞中, 在靜止細胞中很少表達, 它在子宮內膜病變的發(fā)生發(fā)展中起到重要的作用。腫瘤增殖活性 Ki67 的檢測對于判斷腫瘤的惡性程度, 預見其生物學行為有重要的意義。ertens3報道, 由于卵巢激素的周期性變化, 使子宮內膜亦出現(xiàn)周期性變化, Ki67 在增生期內膜中有表達, 而在分泌期內膜表達則顯著減少。在卵巢腫瘤中 Ki67 與卵巢腫瘤良惡性, 組織學分級及預后有關4。還有人認為 Ki67 在卵巢腫瘤組織中隨組織學分級、臨床分期的升高而增加, 與卵巢癌組織大小呈正相關, 與淋巴結轉移無關5。而在胰腺癌中 Ki67 標記指數(shù)與組織分級, 臨床分期, 淋巴轉移密切相關6。近年來,Ki67 主要用于觀察惡性腫瘤的生長, 在良性聽神經腫瘤中也有該指標的表達, 且與其生長指數(shù)成正相關, 與病程成負相關7。本研究采用免疫組化法對正常宮內膜(分泌期及增生期), 子宮內膜增殖癥, 非典型增生, 子宮內膜癌 Ki67 抗原的表達進行檢測, 其結果顯示: Ki67 抗原在正常子宮內膜、子宮內膜增殖癥、非典型增生陽性表達率依次呈逐步升高趨勢,兩組比較無統(tǒng)計學意義。而在內膜癌組織中, Ki67抗原表達明顯增高, 顯著高于良性病變組和對照組且有統(tǒng)計學意義, 這與 Morsi 等學者有相同的實驗結論8。表明在子宮內膜癌發(fā)生之前并無 Ki67 抗原廣泛表達, 因此 Ki67 可作為鑒別腫瘤良、惡性的輔助指標。同時本實驗還顯示: 隨子宮內膜癌的臨床分期的增加、淋巴結轉移的有無, Ki67 陽性表達率呈上升趨勢; 且腫瘤細胞分化級別越差, 其惡性度越高,Ki67 增殖活性越強, 說明 Ki67 抗原可作為評價子宮內膜癌增殖、分化狀態(tài)的重要指標, 有助于判斷腫瘤的侵襲力。由此可見, Ki67 在子宮內膜癌發(fā)生、發(fā)展的過程中起到了重要的作用。它不僅能客觀反映內膜癌的增殖活性, 并能估計癌細胞發(fā)生浸潤、轉移的潛能。因此認為 Ki67 為子宮內膜癌發(fā)生發(fā)展, 預后及診斷的良好指標之一。對于早期預測子宮內膜癌的復發(fā)、惡化及治療的選擇有重要的臨床意義。參考文獻1 Liu SC, Sauter ER, Clapper ML, et al. Markers of cell prolifera-tion in normal epithelia and dysplastic leukoplakias of oral cavity J. Cancer Epidemiol Biom Prevention, 1998, 7(7):5976032 Gerdes J, Li L, Schlueter C, et al. Immunobiochemical and molecular biologic characterization of the cell proliferation- associ-ated nuclear antigen that is defined by monoclonal antibody Ki67 J. Am J Pathol, 1991, 138(4): 8678733 Mertens HJ, Heineman MJ, Evers JL, et al. The expression of apoptosis- related proteins Bcl- 2 and Ki67 in endometrium of ovulatory menstrual cyclesJ. Gynecol Obstet Invest, 2002, 53(4):2242304 陳震宇,趙麗焉.細胞核增殖相關抗原 Ki67 和 bcl- 2、bax 與惡性卵巢上皮性腫瘤臨床病理及預后的關系 J. 實用婦產科雜志,2004,20(1):25285 李培淑,李愛華,董瑞英,等.Ki67、Fas 系統(tǒng)在卵巢腫瘤組織中的表達及臨床意義J.山東大學學報,2002, 40(2):1521536 劉江偉,李開宗,竇科峰.胰腺癌組織中 cox- 2、Ki67 的表達及其臨床意義J.肝膽外科雜志,2003,11(1):67687 張玉海,鮑文公,付海霞,等.GGF 與 Ki67 表達與聽神經瘤細胞增殖相關性的探討J.中國腫瘤臨床,2004,31(8):4524568 Morsi HM, Leers MP, Jager W, et al. The patterns of expression of an apopto