輸血科操作規(guī)程.doc

目 錄 1、輸血前檢測(cè)實(shí)驗(yàn)程序 2、改良低離子聚凝胺法實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程 3、冰箱維護(hù)程序 4、ABO 血型鑒定 5、Rh（D）血型鑒定 6、抗體篩選和鑒定試驗(yàn) 7、臨床自體輸血標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程 8、冰凍血漿溶化操作規(guī)程 輸血前檢測(cè)實(shí)驗(yàn)程序1、實(shí)驗(yàn)要求 血清和血漿都可以用于交叉實(shí)驗(yàn)和抗體檢測(cè)，最好是血清標(biāo)本，標(biāo)本使用限制在 3 天內(nèi)，含有肝素等抗凝標(biāo)本可以用凝血酶或硫酸魚(yú)精蛋白處理使其凝集析出血清。允許通過(guò)靜脈輸液口采集標(biāo)本，但必須丟棄受殘留靜脈輸液影響的 5ml標(biāo)本。一般不允許使用溶血標(biāo)本，對(duì)急性溶血性貧血和燒傷病人的溶血標(biāo)本，在實(shí)驗(yàn)前后必須做溶血程度的比較。標(biāo)本和輸血申請(qǐng)單上的所有資料必須填寫(xiě)清楚并完全符合，否則應(yīng)重抽標(biāo)本。對(duì)所有用過(guò)的獻(xiàn)血員和受血者標(biāo)本必須在 1-6冰箱至少保存 7 天，所有實(shí)驗(yàn)都必須保證觀察和記錄同時(shí)進(jìn)行，且記錄和資料都必須至少保存 5 年。 2、血型檢測(cè) 要求完成病人 ABO 正反定型、Rh（D），獻(xiàn)血員血型 ABO 正定型（必要時(shí)做Rh 血型），D 陰性病人必須做 Du 實(shí)驗(yàn)確定。 3、交叉試驗(yàn) 3.1 受血者交叉配血時(shí)所用的標(biāo)本必須是輸血前 3 天之內(nèi)的。3.2 配血時(shí)要逐項(xiàng)核對(duì)輸血申請(qǐng)單、受血者和供血者血樣，復(fù)查受血者和供血者ABO 血型（正、反定型），并常規(guī)檢查患者 Rh（D）血型（急診搶救患者緊急輸血時(shí) Rh（D）檢查除外），正確無(wú)誤時(shí)可進(jìn)行交叉配血。 3.3 凡是輸注全血、濃縮紅細(xì)胞、紅細(xì)胞懸液、洗滌紅細(xì)胞、冰凍紅細(xì)胞、濃縮紅細(xì)胞、手工分離濃縮血小板等患者，應(yīng)該進(jìn)行交叉配血試驗(yàn)。機(jī)器單采濃縮血小板、冷沉淀、新鮮血漿應(yīng)與 ABO 血型同型輸注。3.4 凡遇有下列情況時(shí)必須按全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程要求完成凝聚胺交叉試驗(yàn)和檢測(cè)不完全抗體的交叉試驗(yàn)（酶法、聚凝胺法、抗人球蛋白法） 。除緊急輸血和自身輸血外，所有輸入紅細(xì)胞的其他制品均要求做血交叉試驗(yàn)。 3.5 其他試驗(yàn) 另外必須開(kāi)展的試驗(yàn)有抗人球蛋白試驗(yàn)，抗體篩選、抗體鑒定、新生兒溶血病的全套實(shí)驗(yàn)。 改良低離子聚凝胺法實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程1、目的：減少交叉配血試驗(yàn)的假陽(yáng)性。 2、適用范圍：交叉配血、血型鑒定、抗體篩檢血型血清學(xué)試驗(yàn)。 3、試劑來(lái)源：(臺(tái)資)珠海貝索生物技術(shù)有限公司 4、采集與處理： 4.1 靜脈采血 3-4ml，并觀察是否溶血、乳糜血，如有此現(xiàn)象應(yīng)再留標(biāo)本并做記錄。 4.2 檢查留樣試管、標(biāo)簽、標(biāo)號(hào)、姓名、血型是否齊全，如有遺漏應(yīng)拒收。 4.3 將血標(biāo)本試管放 37水浴中 10 分鐘，離心。 5、標(biāo)準(zhǔn)操作： 5.1 主（次）管加入受（供）血者血清 2 滴，加供（受）血者 4%紅細(xì)胞鹽水懸液 1 滴。 5.2 各管加 LIM0.8ml，混勻，靜置 1 分鐘，各管加 Polybrene Reagent 1 滴，混勻，3000轉(zhuǎn)/分離心 15 秒，倒出上清液（殘留約 0.1ml），輕搖，肉眼可見(jiàn)明顯的凝集狀（如無(wú)凝集須重做），加假凝集清除液 1 滴于管底，輕搖，凝集 1 分鐘內(nèi)消失呈均勻混懸液，為陰性，凝集 1 分鐘內(nèi)不能被消除，即為陽(yáng)性。 5、 結(jié)論： 陽(yáng)性表示受（供）血者血清中含供（受）者紅細(xì)胞血型 Ag 相應(yīng)的 Ab（IgG、IgM），供受血者不相容，陰性表示供受血者相容。 6、 注意事項(xiàng)： 6.1 操作者須嚴(yán)格按照操作說(shuō)明進(jìn)行試驗(yàn)，紅細(xì)胞濃度、血清滴量、反應(yīng)時(shí)間、離心速度等均可影響試驗(yàn)結(jié)果。 6.2 若為弱凝集結(jié)果，本試劑盒按下述試驗(yàn)操作方法，還可進(jìn)一步提高試驗(yàn)靈敏度。試驗(yàn)操作方法如下： 6.2.1 檢測(cè)管中加試驗(yàn)血清 2 滴，4%紅細(xì)胞鹽水懸液 1 滴。 6.2.2 加 LIM0.8ml，混勻，靜置 1 分鐘，各管加Polybrene 2 滴混勻，3000 轉(zhuǎn)/分離心 15 秒，倒出上清液（殘留約 01ml） ，輕搖，肉眼可見(jiàn)明顯的凝集狀（如無(wú)凝集須重做） ，加假凝集清除液 1 滴于管底，輕搖，凝集 1 分鐘內(nèi)消失呈均勻混懸液，為陰性，凝集1分鐘內(nèi)不能被消除，即為陽(yáng)性。 6.3 檢測(cè)標(biāo)本應(yīng)為非抗凝血，如標(biāo)本中含抗凝成分的含量過(guò)高明顯干擾凝集反應(yīng)，可適當(dāng)調(diào)加 Promoter 的滴量，以中和抗凝成分的干擾。 6.4 試驗(yàn)溫度以 20-30為宜，若為寒冷凝集，37水浴5分鐘，在此溫下觀察，凝集消失，說(shuō)明冷凝集素存在。 6.5 肉眼直觀判斷的結(jié)果應(yīng)確保與顯微鏡下觀察結(jié)果一致，直觀不能明確判斷的可疑結(jié)果須鏡檢，鏡下：陰性結(jié)果應(yīng)該是單個(gè) RBC 均勻分布，有 RBC 凝集狀散在的即為弱陽(yáng)性。 6.6 試驗(yàn)質(zhì)量檢驗(yàn)：取自身血清與自身紅細(xì)胞用本試劑盒試驗(yàn)方法作自身陰性對(duì)照試驗(yàn)，取 IgG 抗 D 血清與 RhD（+）RBC 用本試劑盒試驗(yàn)方法作陽(yáng)性對(duì)照實(shí)驗(yàn)，對(duì)照實(shí)驗(yàn)符合，試劑有效。 6.7 疑難結(jié)果以抗人球蛋白實(shí)驗(yàn)（AGT）作最終判斷試驗(yàn)，試驗(yàn)操作參照經(jīng)典AGT（在AGT中，加入本試劑盒中的LIM0.8ml 37孵育時(shí)間可縮短至 10 分鐘）。 6.8 本試劑盒適宜大多數(shù)血型抗體的檢測(cè)，但對(duì) kell 血型系統(tǒng)抗體（主要存在白種人群）檢測(cè)效果較差，由于我國(guó)黃種人群中 kell 血型系統(tǒng)抗體陽(yáng)性者罕見(jiàn)，因此適合在國(guó)內(nèi)推廣?？裳a(bǔ)充抗人球蛋白試驗(yàn)，以提高對(duì) kell 血型系統(tǒng)抗體的檢出率。冰箱維護(hù)程序1、目的：對(duì)冰箱進(jìn)行適當(dāng)?shù)木S護(hù)，以確保冰箱的正常使用。 2、適用范圍：本實(shí)驗(yàn)室使用的各種品牌、型號(hào)的冰箱。 3、負(fù)責(zé)人：科室值班人員 4、操作方法 4.1 儲(chǔ)血冰箱高低溫度報(bào)警裝置完好； 4.2 儲(chǔ)血冰箱溫度記錄每天 3 次(8:00/AM,14:00/PM,20:00/PM),冰箱溫度保持在 2-6，溫度計(jì)應(yīng)在冰箱的上、中、下層輪流放置一天，從而測(cè)量出冰箱內(nèi)溫度的變化情況。如果溫度不在 2-6之間，冰箱發(fā)出報(bào)警聲，應(yīng)記錄可能的原因和采取的措施（將血液轉(zhuǎn)移到 2-6中的冰箱中）； 4.3 所有備血存放在 2-6儲(chǔ)血專(zhuān)用冰箱中； 4.4 不同血型、品種、規(guī)格的血液分別儲(chǔ)存； 4.5 不同日期的血液依次儲(chǔ)存并登記； 4.6 儲(chǔ)血冰箱內(nèi)不得存放其他物品； 4.7 每天對(duì)血液進(jìn)行檢查。凡標(biāo)簽污染被查對(duì)項(xiàng)目不符合規(guī)定，或已破壞血袋密閉狀態(tài)，應(yīng)查明原因，立即處理；4.8 盡量減少冰箱箱門(mén)的開(kāi)啟次數(shù)；4.9 儲(chǔ)血冰箱每周用 2%戊二醛擦拭冰箱內(nèi)表面； 4.10 每月一次冰箱內(nèi)空氣培養(yǎng)，由院感科采樣。細(xì)菌生長(zhǎng)菌落200CFU/m3合格。 4.11 應(yīng)急措施： 如遇停電，立即通知醫(yī)院電工房發(fā)電； 冰箱如溫度不在 2-6之間，立即通知輸血科主任采取冰箱維修，將庫(kù)存血液盡快使用，在未使用完畢前另存于其它冰箱（做好冰箱的消毒及溫度監(jiān)測(cè)）。 ABO 血型鑒定1、測(cè)定原理 根據(jù)紅細(xì)胞上有或無(wú) A 抗原或和 B 抗原，將血型分為 A 型、B 型、AB 型及O 型 4 種?？衫眉t細(xì)胞凝集試驗(yàn)，通過(guò)正、反定型準(zhǔn)確鑒定 ABO 血型。所謂正定型，是用已知抗A 和抗B 分型血清來(lái)測(cè)定紅細(xì)胞上有無(wú)相應(yīng)的 A 抗原或和 B 抗原；所謂反定型，是用已知 A 細(xì)胞和 B 細(xì)胞來(lái)測(cè)定血清中有無(wú)相應(yīng)的抗A或和抗B。 2、標(biāo)本種類(lèi)及收集要求 2.1 受檢者血清； 2.2 枸緣酸鈉抗凝血或未稍取血，受檢者血液制成 5 紅細(xì)胞鹽水懸液使用，制備方法見(jiàn)本節(jié)附注。 2.3 標(biāo)本出現(xiàn)中度溶血者，為不合格標(biāo)本，不能用于檢測(cè)。 3、儀器、試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品、培養(yǎng)基、以及其他所需物品 抗 A、抗 B 血型定型試劑（單克隆抗體）：上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司，產(chǎn)品注冊(cè)號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字 S10980059，包裝:抗 A、抗B各1 支/盒，塑料瓶，規(guī)格：10ml/支，儲(chǔ)存要求：28避光保存，主要成分：分泌抗人 A 型和抗人 B 型血型原單抗的雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清液并補(bǔ)加一定量小鼠腹水抗體。0.9/%的生理鹽水：石家莊四藥有限公司。離心機(jī)，顯微鏡。 4、操作步驟 4.1、試管法 4.1.1 取潔凈小試管(內(nèi)徑 10mm60mm)3 支，分別標(biāo)明抗A、抗B 和抗A十 B，用滴管分別加抗A、抗B 和抗A 十 B 分型血清各 l 滴（約 50 ul）于試管底部，再以滴管分別加入受檢者 5紅細(xì)胞鹽水懸液 1 滴，混和。 4.1.2 另取潔凈小試管(內(nèi)徑 10mm60mm)3 支，分別標(biāo)明 A、B 和 O 細(xì)胞。用滴管分別加入受檢者血清 l 滴于試管底部，再分別以滴管加入 A、B和O型5試劑紅細(xì)胞懸 液 l 滴，混和。 4.1.3 立即以 1000rmin 離心 3 min。 4.1.4 將試管輕輕搖動(dòng)，使沉于管底的紅細(xì)胞浮起，先以內(nèi)眼觀察有無(wú)凝集(或溶血)現(xiàn)象。如內(nèi)眼不見(jiàn)凝集，應(yīng)將反應(yīng)物倒于玻片上，再以低倍鏡檢查。 4.1.5 觀察結(jié)果時(shí)既要看有無(wú)凝集，更要注意凝集強(qiáng)度，此有助于 A、B 亞型、類(lèi) B 或 cisAB 的發(fā)現(xiàn)。 4.1.6 凝集強(qiáng)度判斷標(biāo)準(zhǔn) 4+ 紅細(xì)胞凝集成一大塊，血清清晰透明。 3+ 紅細(xì)胞凝集成數(shù)小塊，血清尚清晰。 2+ 紅細(xì)胞凝塊分散成許多小塊，見(jiàn)到游離紅細(xì)胞。 1+ 肉眼可見(jiàn)大顆粒，周?chē)休^多游離紅細(xì)胞。 鏡下可見(jiàn)數(shù)個(gè)紅細(xì)胞凝集在一起，周?chē)泻芏嘤坞x紅細(xì)胞。 MF 混合凝集外觀(mixed field)是指鏡下可見(jiàn)少數(shù)紅細(xì)胞凝集，而極大多數(shù)紅細(xì)胞仍呈分散分布。 - 表示陰性，鏡下未見(jiàn)凝集，紅細(xì)胞均勻分布。 4.2 玻片法 4.2.1 取清潔玻片 1 張(或白瓷板 1 塊)，用蠟筆劃成方格，標(biāo)明抗-A、抗-B和抗-A 十 B，分別用滴管滴加抗-A、抗-B 和抗-A 十 B 分型血清 l 滴于標(biāo)明的方格內(nèi)，再各加受檢者 2紅細(xì)胞懸液 1 滴，混和。 4.2.2 另取潔凈玻片一張(或白瓷板 1 塊)，用蠟筆劃成方格，標(biāo)明 A 細(xì)胞、B細(xì)胞和 O 細(xì)胞，用滴管各加受檢者血清 1 滴，再分別用滴管滴加 A、B和O型試劑紅細(xì)胞懸液 1 滴。 4.2.3 將玻片(或白瓷板)不斷輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)，使血清與細(xì)胞充分混勻，連續(xù)約 15 min，先以肉眼觀察有無(wú)凝集(或溶血)反應(yīng)；再在低倍鏡下觀察結(jié)果。 5、結(jié)果判定 ABO 血型正反定型結(jié)果分型血清+受檢者紅細(xì)胞 受檢者血型 受檢者血清+試劑紅細(xì)胞抗-A 抗-B 抗-A 十 B A 細(xì)胞 B 細(xì)胞 O 細(xì)胞+ - + A - + - + + B + - - - - O + + -+ + + AB - - - 注：+為凝集；-為不凝集。 6、注意事項(xiàng)： 6.1 分型血清必須為批批檢試劑，且在有效期內(nèi)使用；質(zhì)量性能符合要求。試劑開(kāi)封后必須貼上開(kāi)封日期、開(kāi)封人標(biāo)簽，用畢后應(yīng)放置冰箱保存，以免細(xì)菌污染。試劑開(kāi)封后有效期為一周。 6.2 試劑紅細(xì)胞以 3 個(gè)健康者同型新鮮紅細(xì)胞混和，用生理鹽水洗滌 1 次，以除卻存在于血清中的抗體及可溶性抗原。或使用合格的商品診斷紅細(xì)胞。試劑紅細(xì)胞有效期：自制的為 15 天，商品的為試劑有效期。試劑開(kāi)封后必須貼上開(kāi)封日期、開(kāi)封人標(biāo)簽，用畢后應(yīng)放置冰箱保存，以免細(xì)菌污染。試劑開(kāi)封后有效期為一周。 6.3 生理鹽水啟用后，有效期為二周。 6.4 所有試劑在開(kāi)封或使用時(shí)，必須檢查是否有變質(zhì)；凡可疑者，必須更換新的試劑進(jìn)行檢測(cè)工作。 6.5 試管、滴管和玻片必須清潔干燥，防止溶血。 6.6 操作方法應(yīng)按規(guī)定，一般應(yīng)先加血清，然后再加紅細(xì)胞懸液，以便容易核實(shí)是否漏加血清。 6.7 按理 IgM 抗-A 和抗-B 與相應(yīng)紅細(xì)胞的反應(yīng)溫度以 4為最強(qiáng)，但為了防止冷凝集現(xiàn)象的干擾，一般仍在室溫(2024)內(nèi)進(jìn)行試驗(yàn)，37可使反應(yīng)減弱。 6.8 離心時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短，速度不宜過(guò)快或過(guò)慢，以防假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果。 6.9 觀察時(shí)應(yīng)注意紅細(xì)胞呈特異性凝集、繼發(fā)性凝固以及緡錢(qián)狀排列的區(qū)別。 6.10 判斷結(jié)果后應(yīng)仔細(xì)核對(duì)、記錄，避免筆誤。 6.11 對(duì)于可能存在不完全抗原的時(shí)候，應(yīng)在各反應(yīng)方加入凝聚胺試劑，以檢驗(yàn)不完全抗原的存在。 6.12 對(duì)于可疑結(jié)果，必須更換所用的試劑，重新檢測(cè)。 6.13 5%紅細(xì)胞懸液的配制：用生理鹽水洗滌紅細(xì)胞 3 次。根據(jù)下表進(jìn)行紅細(xì)胞懸液的配制 懸液濃度（%） 壓積紅細(xì)胞（滴） 鹽水（滴）2 1 2ml(40)5 1 0.8ml(16)7、操作性能概要 7.1 正反定型結(jié)果不一致的原因： 7.1.1 原因： 有技術(shù)性問(wèn)題或紅細(xì)胞和血清本身的問(wèn)題，常見(jiàn)者有以下幾種： 7.1.1.1 分型血清效價(jià)太低、親和力不強(qiáng)。如抗A 血清效價(jià)不高，可將 A 亞型誤定為 O 型，AB 型誤定為 B 型。 7.1.1.2 紅細(xì)胞懸液過(guò)濃或過(guò)淡，抗原抗體比例不適當(dāng)，使反應(yīng)不明顯，誤判為陰性反應(yīng)。 7.1.1.3 受檢者紅細(xì)胞上抗原位點(diǎn)過(guò)少(如亞型)或抗原性減弱(見(jiàn)于白血病或惡性腫瘤：以及類(lèi) B 或 cisAB 等。 7.1.1.4 受檢者血清中蛋白紊亂(高球蛋白血癥)，或?qū)嶒?yàn)時(shí)溫度過(guò)高，常引起紅細(xì)胞呈緡錢(qián)狀排列。 7.1.1.5 受檢者血清中缺乏應(yīng)有的抗-A 及或抗B 抗體，如丙種球蛋白缺乏癥。 7.1.1.6 各種原因引起的紅細(xì)胞溶解，誤判為不凝集。部分溶血時(shí)，可溶性血型物質(zhì)中和了相應(yīng)的抗體. 7.1.1.7 由細(xì)菌污染或遺傳因素引起多凝集或全凝集往往是正反定型不符的原因。 7.1.1.8 血清中有意外抗體，如自身抗I，常引起干擾。 7.1.1.9 老年人血清中抗體水平大幅度下降正反定型結(jié)果不一致的解決辦法如發(fā)現(xiàn) ABO 正反定型結(jié)果不一致，先要重復(fù)作試驗(yàn) 1 次。嚴(yán)格執(zhí)行操作規(guī)程，使用質(zhì)量合格的試劑以及細(xì)心觀察和解釋試驗(yàn)結(jié)果，就可解決明顯的問(wèn)題，對(duì)一些疑難問(wèn)題必須進(jìn)一步研究。 7.1.2 檢查步驟： 7.1.2.1 另從受檢者采取 l 份新鮮血液標(biāo)本這樣可以糾正因污染或搞錯(cuò)樣本造成的不符合。 7.1.2.2 將紅細(xì)胞洗滌數(shù)次，配成 5生理鹽水細(xì)胞懸液，用抗A、抗B、抗Al，抗A十B及抗H 做試驗(yàn)可以得到其它有用的信息。 7.1.2.3 對(duì)受檢紅細(xì)胞作直接抗球蛋白試驗(yàn)，如結(jié)果呈陽(yáng)性，表示紅細(xì)胞已被抗體致敏。 7.1.2.4 用 A1、A2、B、O 紅細(xì)胞及自身紅細(xì)胞檢查受檢血清。如果懷疑是抗I，用 O 型(或 ABO 相合的)臍血紅細(xì)胞檢查。 7.1.2.5 如果試驗(yàn)結(jié)果未見(jiàn)凝集，應(yīng)將細(xì)胞及血清試驗(yàn)至少在室溫和 4放置30min，用顯微鏡檢查核實(shí)。 7.1.2.6 如疑為 A 抗原或 B 抗原減弱，則可將受檢紅細(xì)胞與抗A 或抗B 血清作吸收及放散試驗(yàn)以及受檢者唾液作 A、B、H 血型物質(zhì)測(cè)定。后者只對(duì) 80HAB 分泌型的人有用。 7.1.2.7 如試驗(yàn)結(jié)果紅細(xì)胞呈緡錢(qián)狀排列，加等滲鹽水 l 滴，混和，往往可使緡錢(qián)現(xiàn)象消失。應(yīng)注意不應(yīng)先加鹽水 l 滴于受檢者血清中而后和紅細(xì)胞作試驗(yàn)，以免使血清中抗體被稀釋。 7.1.2.8 如受檢者為 A 型血而疑為有類(lèi) B 抗原時(shí)，可用下列方法進(jìn)行鑒別： 7.1.2.8.1 觀察細(xì)胞與抗A 及抗B 的凝集強(qiáng)度，與抗A 的反應(yīng)要比與抗B 的反應(yīng)強(qiáng)。這種區(qū)別用玻片法作試驗(yàn)更為明顯。 7.1.2.8.2 用受檢者紅細(xì)胞與自身血清作試驗(yàn)，血清中的抗B 不凝集自身紅細(xì)胞上的類(lèi) B 抗原。 7.1.2.8.3 檢查唾液中是否有 A、B 物質(zhì)，如果是分泌型，可檢出 A 物質(zhì)而無(wú)B 物質(zhì)。 7.1.2.8.4 核對(duì)患者的診斷，類(lèi) B 抗原的形成與結(jié)腸癌、直腸癌、革蘭陰性桿菌感染有關(guān)。 7.1.2.9 如發(fā)現(xiàn)多凝集現(xiàn)象，應(yīng)考慮由遺傳產(chǎn)生的 Cad 抗原活性；被細(xì)菌酶激活的T或TK受體；或產(chǎn)生機(jī)制不太明了的 Tn 受體所引起。多凝集紅細(xì)胞具有以下特點(diǎn)： 7.1.2.9.1 能被人和許多家兔的血清凝集。 7.1.2.9.2 能與大多數(shù)成年人的血清凝集，不管有無(wú)相應(yīng)的同種抗體。 7.1.2.9.3 不被臍帶血清凝集。 7.1.2.9.4 通常不與自身的血清凝集。8、臨床意義 用于檢驗(yàn)人的 ABO 血型歸屬。 9、參考文獻(xiàn) 全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程（第 3 版） Rh（D）血型鑒定1、實(shí)驗(yàn)原理 紅細(xì)胞與抗 D 抗體發(fā)生凝集反應(yīng)表明該細(xì)胞有 D 抗原，反之，無(wú)凝集現(xiàn)象表明試驗(yàn)的紅細(xì)胞缺少正常強(qiáng)度的 D 抗原。 2、標(biāo)本收集和制備 無(wú)菌操作收集血液標(biāo)本,收集后盡可能立即進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。如果不能立即實(shí)驗(yàn),應(yīng)將樣品貯存于 2-8。收集在 ACD、CPD、CPD2A 液中的血液標(biāo)本,不超過(guò) 21天仍可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，但是加 EDTA、肝素和凝集的血液標(biāo)本，實(shí)驗(yàn)應(yīng)在 2 天內(nèi)進(jìn)行。 3、儀器、試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品、培養(yǎng)基、以及其他所需物品： RhD(IgM)血型定型試劑（單克隆抗體）：上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司，產(chǎn)品注冊(cè)號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字 S20060018,包裝、規(guī)格：每盒內(nèi)裝有 1 支試劑，10ml/支，儲(chǔ)存要求：存放 28，有效期內(nèi)使用。 4、操作步驟 4.1 玻片法：4.1.1 干凈玻片上加 1 滴抗 D。 4.1.2 再加入1滴4%-5%的被檢紅細(xì)胞懸液。該紅細(xì)胞懸液可以是鹽水懸液，也可以是懸浮于自身血漿或血清中的紅細(xì)胞。 4.1.3 在圓形的玻片區(qū)域中混勻，前后緩慢搖晃玻片。2 分鐘左右肉眼判讀結(jié)果。不要將試劑的干燥與凝集相混淆。 4.1.4 如果是陰性，需要試管法重做一遍實(shí)驗(yàn)。 4.2 鹽水試管法 4.2.1 加一滴抗 D 試劑于預(yù)先標(biāo)記好的試管中 4.2.2 再加 1 滴約 3%5%紅細(xì)胞生理鹽水懸液于試管中?；靹?。 4.2.3 離心，速度和時(shí)間可選擇以下二種之一： 轉(zhuǎn)速 1000rpm，時(shí)間1 分鐘或 3400rpm，時(shí)間 15 秒。 4.2.4 檢查是否溶血（溶血可能是陽(yáng)性結(jié)果，或者是細(xì)菌污染） ，然后輕輕搖晃，使細(xì)胞再懸浮起來(lái)。 4.2.5 觀察凝集狀況，并立即記錄結(jié)果。必要時(shí)可借助顯微鏡。 4.2.6 若是陰性結(jié)果，需在 37孵育 15 分鐘-30 分鐘，然后再離心觀察結(jié)果。結(jié)果若呈陰性需進(jìn)一步確認(rèn)是否是弱 D。 4.3 微量板法（U 型板）4.3.1 加一滴抗 D 試劑于 U 型底的微孔中。 4.3.2 再在微孔中加一滴約 3-5%的被檢紅細(xì)胞懸液，細(xì)胞懸液需事先制備于生理鹽水中。 4.3.3 用機(jī)械的方法將 U 型板混勻。 4.3.4 用板式離心機(jī)離心：2000rpm,時(shí)間 30 秒。不同的離心機(jī)，不同的微量板所需要的離心條件有所區(qū)別，正確實(shí)驗(yàn)的結(jié)果需要適當(dāng)?shù)碾x心，使反應(yīng)板產(chǎn)生清晰的細(xì)胞扣及透亮的上清液。 4.3.5 檢測(cè)溶血情況（溶血可能是陽(yáng)性結(jié)果，或者是細(xì)菌污染）。 4.3.6 結(jié)果判斷：用機(jī)械震蕩 U 型板，再懸浮細(xì)胞，根據(jù)懸浮情況來(lái)判斷凝集。陽(yáng)性反應(yīng)，出現(xiàn)紅細(xì)胞凝集，而陰性反應(yīng)在微孔中會(huì)出現(xiàn)均勻細(xì)胞懸液。 4.3.7 可用肉眼和自動(dòng)化判讀結(jié)果。 4.3.8 如果呈陰性，需要試管法重做一遍實(shí)驗(yàn)。 5、參考值范圍 陽(yáng)性反應(yīng)：出現(xiàn)紅細(xì)胞凝集，為 RhD 陽(yáng)性。 陰性反應(yīng)：紅細(xì)胞不出現(xiàn)凝集，為 RhD 陰性。6、產(chǎn)品性能指標(biāo) 抗 D（IgM）效價(jià)大于等于 1：64（ccDeeO 型） 7、 方法的局限性 本實(shí)驗(yàn)不能凝集CategoryDVI細(xì)胞，對(duì)于陰性和弱陽(yáng)性結(jié)果，按有關(guān)安全輸血規(guī)范進(jìn)行確認(rèn)實(shí)驗(yàn)，必要時(shí)送血型參比實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行確認(rèn)。 8、注意事項(xiàng)8.1 試劑含有 0.1%W/V 疊氮鈉，如果攝入會(huì)中毒。 8.2 試劑如出現(xiàn)混濁則不能使用，若開(kāi)瓶使用時(shí)間較長(zhǎng)后，最好用已知 RhD 陰性、RhD 陽(yáng)性紅細(xì)胞檢查結(jié)果是否符合，以防制品污染、變質(zhì)失效，而造成錯(cuò)誤。及時(shí)貼上開(kāi)封時(shí)間標(biāo)簽，在效期內(nèi)使用。 8.3 由于人紅細(xì)胞的 D 抗原往往表現(xiàn)較弱，故必要時(shí)進(jìn)行顯微鏡鏡檢，以免錯(cuò)判結(jié)果，特別是陰性結(jié)果時(shí)。 8.4 Rh 血型鑒定應(yīng)嚴(yán)格控制溫度與時(shí)間，因 Rh 抗原、抗體及反應(yīng)凝塊比較脆弱，觀察反應(yīng)結(jié)果時(shí)，應(yīng)輕輕側(cè)動(dòng)試管，不可用力振搖。 8.5 對(duì)于結(jié)果可疑的，必須洗滌紅細(xì)胞后重新檢驗(yàn)。 9、 操作性能概要 9.1 假陽(yáng)性反應(yīng)原因分析： 9.1.1 試劑中存在具有其他特異性的抗體（指不完全抗 D 抗體），因此，對(duì)疑難抗原定型時(shí)，建議用不同來(lái)源的抗血清同時(shí)做兩份實(shí)驗(yàn)。因?yàn)槭褂脙煞萏禺愋韵嗤目寡宓玫讲灰恢碌慕Y(jié)果時(shí)，就會(huì)使檢驗(yàn)人員意識(shí)到有進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)的必要。 9.1.2 多凝集紅細(xì)胞與任何人血清會(huì)發(fā)生凝集。9.1.3 當(dāng)用未經(jīng)洗滌的細(xì)胞做實(shí)驗(yàn)時(shí)，試樣中的自身凝集和異常蛋白質(zhì)可能引起假陽(yáng)性結(jié)果。 9.14 試劑瓶可能被細(xì)菌、外來(lái)物質(zhì)或其他抗血清所污染。 9.2 假陰性反應(yīng)原因分析： 9.2.1 搞錯(cuò)抗血清 每次試驗(yàn)時(shí)應(yīng)細(xì)心核對(duì)抗血清瓶子上的標(biāo)簽。 9.2.2 試管中漏加抗血清 在加入細(xì)胞懸液之前，必須檢查試管中有無(wú)抗血清。 9.2.3 某種特定的抗血清不能和其他相應(yīng)抗原的變異型起反應(yīng)。 9.2.4 如某種抗血清含有主要對(duì)抗 Rh 復(fù)合抗原的抗體，則可能與獨(dú)立的基因產(chǎn)物的個(gè)別抗原不發(fā)生反應(yīng)。這在抗 C 血清最為常見(jiàn)，因?yàn)楹芏嗫?C 血清含有反應(yīng)性更強(qiáng)的抗 Ce 成分。 9.2.5 未遵照抗血清使用說(shuō)明書(shū)做試驗(yàn)，如抗血清和細(xì)胞的比例以及溫育的溫度和時(shí)間不正確。 9.2.6 抗血清保存不妥，試劑中的免疫球蛋白變質(zhì)。 10、參考文獻(xiàn)：全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程（第 3 版）抗體篩選和鑒定試驗(yàn)1、 原理 紅細(xì)胞血型抗體分子的物理特性與血清學(xué)的反應(yīng)性之間有著直接的關(guān)系?？煞譃?IgM和 IgG球蛋白抗體 IgM 為天然抗體，在鹽水介質(zhì)中能直接凝集相應(yīng)的紅細(xì)胞，使之發(fā)生肉眼可見(jiàn)的凝集反應(yīng)。 IgG為免疫抗體，常經(jīng)妊娠或輸血等免疫產(chǎn)生。在鹽水介質(zhì)中不能凝集而只能致敏抗原的紅細(xì)胞，且必須通過(guò)特定的方法使致敏紅細(xì)胞發(fā)生凝集。如牛血清白蛋白、酶、抗球蛋白、凝聚胺、凝膠（或玻璃）等方法。 2、 方法 待檢血清需要使用多種方法進(jìn)行鑒定。一般使用鹽水法、酶方法、抗球蛋白法、凝聚胺法或凝膠卡法檢測(cè)抗體。在檢測(cè)到弱抗體時(shí)，可以利用適當(dāng)增加血清的細(xì)胞比例、適當(dāng)增加孵育時(shí)間、加入低離子強(qiáng)度溶液增效劑或 PEG 聚氧乙烯乙二醇等方法增加反應(yīng)的敏感性。不同的抗體在不同的方法和條件下可以有不同的表現(xiàn)。這些特性為判定抗體特異性提供了參考信息。 3、 試劑 3.1、 紅細(xì)胞：選取三個(gè)以上的 O型紅細(xì)胞組成一組篩選細(xì)胞（已知抗原）。 3.2、譜細(xì)胞：選取八個(gè)以上的 O型紅細(xì)胞組成一組譜細(xì)胞（已知抗原）。4、 操作 4.1、 不規(guī)則抗體的篩選：用篩選細(xì)胞（1、2、3 號(hào)） ，同患者血清在三種介質(zhì)中（鹽水、凝聚胺、抗球蛋白）反應(yīng)，需做自身細(xì)胞對(duì)照。 4.2、 不規(guī)則抗體的鑒定：對(duì)篩選陽(yáng)性的患者應(yīng)檢查其抗體的特異性。用一組譜細(xì)胞（1-11）同患者血清在三種介質(zhì)中（鹽水、凝聚胺、抗球蛋白） ，進(jìn)行抗體的篩選，需做自身細(xì)胞對(duì)照。 5、 結(jié)果判斷 陽(yáng)性反應(yīng)：出現(xiàn)紅細(xì)胞凝集。表示紅細(xì)胞上有相應(yīng)抗體存在。 陰性反應(yīng)：出現(xiàn)紅細(xì)胞不凝集。表示紅細(xì)胞上沒(méi)有相應(yīng)抗體存在。 結(jié)合譜細(xì)胞反應(yīng)格局，確定抗體特異性。 6、 臨床意義 6.1、 定血型； 6.2、 測(cè)效價(jià) 6.3、 可能幾率：正確的抗體鑒定，必須有充分的譜細(xì)胞支持。7、 標(biāo)本要求 7.1、按照一般的血液樣本采集步驟采集血液標(biāo)本。該標(biāo)本可于 4或 0以下冷凍保存三周或數(shù)年。一般不需特殊處理。 7.2、 應(yīng)用 EDTA 抗凝標(biāo)本，可反應(yīng)體內(nèi)紅細(xì)胞被補(bǔ)體致敏的真實(shí)情況?？鼓龢?biāo)本也用于直接抗球蛋白試驗(yàn)，并可提供洗脫技術(shù)所需的紅細(xì)胞來(lái)源。 7.3、 需要一管新鮮收集的凝固的血液標(biāo)本用作血清研究。若懷疑冷抗體引起的直接抗球蛋白試驗(yàn)陽(yáng)性，其血液標(biāo)本凝固應(yīng)保持在 37，直到血清被分離出來(lái)為止。 8、 注意事項(xiàng) 8.1、 僅用于體外診斷 8.2、 試劑貯藏溫度 2-8；8.3、 試劑有效期兩個(gè)月。臨床自體輸血標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1、原理或目的： 自體輸血是手術(shù)前或手術(shù)中收集自己的血液，需要時(shí)輸回到自己的身體。這樣既可以保留輸血的優(yōu)點(diǎn)，又可以避免感染和溶血反應(yīng)的危險(xiǎn)，癌癥患者可減少腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的機(jī)率。 2、 自身血液采集有幾種形式 2.1、擇期手術(shù)病人自身儲(chǔ)血：臨床經(jīng)管醫(yī)生根據(jù)擇期手術(shù)患者的身體基本情況( Hb120 g/L Hct34%，心功能級(jí)以上)，預(yù)計(jì)手術(shù)中出血和需輸血量，與輸血科一起制定患者術(shù)前采血計(jì)劃，動(dòng)員患者采集血液儲(chǔ)存，以備手術(shù)中、后輸用。 2.2、急性稀釋性自身輸 血：是在手術(shù)患者麻醉后采出一定量的血液，同時(shí)輸注晶體及膠體溶液，使患者血液稀釋?zhuān)?而維持正常的血容量，患者在血液稀釋的生理狀態(tài)下進(jìn)行手術(shù)，術(shù)中所流失的是稀釋血液， 手術(shù)中、后再回輸自己的血液。 2.3、回收式自身輸血：回收式自身輸血是以機(jī)械吸引裝置將患者手術(shù)中流失的血液(如肝脾破裂、宮外孕大出血、各種大手術(shù)的創(chuàng)面出血等)收集 過(guò)濾，分離清洗、凈化后再回輸給患者。目前國(guó)內(nèi)外有血液回收機(jī)生產(chǎn)銷(xiāo)售，血液回收后在 封閉的管道系統(tǒng)中分離清洗，安全可靠。 3、 操作步驟 3.1、采血程序 3.1.1、采血員應(yīng)核對(duì)患者的姓名、有效證件、住院號(hào)、床號(hào)、血標(biāo)簽等，核對(duì)無(wú)誤后方可采血。 3.2、采血時(shí)應(yīng)選擇上肢肘窩部清晰可見(jiàn)、粗大、充盈飽滿、彈性好、不易滑動(dòng)的靜脈進(jìn)行穿刺。 3. 1.3、在肘窩上 5cm處系好壓脈帶，使靜脈充盈可觸及。 3. 1.4、選擇皮膚無(wú)損傷、炎癥、皮疹及新針眼的區(qū)域?yàn)榇┐滩课唬源┐厅c(diǎn)為中心由內(nèi)向外螺旋式旋轉(zhuǎn)擦拭，用 2%的碘酒消毒皮膚待干，用 75%酒精脫碘，消毒面積不得小于 10X10cm，遵守?zé)o接觸采血原則，執(zhí)行采用無(wú)菌操作技術(shù)進(jìn)行靜脈穿刺。 3. 1.5、去掉護(hù)針帽，采血者右手拇指、示指、中指持采血針柄，針頭斜面向上或稍側(cè)斜，減少皮膚阻力，針與皮膚呈 30-50角刺入皮膚。當(dāng)針頭刺入皮膚后改變角度呈10左右，沿靜脈走行方向平穩(wěn)刺入靜脈，進(jìn)入靜脈后，阻力明顯減少時(shí)再推1cm左右，可見(jiàn)血液流出，此時(shí)保持針頭位置穩(wěn)定，視血流通暢，即可固定針頭位置，用消毒棉球覆蓋針眼，并用膠布固定。 3. 1.6、將血袋搖動(dòng)后放于血袋搖擺器上，囑患者不停的做松握拳動(dòng)作。 3. 1.7、采集過(guò)程中，密切觀察血流情況，血液采集過(guò)程中必須將血液與抗凝劑保存液充分均勻混合，遇有血流不暢時(shí)，應(yīng)及時(shí)處理校正針頭位置，以防中斷采血，當(dāng)不易觀察血流時(shí)，則注意觀察穿刺部位有無(wú)異常，以及血袋重量是否遞增。 3. 1.8、在采集過(guò)程中，采血者在血型標(biāo)簽、體檢表和獻(xiàn)血證上加蓋采血者工號(hào)章、血液采集量章，在每個(gè)血袋上按要求貼上帶編號(hào)的血型標(biāo)簽，并分別將血型標(biāo)簽貼在標(biāo)本管和保存血清標(biāo)本管上。順利采血200ml一般在3分鐘內(nèi)完成，400ml 在 6 分鐘內(nèi)完成。3. 1.9、采血到達(dá)采集量時(shí)，采血者囑患者松拳，用止血鉗在針尾部 2-3cm處夾住血流導(dǎo)管，松開(kāi)止血帶，用無(wú)菌棉球覆蓋穿刺針眼，拔出針頭，再?lài)诨颊哂萌齻€(gè)手指壓住棉球約 5 分鐘以上，采血完畢。 3. 1.10、以無(wú)菌方法留取標(biāo)本液（注：防止空氣進(jìn)入血袋），并使抗凝劑與標(biāo)本管內(nèi)的血液充分混勻，保證標(biāo)本應(yīng)來(lái)源于相對(duì)應(yīng)的血液。 3. 1.11、采血結(jié)束后，再次檢查獻(xiàn)血者身份、血袋、血液標(biāo)本和相關(guān)記錄，確保準(zhǔn)確無(wú)誤。 3. 1.12、對(duì)采不足量的血液，在采血袋、獻(xiàn)血證和體檢表上分別標(biāo)明實(shí)采血量，并通知獻(xiàn)血者。 3. 1.13、如需第二次穿刺時(shí)應(yīng)征求獻(xiàn)血者同意,并更換采血袋和獻(xiàn)血者手臂,方可采血。 3.1.14、采血結(jié)束后，再次檢查獻(xiàn)血者身份、血袋、血液標(biāo)本和相關(guān)記錄。 3. 1.15、應(yīng)采用惟一的條碼標(biāo)簽標(biāo)識(shí)獻(xiàn)血記錄、血袋（含主袋和轉(zhuǎn)移袋） 、標(biāo)本管。應(yīng)對(duì)貼標(biāo)簽過(guò)程控制，確保同一獻(xiàn)血者的血袋、標(biāo)本管、獻(xiàn)血記錄一一對(duì)應(yīng)，貼簽無(wú)誤。3. 1.16、建立血液標(biāo)本留取程序，并嚴(yán)格執(zhí)行。 3.2、血液熱合操作規(guī)程 3.2.1、正確啟動(dòng)熱合機(jī)。調(diào)節(jié)熱合機(jī)的電壓使電壓指針處于正常區(qū)，并根據(jù)血袋和季節(jié)的不同調(diào)節(jié)熱合時(shí)間至合適位置。 3.2.2、檢查血袋原始編碼、血型、血量、管段是否符合標(biāo)準(zhǔn)。 3.2.3、按照血站質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行熱合（以質(zhì)量控制科文件為準(zhǔn)）。3.2.4、血液采集后，熱合封口，并按要求熱合數(shù)段，供復(fù)檢血型、交叉配血和保存血清標(biāo)本用。血袋熱合處不應(yīng)有漏血。若采血管近端（靠近血袋一端）熱合漏血，將此血標(biāo)識(shí)并隔離放置，回站后由包裝科交質(zhì)檢科檢測(cè)。 3.2.5、將血液、管段放置于+2+8的儲(chǔ)血冰箱。 3.2.6、做好保