「苯酚硫酸法測多糖含量【嚴(yán)選內(nèi)容】」.doc

一、硫酸苯酚法測多糖含量1、試劑配制1. 濃硫酸：分析純，95.5% 2. 5%苯酚：取苯酚5 g，置100 ml容量瓶中，加蒸餾水至刻度，搖勻后，置棕色試劑瓶中，冰箱中冷藏儲存?zhèn)溆谩?. 標(biāo)準(zhǔn)葡聚糖（Dextran,瑞典Pharmacia）或分析純葡萄糖。準(zhǔn)確稱取20m g經(jīng)105干燥至恒重的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品于500ml容量瓶中，蒸餾水溶解定容。2、制作標(biāo)準(zhǔn)曲線準(zhǔn)確稱取標(biāo)準(zhǔn)葡聚糖（或葡萄糖）10mg于250ml容量瓶中，加水至刻度，分別吸取0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8及0.9ml，各以蒸餾水補(bǔ)至1.0ml，然后加入5%苯酚1ml及濃硫酸5.0ml,搖勻冷卻，室溫放置20min以后于490nm測光密度，以1.0ml水按同樣顯色操作為空白，橫坐標(biāo)為多糖微克數(shù)，縱坐標(biāo)為光密度值，得標(biāo)準(zhǔn)曲線。123456780標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液（mL）0.20.30.40.50.60.70.80.90蒸餾水（mL）0.80.70.60.50.40.30.20.11.05%苯酚（mL）0.50.50.50.50.50.50.50.50.5濃硫酸（mL）2.52.52.52.52.52.52.52.52.53 注意事項(xiàng)（1） 此法簡單、快速、靈敏、重復(fù)性好，對每種糖僅制作一條標(biāo)準(zhǔn)曲線，顏色持久。（2）制作標(biāo)準(zhǔn)線宜用相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)多糖，如用葡萄糖，應(yīng)以校正系數(shù)0.9校正g數(shù)。 （3）對雜多糖，分析結(jié)果可根據(jù)各單糖的組成比及主要組分單糖的標(biāo)準(zhǔn)曲線的校正系數(shù)加以校正計(jì)算（4） 測定時(shí)根據(jù)光密度值確定取樣的量。光密度值最好在0.10.3之間。比如：小于0.1之下可以考慮取樣品時(shí)取2克，仍取0.2ml樣品液，如大于0.3可以減半取0.1ml的樣品液測定。（5） 正常的反應(yīng)溶液是深棕色。糖越多顏色越深。注意硫酸的純度?？瞻椎念伾苌睿f明你的空白中的苯酚被氧化了深紅是醌（苯酚氧化生成）的顏色顏色過深的話說明你的酚的難度過大，一般是5%但是沒遇到你說的那么嚴(yán)重，不是深紅色的做的好的時(shí)候顏色很淺，顏色深點(diǎn)也有肯能。操作的時(shí)候有幾條你需要注意的，這些對你的檢測結(jié)果影響極大1、苯酚需要重蒸，配制的苯酚溶液需要妥善保存。2、樣品檢測的時(shí)候，向樣品中加了苯酚溶液需要迅速搖勻，加入硫酸基本操作：硫酸沿壁加，最好能旋轉(zhuǎn)比色管，讓硫酸