方法學(xué)驗證方案.doc

1 15 藥業(yè)股份有限公司企業(yè)標(biāo)準(zhǔn) 含量測定方法學(xué)確認 第 1 頁 共 15 頁 含量測定含量測定 方法學(xué)確認方案方法學(xué)確認方案 日期 2016 年 1 月 2 15 藥業(yè)股份有限公司企業(yè)標(biāo)準(zhǔn) 含量測定方法學(xué)確認 第 2 頁 共 15 頁 驗證方案審查與批準(zhǔn)驗證方案審查與批準(zhǔn) 您下面的簽字表明您已審閱此份驗證方案并同意實施 您下面的簽字表明您已審閱此份驗證方案并同意實施 姓姓 名名職職 務(wù)務(wù)簽簽 名名日日 期期 起草人 姓姓 名名職職 務(wù)務(wù)簽簽 名名日日 期期 審核人 審核人 姓姓 名名職職 務(wù)務(wù)簽簽 名名日日 期期 批準(zhǔn)人 3 15 藥業(yè)股份有限公司企業(yè)標(biāo)準(zhǔn) 含量測定方法學(xué)確認 第 3 頁 共 15 頁 目目 錄錄 1 目的 4 2 范圍 4 3 驗證機構(gòu)與職責(zé) 4 4 定義 4 5 參考文件 5 6 風(fēng)險因素分析 5 7 驗證準(zhǔn)備 5 8 檢測方法的描述 5 9 驗證實施 6 10 偏差與變更 8 11 確認結(jié)果評定與結(jié)論 9 12 確認周期 9 13 附錄目錄 9 4 15 藥業(yè)股份有限公司企業(yè)標(biāo)準(zhǔn) 含量測定方法學(xué)確認 第 4 頁 共 15 頁 1 1 目的目的 對苦參膜中的含量測定檢測方法進行確認 確保方法的可行性 以便為有效控制苦參 膜的含量提供依據(jù) 2 2 范圍范圍 本方案適用于本方案適用于 藥業(yè)股份有限公司齊墩果酸片含量測定方法的確認 藥業(yè)股份有限公司齊墩果酸片含量測定方法的確認 3 3 驗證機構(gòu)與職責(zé)驗證機構(gòu)與職責(zé) 3 1驗證小組成員 姓 名所在部門在驗證中擔(dān)任職務(wù)簽名日期 組長 組員 組員 3 2 職責(zé) 3 2 1 驗證小組組長職責(zé) 3 2 1 1保證確認方案及各種檢查表的起草 3 2 1 2保證在執(zhí)行前完成對確認方案及各種檢查表的審核和批準(zhǔn) 3 2 1 3負責(zé)對確認小組成員進行本方案的培訓(xùn) 3 2 1 4保證完全按照確認方案實施 3 2 1 5確保能及時發(fā)現(xiàn)偏差 并按照已經(jīng)達成一致的偏差處理方法對其進行記錄 糾正 調(diào)查和最終確認 3 2 1 6確保確認報告的生成 審核和批準(zhǔn) 3 2 2 QA 職責(zé) 3 2 2 1執(zhí)行前完成對確認方案及各種檢查表的審核 3 2 2 2負責(zé)確認過程的監(jiān)控和檢查 保證確認方案的實施 參與確認結(jié)果評價 3 2 2 3參與確認偏差的調(diào)查 處理 和評估 5 15 藥業(yè)股份有限公司企業(yè)標(biāo)準(zhǔn) 含量測定方法學(xué)確認 第 5 頁 共 15 頁 3 2 2 4確認過程中 如有變更 保證按 變更處理程序 執(zhí)行 3 2 3 其它成員職責(zé) 3 2 3 1執(zhí)行前確認確認方案已批準(zhǔn) 并經(jīng)過培訓(xùn) 3 2 3 2按確認方案實施確認 收集 整理確認數(shù)據(jù) 完成確認記錄和報告 3 2 3 3參與確認偏差的調(diào)查和處理 確認通過偏差修訂和解決方案 3 2 3 4確認確認過程中的變更在實施前已經(jīng)批準(zhǔn) 4 4 定義定義 4 1 線性 指在設(shè)計的范圍內(nèi) 測試結(jié)果與試樣中被測物濃度直接呈正比關(guān)系的程度 4 2 準(zhǔn)確度 指用該方法測定的結(jié)果與真實值或參考值接近的程度 一般用回收率 表示 4 3 重復(fù)性 再規(guī)定范圍內(nèi) 取同一濃度的供試品 用 6 個測定結(jié)果進行評價 4 4 中間精密度 在同一個實驗室 不同時間由不同分析人員或用不同設(shè)備測定結(jié)果之間 的精密度 稱為中間精密度 5 5 參考文件參考文件 5 1 藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范 2010 年修訂版 5 2 藥品生產(chǎn)驗證指南 5 3 中國藥典 2015 年版 二部 5 4 國家藥品監(jiān)督管理局國家藥品標(biāo)準(zhǔn) 5 5 公司相關(guān)文件 5 5 1 苦參膜質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及檢驗規(guī)程 5 5 2 驗證管理 5 5 3 變更控制操作規(guī)程 5 5 4 偏差處理操作程序 5 5 5 糾正措施與預(yù)防措施操作規(guī)程 5 5 6 2016 年度驗證總計劃 6 15 藥業(yè)股份有限公司企業(yè)標(biāo)準(zhǔn) 含量測定方法學(xué)確認 第 6 頁 共 15 頁 6 6 風(fēng)險因素分析風(fēng)險因素分析 風(fēng)險評估將采用失效模式及影響 FMEA 的工具來評估和衡量方法參數(shù)失效后對產(chǎn)品 分析結(jié)果的影響 評估過程將參照公司質(zhì)量風(fēng)險管理的要求 風(fēng)險等級為低 中 高級別 的必須給出合理的建議措施 之后再次對建議的風(fēng)險控制措施進行評估以確保風(fēng)險的降低 分析 評估結(jié)果見附錄 1 風(fēng)險評估表 7 7 驗證準(zhǔn)備驗證準(zhǔn)備 7 1 確保所有方法 SOP 是最新版本且經(jīng)過批準(zhǔn) 將檢查結(jié)果記錄在附錄 2 文件檢查 內(nèi) 7 2 確認參與驗證的人員都經(jīng)過此方案和相關(guān) SOP 的培訓(xùn) 和識別所有簽字和草簽本方 案任何數(shù)據(jù)表的人員 將檢查結(jié)果記錄在附錄 3 培訓(xùn)檢查和簽名確認 內(nèi) 7 3 確認驗證過程中用到設(shè)備 計量儀器都是經(jīng)過校驗 并在有效期內(nèi) 將檢查結(jié)果記錄 在附錄 4 確認用儀器 儀表校準(zhǔn)檢查 內(nèi) 8 8 檢測方法的描述檢測方法的描述 8 18 1 藥品與試劑的準(zhǔn)備藥品與試劑的準(zhǔn)備 對照品 中國藥品生物制品檢定院提供 為 藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn) 硅鎢酸試液 碘化汞鉀試液 苦味酸 氯仿 甲醇 濃氨 稀碘化鉍鉀試液 鹽酸液 0 2mol L 氫氧化鈉液 1mol L 氫氧化鈉滴定液 0 1mol L 硫酸滴定液 0 05mol L 甲基紅示液 磷酸 乙腈 無水乙醇 8 28 2 儀器分析條件儀器分析條件 電子天平 FA2014 超聲池 KQ 300DE 電熱恒溫水浴鍋 DK 98 1 高效液 相 LC 10ATVP 8 38 3 檢測方法檢測方法 顯色鑒別 色譜鑒別 酸堿滴定法 高效液相色譜法 8 48 4 檢測操作檢測操作 8 4 18 4 1 鑒別鑒別 7 15 藥業(yè)股份有限公司企業(yè)標(biāo)準(zhǔn) 含量測定方法學(xué)確認 第 7 頁 共 15 頁 8 4 1 18 4 1 1 顯色鑒別顯色鑒別 樣品連續(xù)三批 A B 兩位組員各取樣品 1 號 樣品 2 號約 0 15g 分 置三支試管中 加水 2ml 使溶解 分別加硅鎢酸試液 碘化汞鉀試液及苦味酸試液 1 2 滴 分別生成白色 淡黃色及黃色沉淀 8 4 1 28 4 1 2 薄層鑒別 薄層鑒別 樣品連續(xù)三批 A B 兩位組員分別取本品 0 1g 加甲醇 10ml 使溶解 超聲提取 15 分鐘 靜置 取上清液作為供試品溶液 另取苦參堿及氧化苦參堿對照品適量 加甲醇制成每 1ml 中各含 5mg 的溶液作為對照品溶液 照薄層色譜法 附錄 B 試驗 取上述三種溶液各 2 3 l 分別點于同一以 0 5 羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠 G 薄層 板上 以三氯甲烷 甲醇 濃氨試液 5 0 6 0 3 為展開劑 展開 取出 晾干 噴以稀碘 化鉍鉀試液 供試品色譜中 在與對照品色譜相應(yīng)的位置上 顯相同顏色的兩個斑點 8 4 8 4 2 32 3 酸堿滴定法 酸堿滴定法 連續(xù)三批樣品 兩位組員分別取樣品 1 樣品 2 各 10 片 剪碎 取一片重兩份 各精密稱定 加氯仿 25ml 回流 3 次 每次 1 小時 合并提取液 置水浴上 揮干 殘渣用 0 2mol L 鹽酸液 5ml 使溶解 濾過 濾液置入分液漏斗中 用水 10ml 分次 洗滌容器 洗液并入分液漏斗中 加氯化鈉約 6g 與 1mol L 氫氧化鈉液 5ml 搖勻 用三氯 甲烷振搖提取 5 次 25 20 10 10 10ml 每次三氯甲烷提取液均用同一飽和氯化鈉液 5ml 振搖洗滌 再依次分別通過同一裝有無水硫酸鈉 1g 的脫脂棉層濾過 合并三氯甲烷液 精密加硫酸滴定液 0 05mol L 10ml 及新沸過的冷水 20ml 振搖提取后 分取酸層 氯 仿層再用新沸過的冷水洗滌 3 次 每次 10ml 合并酸液與洗滌液 置水浴上加熱 除去殘 留的三氯甲烷 放冷至室溫 加甲基紅指示液 2 滴 用氫氧化鈉滴定液 0 1mol L 滴定 每 1ml 的硫酸液 0 05mol L 相當(dāng)于 26 44mg 的 C15H24N2O2 本品每片含總生物堿以 80 0 110 0 相對偏差 dr 不得超過 0 6 計算公式 0 0 4 3 2 2 1 1 0 0 100 100 M mT C C V C C V C C1 硫酸滴定液的實際濃度 mol L C2 硫酸滴定液的理論濃度 mol L C3 氫氧化鈉滴定液的實際濃度 mol L C4 氫氧化鈉滴定液的理論濃度 mol L 8 15 藥業(yè)股份有限公司企業(yè)標(biāo)準(zhǔn) 含量測定方法學(xué)確認 第 8 頁 共 15 頁 V1 加入硫酸滴定液的體積 ml V2 消耗氫氧化鈉滴定液的體積 ml T 標(biāo)示量 26 44mg 該批 20 片苦參膜的平均重量 g m M 使用苦參膜的量 g 8 4 28 4 2 4 4 高效液相色譜法高效液相色譜法 8 4 2 4 1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 用氨基鍵合硅膠為填充劑 以乙腈 無水乙醇 3 磷 酸溶液 85 7 5 7 5 為流動相 柱溫 30 檢測波長為 220nm 流速 1 0ml min 理論 塔板數(shù)按氧化苦參堿峰計算 應(yīng)不低于 5000 6 2 2 對照品溶液的制備 取 對照品適量 精密稱定 置同一量瓶中 加乙腈 無 水乙醇 85 15 制成每 1ml 含苦參堿 0 32mg 和氧化苦參堿 35 g 的溶液 搖勻 即得 8 4 2 2 供試品溶液的制備 取已剪碎的樣品約 0 6g 精密稱定 置具塞錐形瓶中 加濃 氨水 0 5ml 精密加入三氯甲烷 25ml 稱定重量 超聲處理 30 分鐘 放冷 加三氯甲烷補 足損失重量 濾過 精密吸取續(xù)濾液 5ml 水浴上揮干 用乙腈 無水乙醇 85 15 定溶 至 25ml 量瓶中 搖勻 用 0 45 m 濾膜濾過 即得 6 2 4 測定法 分別精密吸取對照品溶液 5 l 與供試品溶液 5 10 l 注入高效液相 色譜儀 測定 即得 本品每片含 不得少于 22 0 mg 相對標(biāo)準(zhǔn)偏差不得過 2 計算公式 2 21AA A 樣品平均片重稀釋倍數(shù) 樣品稱量對照品平均峰面積 對照品濃度樣品峰面積 gmgC 對照品進兩針的平均峰面積 A 對照品第一針峰面積 1A 對照品第二針峰面積 2A 9 15 藥業(yè)股份有限公司企業(yè)標(biāo)準(zhǔn) 含量測定方法學(xué)確認 第 9 頁 共 15 頁 9 9 驗證實施驗證實施 9 19 1 線性實驗線性實驗 目的 在設(shè)計的范圍內(nèi) 測試結(jié)果與試樣中被測物濃度直接呈正比關(guān)系的程度應(yīng)符合規(guī)定 9 1 19 1 1 滴定法滴定法 9 1 1 1 實驗過程 同一人同時取同一批樣品 各 10 片 剪碎 取一片重樣品 1 樣品 2 樣品 3 樣品 4 樣 品 5 各精密稱定 加氯仿 25ml 回流 3 次 每次 1 小時 合并提取液 置水浴上揮干 殘 渣用 0 2mol L 鹽酸液 5ml 使溶解 濾過 濾液置入分液漏斗中 用水 10ml 分次洗滌容器 洗液并入分液漏斗中 加氯化鈉約 6g 與 1mol L 氫氧化鈉液 5ml 搖勻 用三氯甲烷振搖提 取 5 次 25 20 10 10 10ml 每次三氯甲烷提取液均用同一飽和氯化鈉液 5ml 振搖洗 滌 再依次分別通過同一裝有無水硫酸鈉 1g 的脫脂棉層濾過 合并三氯甲烷液 精密加硫 酸滴定液 0 05mol L 10ml 及新沸過的冷水 20ml 振搖提取后 分取酸層 氯仿層再用 新沸過的冷水洗滌 3 次 每次 10ml 合并酸液與洗滌液 置水浴上加熱 除去殘留的三氯 甲烷 放冷至室溫 加甲基紅指示液 2 滴 用氫氧化鈉滴定液 0 1mol L 滴定 每 1ml 的硫酸液 0 05mol L 相當(dāng)于 26 44mg 的 C15H24N2O2 本品每片含總生物堿以氧化苦參堿 C15H24N2O 計 應(yīng)為標(biāo)示量的 80 0 110 0 相對 偏差 dr 不得超過 0 6 9 1 1 2 以樣品滴定過程中消耗氫氧化鈉的體積為橫坐標(biāo) 以樣品含量為縱坐標(biāo) 繪制 回歸方程 9 1 1 3 可接受標(biāo)準(zhǔn) 相關(guān)系數(shù) dr 0 6 9 1 1 4 記錄 將實驗結(jié)果記錄在 滴定含量測定線性實驗記錄 內(nèi) 見附錄 9 1 29 1 2 高效液相高效液相 9 1 2 1 對照品配制 取 一瓶精密稱取置 25ml 容量瓶中 對照品兩瓶精密稱取置 50ml 量瓶中 加乙腈 無水乙醇 85 15 溶解至刻度 分別精密量取氧化苦參堿 0 5ml 苦參堿 5ml 氧化苦參堿 1ml 苦參堿 10ml 氧化苦參堿 2ml 苦參堿 20ml 分別置 25ml 容量瓶中 加乙腈 無水乙醇 85 15 至刻度 既得 10 15 藥業(yè)股份有限公司企業(yè)標(biāo)準(zhǔn) 含量測定方法學(xué)確認 第 10 頁 共 15 頁 9 1 2 2 樣品制備 取已剪碎的樣品約 0 6g 精密稱定 置具塞錐形瓶中 加濃氨水 0 5ml 精密加入三氯甲烷 25ml 稱定重量 超聲處理 30 分鐘 放冷 加三氯甲烷補足損 失重量 濾過 精密吸取續(xù)濾液 5ml 水浴上揮干 用乙腈 無水乙醇 85 15 定溶至 25ml 量瓶中 搖勻 用 0 45 m 濾膜濾過 即得 9 1 2 3 測定法 分別精密吸取對照品溶液 5 l 與供試品溶液 5 10 l 注入高效液相 色譜儀 測定 即得 本品每片 不得少于 22 0 mg 9 1 2 4 以對照品的吸取量 峰面積 為橫坐標(biāo) 以樣品含量 峰面積 為縱坐標(biāo) 繪 制回歸方程 9 1 2 5 可接受標(biāo)準(zhǔn) 相關(guān)系數(shù) RSD 2 9 1 2 6 記錄 將實驗結(jié)果記錄在 高效含量測定線性實驗記錄 內(nèi) 見附錄 5 9 29 2 重復(fù)性實驗重復(fù)性實驗 目的 在規(guī)定范圍內(nèi) 取同一批次的樣品品 用 5 個測定結(jié)果進行評價 得到的結(jié)果 RSD 應(yīng)符合要求 9 2 19 2 1 滴定法 滴定法 9 2 1 1 實驗過程 取同一批樣品 10 片 剪碎 取一片重樣品 1 樣品 2 樣品 3 樣品 4 樣品 5 各精密稱 定 加氯仿 25ml 回流 3 次 每次 1 小時 合并提取液 置水浴上揮干 殘渣用 0 2mol L 鹽酸液 5ml 使溶解 濾過 濾液置入分液漏斗中 用水 10ml 分次洗滌容器 洗液并入分液 漏斗中 加氯化鈉約 6g 與 1mol L 氫氧化鈉液 5ml 搖勻 用三氯甲烷振搖提取 5 次 25 20 10 10 10ml 每次三氯甲烷提取液均用同一飽和氯化鈉液 5ml 振搖洗滌 再 依次分別通過同一裝有無水硫酸鈉 1g 的脫脂棉層濾過 合并三氯甲烷液 精密加硫酸滴定 液 0 05mol L 10ml 及新沸過的冷水 20ml 振搖提取后 分取酸層 氯仿層再用新沸過 的冷水洗滌 3 次 每次 10ml 合并酸液與洗滌液 置水浴上加熱 除去殘留的三氯甲烷 放冷至室溫 加甲基紅指示液 2 滴 用氫氧化鈉滴定液 0 1mol L 滴定 每 1ml 的硫酸 液 0 05mol L 相當(dāng)于 26 44mg 的 C15H24N2O2 本品每片含總生物堿以 80 0 110 0 相對偏差 dr 不得超過 0 6 9 1 1 2 可接受標(biāo)準(zhǔn) 相關(guān)系數(shù) dr 0 6 11 15 藥業(yè)股份有限公司企業(yè)標(biāo)準(zhǔn) 含量測定方法學(xué)確認 第 11 頁 共 15 頁 9 1 1 3 記錄 將實驗結(jié)果記錄在 滴定含量測定重復(fù)性實驗記錄 內(nèi) 見附錄 5 9 2 29 2 2 高效高效 9 2 2 實驗過程 9 1 2 1 對照品配制 對照品溶液的制備 取苦參堿 氧化苦參堿對照品母液適量 置同 一量瓶中 加乙腈 無水乙醇 85 15 制成每 1ml 含苦參堿 0 32mg 和氧化苦參堿 35 g 的 溶液 搖勻 即得 9 1 2 2 樣品制備 取同一批樣品 10 片 剪碎并分別取樣品 1 樣品 2 樣品 3 樣品 4 樣品 5 約 0 6g 精密稱定 置具塞錐形瓶中 加濃氨水 0 5ml 精密加入三氯甲烷 25ml 稱定重量 超聲處理 30 分鐘 放冷 加三氯甲烷補足損失重量 濾過 精密吸取續(xù)濾液 5ml 水浴上揮干 用乙腈 無水乙醇 85 15 定溶至 25ml 量瓶中 搖勻 用 0 45 m 濾 膜濾過 即得 9 1 2 3 測定法 分別精密吸取對照品溶液 5 l 與供試品溶液 5 10 l 注入高效液相 色譜儀 測定 即得 本品每片含苦參總堿以苦參堿 C15H24N2O 與氧化苦參堿 C15H24N2O2 的總量計 不得少于 22 0 mg 9 1 2 4 可接受標(biāo)準(zhǔn) 相關(guān)系數(shù) RSD 2 9 1 2 5 記錄 將實驗結(jié)果記錄在 高效含量測定重復(fù)性實驗記錄 內(nèi) 見附錄 5 9 39 3 中間精密度實驗中間精密度實驗 9 3 1 目的 含量測定中 一個實驗室內(nèi)不同的人 在不同時間 通常是不同天 測定得 到的結(jié)果 RSD 應(yīng)符合要求 9 3 19 3 1 滴定含量滴定含量 9 3 1 1 實驗過程 9 3 1 2 兩名實驗人員分別在不同時間 通常是不同天 各取同一批號苦參膜 10 片 精密 稱定 剪碎 各精密稱取本品 3 份 每份約 0 6g 加氯仿 25ml 回流 3 次 每次 1 小時 合并提取液 置水浴上揮干 殘渣用 0 2mol L 鹽酸液 5ml 使溶解 濾過 濾液置入分液漏 斗中 用水 10ml 分次洗滌容器 洗液并入分液漏斗中 加氯化鈉約 6g 與 1mol L 氫氧化鈉 液 5ml 搖勻 用三氯甲烷振搖提取 5 次 25 20 10 10 10ml 每次三氯甲烷提取液 均用同一飽和氯化鈉液 5ml 振搖洗滌 再依次分別通過同一裝有無水硫酸鈉 1g 的脫脂棉層 12 15 藥業(yè)股份有限公司企業(yè)標(biāo)準(zhǔn) 含量測定方法學(xué)確認 第 12 頁 共 15 頁 濾過 合并三氯甲烷液 精密加硫酸滴定液 0 05mol L 10ml 及新沸過的冷水 20ml 振 搖提取后 分取酸層 氯仿層再用新沸過的冷水洗滌 3 次 每次 10ml 合并酸液與洗滌液 置水浴上加熱 除去殘留的三氯甲烷 放冷至室溫 加甲基紅指示液 2 滴 用氫氧化鈉滴 定液 0 1mol L 滴定 每 1ml 的硫酸液 0 05mol L 相當(dāng)于 26 44mg 的 C15H24N2O2 9 3 1 3 可接受標(biāo)準(zhǔn) 同一人實驗結(jié)果 RSD 2 0 兩人間的 RSD 2 0 9 3 1 4 記錄 將實驗結(jié)果記錄在 滴定含量測定中間精密實驗記錄 內(nèi) 見附錄 5 9 3 29 3 2 高效高效 9 3 2 1 兩名實驗人員用同一批對照品分別在不同時間 通常是不同天 各取同一批號苦 參膜 10 片 精密稱定 剪碎 各精密稱取本品 3 份 每份約 0 6g 置具塞錐形瓶中 加濃氨水 0 5ml 精密加入三氯甲烷 25ml 稱定重量 超聲處理 30 分鐘 放冷 加三氯甲 烷補足損失重量 濾過 精密吸取續(xù)濾液 5ml 水浴上揮干 用乙腈 無水乙醇 85 15 定溶至 25ml 量瓶中 搖勻 用 0 45 m 濾膜濾過 即得 9 3 2 2 測定法 分別精密吸取對照品溶液 5 l 與供試品溶液 5 10 l 注入高效液相 色譜儀 測定 即得 本品每片含苦參總堿以苦參堿 C15H24N2O 與氧化苦參堿 C15H24N2O2 的總量計 不得少于 22 0 mg 9 3 2 3 可接受標(biāo)準(zhǔn) 同一人實驗結(jié)果 RSD 2 0 兩人間的 RSD 2 0 9 3 2 4 記錄 將實驗結(jié)果記錄在 高效含量測定中間精密度實驗記錄 內(nèi) 見附 5 9 49 4 含量測定準(zhǔn)確度實驗含量測定準(zhǔn)確度實驗 9 4 1 目的 含量測定中 用已確定的方法測定的結(jié)果與真實值或參考值接近的程度 一 般用回收率 表示 得到的結(jié)果 RSD 應(yīng)符合要求 9 4 2 實驗過程 精密稱取同一已知含量的供試品 9 份 每份約 0 6g 分別置于圓底燒瓶中 分成三組 分別向第一組的每一份供試品中加入濃度為 35 g ml 的氧化苦參堿對照品 2 ml 向第 二組的每一份供試品中加入濃度為 35 g ml 的氧化苦參堿對照品 5ml 向第三組的每 一份供試品中加入濃度為 35 g ml 的氧化苦參堿對照品 7 ml 加氯仿 25ml 回流 3 次 每次 1 小時 合并提取液 置水浴上揮干 殘渣用 0 2mol L 鹽酸液 5ml 使溶解 濾過 濾 13 15 藥業(yè)股份有限公司企業(yè)標(biāo)準(zhǔn) 含量測定方法學(xué)確認 第 13 頁 共 15 頁 液置入分液漏斗中 用水 10ml 分次洗滌容器 洗液并入分液漏斗中 加氯化鈉約 6g 與 1mol L 氫氧化鈉液 5ml 搖勻 用三氯甲烷振搖提取 5 次 25 20 10 10 10ml 每次 三氯甲烷提取液均用同一飽和氯化鈉液 5ml 振搖洗滌 再依次分別通過同一裝有無水硫酸 鈉 1g 的脫脂棉層濾過 合并三氯甲烷液 精密加硫酸滴定液 0 05mol L 10ml 及新沸過 的冷水 20ml 振搖提取后 分取酸層 氯仿層再用新沸過的冷水洗滌 3 次 每次 10ml 合 并酸液與洗滌液 置水浴上加熱 除去殘留的三氯甲烷 放冷至室溫 加甲基紅指示液 2 滴 用氫氧化鈉滴定液 0 1mol L 滴定 每 1ml 的硫酸液 0 05mol L 相當(dāng)于 26 44mg 的 C15H24N2O2 9 4 2 1 測定法 將測得的總含量減去供試品中已知含量 計算每組的回收率 9 4 2 2 可接受標(biāo)準(zhǔn) 實驗結(jié)果回收率 98 0 102 0 9 4 2 3 記錄 將實驗結(jié)果記錄在 滴定含量測定準(zhǔn)確度實驗記錄 內(nèi) 見附錄 8 9 4 39 4 3 高效高效 9 4 3 1 對照品制備 對照品溶液的制備 取苦參堿 氧化苦參堿對照品母液適量 置 同一量瓶中 加乙腈 無水乙醇 85 15 制成每 1ml 含苦參堿 0 32mg 和 35 g 的溶液 搖 勻 即得 9 4 3 2 供試品制備 精密稱取同一已知含量的供試品 9 份 每份約 0 6g 置具塞錐形瓶中 加濃氨水 0 5ml 精密加入三氯甲烷 25ml 稱定重量 超聲處理 30 分鐘 放冷 加三氯甲烷補足損 失重量 濾過 精密吸取續(xù)濾液 5ml 水浴上揮干 用乙腈 無水乙醇 85 15 定溶至 25ml 量瓶中 搖勻 用 0 45 m 濾膜濾過 即得 分成三組 每