蘇教版生物選修一 1.1 微生物的分離和培養(yǎng) 課件（46張）.pptxVIP

第1課時微生物的分離和培養(yǎng) 第一章無菌操作技術(shù)實踐 學(xué)習(xí)導(dǎo)航1 簡述高壓蒸汽滅菌鍋的使用方法及注意事項 2 掌握制備細(xì)菌培養(yǎng)基的方法 3 學(xué)會利用無菌操作技術(shù)接種與培養(yǎng)大腸桿菌 重難點擊1 培養(yǎng)基的配制方法及常見種類 2 大腸桿菌的接種與分離培養(yǎng) 一 微生物分離和培養(yǎng)的基本理論 二 大腸桿菌的接種與分離培養(yǎng) 內(nèi)容索引 當(dāng)堂檢測 一 微生物分離和培養(yǎng)的基本理論 基礎(chǔ)梳理 1 無菌操作技術(shù)實驗室常利用高溫處理達(dá)到滅菌效果 包括采用或等方法 1 干熱滅菌方法是將擬滅菌的物品放在內(nèi) 在160 170 溫度下加熱1 2h以達(dá)到滅菌的目的 2 濕熱滅菌方法常采用進(jìn)行 如手提式高壓蒸汽滅菌鍋就是實驗室常用的滅菌儀器之一 高壓蒸汽滅菌鍋的使用包括加水 裝鍋 出鍋等步驟 干熱滅菌 濕熱滅菌 干熱滅菌箱 高壓蒸汽滅菌鍋 加熱排氣 保溫保壓 2 配制培養(yǎng)基 1 培養(yǎng)基概念 為人工培養(yǎng)微生物而制備的適合微生物 或積累代謝產(chǎn)物的 2 培養(yǎng)基類型 天然培養(yǎng)基 采用動植物組織或微生物細(xì)胞以及它們的提取物或粗消化物配制而成 如牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基 優(yōu)點 營養(yǎng)豐富 配制簡便 缺點 難以控制 實驗結(jié)果的重復(fù)性較差 生長 繁殖 營養(yǎng)基質(zhì) 取材便利 營養(yǎng)成分 合成培養(yǎng)基 由的分析純等級別的高純度化學(xué)試劑加蒸餾水配制而成 如葡萄糖銨鹽培養(yǎng)基 優(yōu)點 化學(xué)成分及其含量 實驗的可重復(fù)性好 缺點 配制繁瑣 成本較高 3 培養(yǎng)基成分 一般都含有 提供碳元素的物質(zhì) 提供氮元素的物質(zhì) 和無機鹽等最基本的物質(zhì) 4 培養(yǎng)基的配制原則 在配制培養(yǎng)基時 根據(jù)的不同需要 有時還要加入維生素等特殊的營養(yǎng)物質(zhì) 并要調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的使之滿足微生物生長的需要 準(zhǔn)確稱量 明確 水 碳源 氮源 擬培養(yǎng)的微生物 ph 3 接種微生物 1 接種的概念 在條件下將微生物接入的操作過程 2 常用的接種工具 接種環(huán)等 3 接種方法 用進(jìn)行穿刺接種 用接種環(huán)進(jìn)行斜面接種或在固體培養(yǎng)基平板上進(jìn)行劃線接種 用進(jìn)行涂布平板接種等 無菌 培養(yǎng)基 玻璃涂布器 接種針 接種針 玻璃涂布器 問題探究 1 無菌操作 與人們的生活休戚相關(guān) 無時無處不在 在日常生活 生產(chǎn)實踐 自身健康防護(hù)中 有哪些 無菌操作 的例子 答案 答案日常生活 生產(chǎn)實踐 自身健康防護(hù)中 無菌操作 的例子分別有 1 被褥 鞋襪要常曬 肉制品儲存時用鹽腌等 2 家畜閹割后 要在其傷口處涂抹一些酒精或白酒 初冬楊樹樹干涂刷生石灰水等 3 打針時 注射部位要用酒精棉球擦洗 一般要在其傷口處涂抹一些碘酒 2 實驗室常利用高溫處理達(dá)到滅菌效果 包括采用干熱滅菌或濕熱滅菌等方法 以下圖高壓蒸汽滅菌鍋的使用為例 探究無菌技術(shù)的方法 1 高壓蒸汽滅菌的使用原理是什么 答案使用原理 將待滅菌物品放在盛有適量水的高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi) 把鍋內(nèi)的水加熱煮沸 并把其中原有的冷空氣徹底驅(qū)盡后將鍋密閉 再繼續(xù)加熱就會使鍋內(nèi)的蒸汽壓逐漸上升 從而溫度也隨之上升到100 以上 2 簡述手提式高壓蒸汽滅菌鍋的使用步驟 答案加水 裝鍋 加熱排氣 保溫保壓 出鍋等 答案 3 消毒和滅菌的原理是什么 消毒和滅菌都能殺死所有的微生物嗎 是否適用于所有的生物和物品 答案 都是使微生物的蛋白質(zhì)變性 借此殺死微生物 滅菌可殺死處理材料中的全部微生物 包括芽孢和孢子 而消毒僅能殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物 一般不包括芽孢和孢子 不是 無菌技術(shù)既要考慮效果 又要考慮操作對象的承受能力 例如 活體生物材料 操作者的雙手等只能消毒 而不能滅菌 4 無菌技術(shù)除了用來防止實驗室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外 還有什么目的 答案還能有效避免污染環(huán)境以及操作者自身被微生物感染 答案 3 微生物的培養(yǎng)離不開培養(yǎng)基 根據(jù)下面某微生物培養(yǎng)基的配方回答下列問題 1 該培養(yǎng)基的碳源 氮源分別是什么 答案碳源 c6h12o6 氮源 nano3 2 依據(jù)物理性質(zhì)用途劃分 該培養(yǎng)基屬于什么培養(yǎng)基 答案依據(jù)物理性質(zhì)劃分 該培養(yǎng)基屬于液體培養(yǎng)基 依據(jù)用途劃分 則屬于選擇培養(yǎng)基 根據(jù)培養(yǎng)基的原料 所培養(yǎng)微生物的同化作用的類型是異養(yǎng)型 培養(yǎng)的微生物可能是酵母菌或霉菌 3 在固體培養(yǎng)基中加入的瓊脂能為微生物提供營養(yǎng)嗎 為什么 答案不能 微生物不能分解瓊脂 4 普通培養(yǎng)基能培養(yǎng)病毒嗎 為什么 答案不能 因為病毒只能進(jìn)行活細(xì)胞寄生生活 答案 1 消毒與滅菌的區(qū)別 2 培養(yǎng)基的成分及功能 拓展應(yīng)用 1 高溫滅菌的原理是a 每種微生物生長的最適溫度是一定的b 微生物對于高溫環(huán)境不適應(yīng)c 高溫破壞了微生物細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì) 核酸 影響其生命活動d 高溫降低了環(huán)境中氧的濃度 解析高溫的致死作用主要是使微生物的蛋白質(zhì)和核酸等重要生物大分子物質(zhì)發(fā)生不可逆轉(zhuǎn)的變性 答案 解析 解析根據(jù)培養(yǎng)基的物理性質(zhì) 可分為液體培養(yǎng)基 半固體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基 在液體培養(yǎng)基中加入不同量的凝固劑如瓊脂可形成半固體或固體培養(yǎng)基 除水以外的無機物如nh4hco3 既可以是碳源 也可以是氮源 不僅僅提供無機鹽 無機氮源有時也能提供能量 如nh3可以為硝化細(xì)菌提供能量 2 下列關(guān)于培養(yǎng)基的說法正確的是a 培養(yǎng)基是為微生物的生長繁殖提供營養(yǎng)的基質(zhì)b 培養(yǎng)基只有兩類 液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基c 除水以外的無機物只能提供無機鹽d 無機氮源不可能提供能量 答案 解析 培養(yǎng)基的種類 二 大腸桿菌的接種與分離培養(yǎng) 基礎(chǔ)梳理 1 配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基 調(diào)節(jié)ph 滅菌 2 斜面接種和培養(yǎng)大腸桿菌斜面接種大腸桿菌的主要目的有 和保存純凈菌種等 具體操作步驟 菌種轉(zhuǎn)移 擴大培養(yǎng) 接種環(huán)滅菌 劃線接種 保存菌種 3 平板劃線分離和培養(yǎng)大腸桿菌在實驗室中 平板常常被用來細(xì)菌等微生物 1 牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的平板制作配制好的培養(yǎng)基裝瓶 倒平板操作 a 打開瓶塞 b c 倒培養(yǎng)基 d 2 平板劃線分離與培養(yǎng)大腸桿菌 平板劃線法的含義 用帶有微生物的在平板培養(yǎng)基表面通過分區(qū)劃線而純化分離微生物的一種方法 注意事項 接種和劃線操作時需要在附近進(jìn)行 培養(yǎng) 分離 滅菌 灼燒瓶口 滅菌 倒置平板 接種環(huán) 酒精燈火焰 問題探究 1 利用培養(yǎng)基培養(yǎng)微生物時 首先要把微生物接種到培養(yǎng)基上 以牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配制為例 完成下列有關(guān)問題 1 以下為細(xì)菌培養(yǎng)基的配制的流程 若將分裝步驟與調(diào)節(jié)ph步驟顛倒過來是否可行 答案 答案不行 若分裝后再調(diào)節(jié)ph 會使培養(yǎng)基中ph調(diào)節(jié)不均勻 還可能將培養(yǎng)基弄到試管口 易被污染 2 從防止雜菌污染的角度思考 平板冷凝后將平板倒置的原因是什么 答案平板冷凝后 皿蓋上會凝結(jié)水珠 凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高 將平板倒置 既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā) 又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基造成污染 答案 2 斜面接種和培養(yǎng)大腸桿菌 1 下圖接種方法分別是什么 答案 答案圖1是穿刺接種 圖2是斜面接種 圖3是平板劃線接種 2 下表是關(guān)于接種操作步驟及其目的或分析說明 請完善下表 將接種環(huán)滅菌 避免污染菌種 避免雜菌污染菌種 灼燒滅菌 防止試管口菌體污染培養(yǎng)基 使接種環(huán)冷卻 避免殺死菌種 防止菌種沾于管壁 防止菌種被殺死 防止雜菌污染 培養(yǎng)細(xì)菌 觀察接種和培養(yǎng)的結(jié)果 24h 3 平板劃線分離和培養(yǎng)大腸桿菌在實驗室中 平板常常被用來培養(yǎng) 分離細(xì)菌等微生物 思考回答下列相關(guān)問題 1 平板劃線法接種菌種時 哪些操作可防止雜菌污染 答案 接種前將接種環(huán)放在酒精燈火焰上灼燒 劃完一個區(qū)域后 將接種環(huán)灼燒 冷卻后再劃下一區(qū)域 接種環(huán)沾取菌液時 要將試管口 棉塞等通過火焰 劃線時將培養(yǎng)皿打開一條縫隙 將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi) 答案 2 在灼燒接種環(huán)之后 為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線 答案避免接種環(huán)溫度太高 殺死菌種 3 為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán) 答案操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物 每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后 接種環(huán)上殘留的菌種 使下一次劃線時 接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端 從而通過劃線次數(shù)的增加 使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少 是為了保證菌落是由單一的細(xì)菌繁殖而成 答案 4 在劃線操作結(jié)束時 仍然需要灼燒接種環(huán)嗎 為什么 答案需要 劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán) 能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種 避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者 5 在做第二次劃線以及其后的操作時 為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線 答案劃線后末端含有的細(xì)菌數(shù)目較少 每次從上一次的末端開始劃線能夠使細(xì)菌的數(shù)目隨劃線次數(shù)的增加而逐漸減少 最終分散成單個的細(xì)菌 6 為何最后一次劃線不能與第一次劃線相連 答案最后一次劃線已經(jīng)將細(xì)菌稀釋成單個的細(xì)胞 如果與第一次劃線相連則增加了細(xì)菌的數(shù)目 達(dá)不到純化的效果 答案 拓展應(yīng)用 3 關(guān)于制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的敘述中 不正確的是a 配制固體培養(yǎng)基時一般要加適量的瓊脂b 分裝到試管中的液體培養(yǎng)基的高度約為試管高度的1 2c 待培養(yǎng)基冷卻至50 左右時進(jìn)行擱置斜面d 擱置斜面時 斜面長度不超過試管總長的1 2 答案 解析 解析在配制固體培養(yǎng)基時 瓊脂是最常用的凝固劑 a正確 分裝到試管中的液體培養(yǎng)基的高度約為試管長度的1 5 b錯誤 待培養(yǎng)基冷卻至50 左右時進(jìn)行擱置斜面 以防培養(yǎng)基因溫度過高而燙手 也不能過低 防止凝固后不易倒平板 c正確 擱置斜面時 將試管口部枕在高約1cm的木條或其他合適高度的物體上 使其自然傾斜 斜面長度不超過試管總長的1 2 d正確 解析接種環(huán)伸入試管內(nèi)后先接觸培養(yǎng)基斜面頂端或其他無菌體的培養(yǎng)基部位 待接種環(huán)冷卻后再接觸長菌部位 4 在接種操作的過程中 不正確的是a 要將接種環(huán)灼燒滅菌b 取下棉塞后要將試管口灼燒滅菌c 將接種環(huán)伸入試管內(nèi) 先接觸長菌多的部位d 接種后還要將管口滅菌加塞 答案 解析 解析在每次劃線前后都要對接種環(huán)進(jìn)行滅菌 接種環(huán)的滅菌方法應(yīng)是在火焰上灼燒 接種時劃線操作在火焰邊進(jìn)行 在5個區(qū)域中 只要有單個活細(xì)菌 通過培養(yǎng)即可獲得所需菌落 5 右圖是微生物平板劃線示意圖 劃線的順序為12345 下列操作方法正確的是a 操作前要將接種環(huán)放在火焰邊灼燒滅菌b 劃線操作須在火焰上進(jìn)行c 在5區(qū)域中才可以得到所需菌落d 在12345區(qū)域中劃線前后都要對接種環(huán)滅菌 答案 解析 1 平板劃線法所用培養(yǎng)基屬于什么培養(yǎng)基 答案瓊脂固體培養(yǎng)基 2 如何確認(rèn)制備的培養(yǎng)基是否合格 答案將一個未接種的培養(yǎng)基同接種培養(yǎng)基一起培養(yǎng) 若未接種的培養(yǎng)基無菌落生長 說明制備的培養(yǎng)基合格 否則需要重新制備 3 如果培養(yǎng)基上長出的菌落相互重疊 則說明存在什么問題 答案說明劃線不充分 應(yīng)該重新操作 4 在第二區(qū)域內(nèi)劃線時 接種環(huán)上的菌種直接來源于哪里 答案接種環(huán)上的菌種直接來源于上次 第一區(qū)中 劃線的末端 答案 課堂小結(jié) 接種 培養(yǎng)基 ph 當(dāng)堂檢測 1 右圖是滅菌鍋及其局部剖面示意圖 其中甲 乙 丙依次指a 安全閥 排氣閥 壓力表b 排氣閥 安全閥 壓力表c 安全閥 排氣閥 溫度表d 排氣閥 安全閥 溫度表 2 3 4 5 1 解析根據(jù)教材p8圖 高壓蒸汽滅菌鍋結(jié)構(gòu)示意圖 可判斷甲 乙 丙分別為安全閥 排氣閥 壓力表 答案 解析 2 在培養(yǎng)基的配制過程中 具有如下步驟 其正確的順序為 溶化 調(diào)ph 加棉塞 包扎 分裝 稱量a b c d 答案 解析 解析上述步驟中 培養(yǎng)基的配制順序為稱量 溶化 調(diào)ph 分裝 加棉塞 包扎 2 3 4 1 5 3 下列有關(guān)平板劃線操作的敘述 不正確的是a 第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物b 每次劃線前 灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后 接種環(huán)上殘留的菌種c 在第二區(qū)域內(nèi)劃線時 接種環(huán)上的菌種直接來源于菌液d 劃線結(jié)束后 灼燒接種環(huán) 能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種 避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者 答案 解析 2 3 4 1 5 解析平板劃線操作中 接種環(huán)挑取菌種前灼燒的目的是避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物 以后每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線后殘留的菌種 劃線結(jié)束仍需灼燒接種環(huán) 是為了能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種 避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者 從第二次劃線開始 每次劃線時接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端 2 3 4 1 5 4 下列依次表示倒平板 接種的位置 以及劃線法接種的路徑示意圖 其中錯誤的是 解析 2 3 4 1 答案 5 解析倒平板時 用左手將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙 右手將錐形瓶中的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿 左手立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋 防止空氣中的雜菌污染 故a正確 接種時 左手將培養(yǎng)皿打開一條縫隙 右手將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi) 故b正確 劃線時要從上一次劃