殺菌率試驗(yàn)規(guī)程.docx

.Q/KM ZJ 2008液體洗滌劑殺菌試驗(yàn)規(guī)程（內(nèi)部使用）2008年月日內(nèi)部執(zhí)行質(zhì)量管理中心實(shí)驗(yàn)室.引用標(biāo)準(zhǔn)1、 GB15979-2002一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)2、 QB/T2738-2005日化產(chǎn)品抗菌抑菌效果的評(píng)價(jià)方法3、 QB/T2850-2007抗菌抑菌型洗滌劑4、 2002 年版消毒技術(shù)規(guī)范(中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部)5、 2001 年版藥品微生物學(xué)檢驗(yàn)手冊(cè)（科技出版社）殺菌率試驗(yàn)規(guī)程1、試驗(yàn)菌、試驗(yàn)溫度、作用時(shí)間、試液濃度試驗(yàn)菌種：金黃色葡萄球菌（ATCC 6538），大腸桿菌（ 8099 或 ATCC 25922），白色念珠菌。 試驗(yàn)溫度： 20 1。作用時(shí)間： 最短不得小于30s。常規(guī)作用時(shí)間為2min、5min、10min、 20min。 試液濃度： 中和劑鑒定用試液濃度應(yīng)為正式殺菌試驗(yàn)最高濃度。菌懸液用量：正式 殺菌試驗(yàn) 用菌懸液的濃度、取量應(yīng)與中和劑鑒定中1 組、 2 組所用 菌懸液的濃度、 取量相同。2、 細(xì)菌繁殖體懸液、菌片的制備程序：2.1 菌懸液的制備取凍干菌種管，在無(wú)菌操作下，以毛細(xì)吸管加入適量營(yíng)養(yǎng)肉湯，輕柔吸吹數(shù)次，使菌種融化分散。取含 5.0ml-10.0ml營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基試管，滴入少許菌種懸液，置37培養(yǎng) 18h24h。用接種環(huán)取第1 代培養(yǎng)的菌懸液，劃線于營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板上，于37培養(yǎng)18h24h。挑取上述第2 代培養(yǎng)物中典 型菌落，接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面，于37培養(yǎng) 18h24h，即為第3 代培養(yǎng)物（放在4左右冰箱中保藏。 每隔 2-3 個(gè)月移種一次，繼續(xù)保藏。 ）。取第3 代 14 代的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基斜面新鮮培養(yǎng)物（經(jīng)18h 24h 培養(yǎng)），用5.0ml吸管吸取 3.0ml-5.0ml稀釋液加入斜面試管內(nèi)， 反復(fù)吹吸，洗下菌苔。隨后，用5.0ml 吸管將洗液移至另一無(wú)菌 試管中，在手掌上振敲80 次（力度適中，勿濺出） ，以使細(xì)菌懸液均勻?；驈男迈r菌種斜面沾取少量菌 苔，接種在適合試驗(yàn)菌生長(zhǎng)的培養(yǎng)基中，37培養(yǎng) 18h 24h（或適宜時(shí)間）。作為原菌液。（源于藥品 微生物學(xué)檢驗(yàn)手冊(cè)211 頁(yè)）細(xì)菌繁殖體懸液應(yīng)保存在4冰箱備用。 盡量減少在室溫下放置時(shí)間，以減少細(xì)菌的自然死亡。應(yīng)當(dāng) 天使用不得過(guò)夜。44回收菌數(shù)為110 910cfu/ml用 PBS液配置GB15979-2002 一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)回收菌數(shù)為1 108 5 108cfu/ml 用 TSB營(yíng)養(yǎng)肉湯配置 2002 消毒技術(shù)規(guī)范2.2 、菌片的制備程序：消毒技術(shù)規(guī)范取凍干菌種管，在無(wú)菌操作下，以毛細(xì)吸管加入適量營(yíng)養(yǎng)肉湯，輕柔吸吹數(shù)次，使菌種融化分散。取含 5.0ml-10.0ml營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基試管，滴入少許菌種懸液，置37培養(yǎng) 18h24h。用接種環(huán)取第1 代培養(yǎng)的菌懸液，劃線于營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板上，于37培養(yǎng)18h24h。挑取上述第2 代培養(yǎng)物中典 型菌落，接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面，于37培養(yǎng) 18h24h，即為第3 代培養(yǎng)物。取第3 代 14 代的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基斜面新鮮培養(yǎng)物（經(jīng)18h 24h 培養(yǎng)），用5.0ml吸管吸取3.0ml-5.0mlTSB營(yíng)養(yǎng)肉湯 加入斜面試管內(nèi) ，反復(fù)吹吸，洗下菌苔。隨后，用5.0ml 吸管將洗液移至另一無(wú)菌試管中，在手掌上振敲80 次，以使細(xì)菌懸液均勻，含菌量1108 5 108cfu/ml 。用無(wú)菌鑷子夾住已滅菌10mm*10mm濾紙一角，一面朝上，注入10ul菌懸液，放到無(wú)菌平板內(nèi)，37 溫箱中干燥20min-30min ，（或在室溫自然陰干后使用）制成菌片。每個(gè)菌片回收菌落，按活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù) 所得結(jié)果，應(yīng)為5 105 5 106 cfu/片。）細(xì)菌繁殖體懸液和菌片，用畢應(yīng)隨時(shí)保存在4冰箱內(nèi)。盡量減少在室溫下放置時(shí)間，以減少細(xì)菌的 自然死亡。（應(yīng)當(dāng)天使用不得過(guò)夜。 ）3、操作程序3.1 、懸液定量法殺菌試驗(yàn)操作程序、 樣品用無(wú)菌標(biāo)準(zhǔn)硬水稀釋至同中和劑鑒定用試液濃度，或低于中和劑鑒定用試液濃度，制成（稀釋 液）試驗(yàn)樣液。、 將試管按需要數(shù)量分別排列于試管架上，各組由左向右，排序、標(biāo)記。44、 配制菌懸液，濃度為1 10 910cfu/ml GB15979-2002一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)或18810 510 cfu/ml 2002 消毒技術(shù)規(guī)范、 取殺菌試驗(yàn)用無(wú)菌大試管，先加入0.5ml 試驗(yàn)用菌懸液，再加入0.5ml 有機(jī)干擾物質(zhì)，混勻，置 201 5min ，用無(wú)菌吸管吸取步驟1 中的試驗(yàn)樣液4.0ml 注入其中， 立即開啟計(jì)時(shí)器， 并迅速混勻 （在 手掌上振搖80 次）。- 見消毒技術(shù)規(guī)范 或吸取試驗(yàn)用菌懸液0.1ml ，加入到含 5ml 樣液的試管中，立 即開啟計(jì)時(shí)器，并迅速混勻（在手掌上振搖80 次）。 - 見 QB/T 2738-2005、 作用 2min、5min、10min、20min，即刻用無(wú)菌吸管吸取0.5ml 移入鑒定合格的4.5ml 中和劑溶液 中（中和劑的濃度與容量應(yīng)與鑒定試驗(yàn)結(jié)果規(guī)定的相同）充分混勻，中和作用10min 后，取樣液、 10 倍 系列稀釋液0.5ml （見 GB15979-2002）或分別吸取1.0 ml（- 見消毒技術(shù)規(guī)范 ）（見圖四），置于 2 個(gè)滅菌平皿，用涼至4045營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基或沙氏瓊脂培養(yǎng)基（酵母菌）15ml 作傾注，轉(zhuǎn)動(dòng)平皿， 使其充分均勻，瓊脂凝固后翻轉(zhuǎn)平板，35 2培養(yǎng) 48h（細(xì)菌）或（酵母菌）25 2培養(yǎng) 72h， 作活菌菌落計(jì)數(shù)。、 同時(shí)用稀釋液代替樣液進(jìn)行平行試驗(yàn)，作為陽(yáng)性對(duì)照管。、 陰性對(duì)照組：分別吸取試驗(yàn)用相關(guān)溶液和培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，觀察有無(wú)污染。、 計(jì)數(shù)菌落時(shí)，一般以肉眼觀察，必要時(shí)用放大鏡檢查。以菌落數(shù)在 15cfu 300cfu 的平板為準(zhǔn)，每 個(gè)稀釋度 3 個(gè)平板生長(zhǎng)菌落數(shù)全部合乎上述標(biāo)準(zhǔn)，則以該 3 個(gè)平板的菌落平均值作為結(jié)果；若有 2 個(gè)符 合合乎上述標(biāo)準(zhǔn)，則以該合格的 2 個(gè)平板菌落的平均值作為結(jié)果。、 試驗(yàn)重復(fù)3 次，求其平均值。根據(jù)各組活菌濃度（cfu/ml ），計(jì)算殺菌率，見計(jì)算公式1?；蚋鶕?jù) 各組活菌濃度換算為對(duì)數(shù)值（N），計(jì)算殺滅對(duì)數(shù)值，見計(jì)算公式2。3.2載體法殺菌試驗(yàn)操作程序、試驗(yàn)樣品用無(wú)菌標(biāo)準(zhǔn)硬水（過(guò)濾除菌）稀釋至規(guī)定濃度，制成（稀釋液）試驗(yàn)樣液。、吸取樣液5.0ml 放入滅菌平皿，另吸取PBS 5.0ml 注入平皿中，作為陽(yáng)性對(duì)照皿。每皿用無(wú)菌鑷子 夾住菌片一角放入試樣皿和陽(yáng)性對(duì)照皿。、作用至設(shè)定時(shí)間后，即刻用無(wú)菌鑷子夾住菌片一角，投入含5.0ml 中和劑的試管中（中和劑的濃度 與容量應(yīng)與鑒定試驗(yàn)結(jié)果規(guī)定的相同）充分混勻計(jì)時(shí)。( 見圖三 )、中和 10min 后，取樣液或 10 倍系列稀釋液 1.0ml （見圖四），置于兩個(gè)滅菌平皿，接種涼至 40 45營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基或沙氏瓊脂培養(yǎng)基（酵母菌） 15ml，轉(zhuǎn)動(dòng)平皿 10-20 下，使其充分均勻，凝固 后，于 35 2培養(yǎng) 48h（細(xì)菌）或 72h（酵母菌），作活菌菌落計(jì)數(shù)。、試驗(yàn)重復(fù)3 次，求其平均值。、陰性對(duì)照組：分別吸取試驗(yàn)用相關(guān)溶液和培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，觀察有無(wú)污染。A、 PBC液（ 0.03mol/L磷酸鹽緩沖液）、B、 無(wú)菌標(biāo)準(zhǔn)硬水1ml 置于滅菌平皿內(nèi)、C、 空白平皿，傾注營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（細(xì)菌）或沙氏瓊脂培養(yǎng)基（酵母菌）15ml 培養(yǎng)。、計(jì)數(shù)菌落時(shí)，一般以肉眼觀察，必要時(shí)用放大鏡檢查。以菌落數(shù)在 15cfu 300cfu 的平板為準(zhǔn)，每 個(gè)稀釋度 3 個(gè)平板生長(zhǎng)菌落數(shù)全部合乎上述標(biāo)準(zhǔn)，則以該 3 個(gè)平板的菌落平均值作為結(jié)果；若有 2 個(gè)符 合合乎上述標(biāo)準(zhǔn)，則以該合格的 2 個(gè)平板菌落的平均值作為結(jié)果。4、計(jì)算公式1、殺菌率 X1（ A B）/ A100% 式中： X1殺菌率（ %）；A- 對(duì)照樣品平均菌落數(shù)；B- 被試樣品平均菌落數(shù)。2、殺滅對(duì)數(shù)值（ KL）對(duì)照組平均活菌濃度的對(duì)數(shù)值（No）試驗(yàn)組活菌濃度的對(duì)數(shù)值（Nx） 備注：計(jì)算殺滅對(duì)數(shù)值時(shí)，取小數(shù)點(diǎn)后兩位值，可以進(jìn)行數(shù)字修約。如果消毒試驗(yàn)組消毒處理后平均生產(chǎn)菌落數(shù)，小于等于1 時(shí)，即大于等于試驗(yàn)前對(duì)照組平均活菌濃度的對(duì)數(shù)值。 5、評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)殺菌率 90%，產(chǎn)品有殺菌作用。 懸液定量殺滅試驗(yàn)中，各次的殺滅對(duì)數(shù)值5.00 ，可判定為消毒合格。6、 操作要點(diǎn)：（消毒技術(shù)規(guī)范2002 版）1、對(duì)接觸消毒劑（殺菌劑）的樣本，在達(dá)到規(guī)定作用時(shí)間，即刻取樣移入鑒定合格的中和劑 溶液中（中和劑的濃度與容量應(yīng)與鑒定試驗(yàn)結(jié)果規(guī)定的相同）；2、即刻混勻，并按規(guī)定時(shí)間吸取樣液進(jìn)行隨后的培養(yǎng)檢測(cè)；3、在將樣本接種培養(yǎng)基以前的操作，應(yīng)按規(guī)定時(shí)間內(nèi)進(jìn)行，以免微生物與中和劑或中和產(chǎn)物接觸過(guò)久。審核：編制：中和劑懸液定量鑒定試驗(yàn)操作程序引用標(biāo)準(zhǔn)：QB/T2738-2005日化產(chǎn)品抗菌抑菌效果的評(píng)價(jià)方法（試驗(yàn)菌懸液在1 104 9 104cfu/ml ）4 9 104GB 15979-2002一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)（試驗(yàn)菌懸液在1 107 5107cfu/ml ）2002消毒技術(shù)規(guī)范（試驗(yàn)菌懸液在1 10一、定義和術(shù)語(yǔ)cfu/ml ）中和劑 在微生物殺滅試驗(yàn)中，試驗(yàn)微生物與殺菌劑作用達(dá)到規(guī)定時(shí)間的終點(diǎn)時(shí)，用以中和殘留的殺菌劑，使其不在持續(xù)抑制和殺滅微生物的試劑。中和產(chǎn)物 中和劑加殺菌劑（樣品）=9：1，作用 10min 配置而成。 二、 中和劑鑒定試驗(yàn)原理中和劑鑒定試驗(yàn)原理試驗(yàn)分組第 1 組殺菌劑 菌液培養(yǎng)第 2 組（殺菌劑 菌 液 ） 中和劑第 3 組中和劑 菌液培養(yǎng)第 4 組（殺菌劑 中 和劑） 菌液第 5 組陽(yáng)性菌數(shù)對(duì)照第 6 組陰性對(duì)照。培養(yǎng)培養(yǎng)觀察殺菌劑對(duì)觀察殘留殺菌觀察中和劑是觀察中和產(chǎn)陽(yáng)性對(duì)照組。陰性對(duì)照組。試驗(yàn)菌有無(wú)殺劑被中和后，否抑菌。物，或未被完滅或抑制能力受到殺菌劑作全中和的殘留試驗(yàn)?zāi)康挠煤蟮脑囼?yàn)菌殺菌劑對(duì)試驗(yàn)是否能恢復(fù)生菌的生長(zhǎng)繁殖長(zhǎng)。是否有影響。三、 中和劑鑒定試驗(yàn)中易出現(xiàn)的問(wèn)題及解決方法出現(xiàn)的問(wèn)題解決方法1、組無(wú)菌生長(zhǎng)或組平板上少于5 個(gè)菌落，其它組正常。降低消毒劑濃度或縮短作用時(shí)間。2菌落數(shù)較多且數(shù)量基本相同，其它組正常。提高消毒劑濃度或延長(zhǎng)作用時(shí)間。3組中和劑菌落數(shù)明顯少于PBS組菌數(shù)降低中和劑濃度或改變中和劑成分。4組（中和產(chǎn)物）菌落數(shù)明顯少于PBS組菌數(shù)， 其它組正常。提高中和劑濃度或改變中和劑成分。5多次更換中和劑均不能得到滿意結(jié)果。選用載體法進(jìn)行中和劑鑒定，殺菌試驗(yàn)同時(shí)用載體法進(jìn)行。四、 1 鑒定試驗(yàn)操作程序中和劑懸液定量鑒定試驗(yàn)操作程序- 消毒技術(shù)規(guī)范試驗(yàn)分組第 1 組第 2 組第 3 組第 4 組第 5 組第 6 組取試驗(yàn)樣品4.0ml 加入各對(duì)應(yīng)組取 4.5ml 中和劑 加 入 對(duì) 應(yīng) 組取 4.9ml 中和產(chǎn)物 b 加 入對(duì)應(yīng)組取 4.5mlPBS（稀釋液）加 入對(duì)應(yīng)組20 1恒溫5min菌懸液1.0ml菌懸液1.0ml0.1ml 菌懸液 0.4ml 硬水 混勻0.1ml 菌懸液0.1ml 菌懸液 0.4ml 硬水 混勻振敲 80 次，混勻作用至試驗(yàn)預(yù)定時(shí)間，取 0.5ml 加入下列對(duì)應(yīng)組作用 10min，取 0.5ml 加入下列各對(duì)應(yīng)組PBS4.5ml中和劑4.5ml中和劑4.5ml中和產(chǎn)物4.5mlPBS4.5ml振敲 80 次、混勻/作用 10min/取適宜稀釋度懸液 1.0ml接種平 板（ 2 個(gè) / 樣本）活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)用中和劑10倍系列稀釋用中和產(chǎn)物10 倍系列稀 釋用稀釋液 10倍系列稀釋PBS中和劑各 1.0ml 接 種平板第 1 組不長(zhǎng)第 2 組菌數(shù)第 3、4、5 組菌數(shù)相似，第 6 組無(wú)菌中和劑鑒定評(píng)價(jià)規(guī)定菌或明顯少于第 2 組大于 5 且明顯少于第 3、 4、 5 組誤差率 15%生長(zhǎng)三組間平均菌數(shù) =（ 第 3+4+5 組菌數(shù)） 3； 誤差率 %=（三組平均菌數(shù) - 各組菌落平均數(shù)）中和劑鑒定合格標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)1、 2 組菌數(shù)要求。05X（ 1-10 ）(X5) Y( 10) 1.5 Y的絕對(duì)值之和 /3 三組間平均菌數(shù)100符合上述評(píng)價(jià)的中和劑表明可消除試驗(yàn)樣品對(duì)指示菌的作用，中和劑與試驗(yàn)樣品的中結(jié)論和產(chǎn)物對(duì)指示菌無(wú)毒害，鑒定為該試驗(yàn)樣品的中和劑。cfu/ml ）a 菌懸液濃度及制備：消毒技術(shù)規(guī)范用 PBS（試驗(yàn)菌懸液在1 107 5 107備注b 中和產(chǎn)物的配置：先將試驗(yàn)樣液1.0ml 與中和劑溶液9ml 混合，作用10min 后制成四、 2 鑒定試驗(yàn)操作程序中和劑鑒定試驗(yàn)操作程序- 載體法試驗(yàn)分組用無(wú)菌鑷子取 菌片加入下列第 1 組吸取試驗(yàn) 樣品 5.0ml第 2 組吸取試驗(yàn)樣品5.0ml 于無(wú)菌平第 3 組吸取中和劑5.0ml 于無(wú)菌第 4 組吸取中和產(chǎn) 物 5.0ml 于第 5 組吸取 PBS 5.0ml 于無(wú)菌第 6 組對(duì)應(yīng)組于無(wú)菌平皿內(nèi)平皿內(nèi)無(wú)菌平皿內(nèi)平皿內(nèi)皿內(nèi)作用至預(yù)定時(shí)間， 立即用無(wú)菌鑷子取出菌片移入對(duì)應(yīng)組混勻作用10min，立即用無(wú)菌鑷子取出菌片移入對(duì)應(yīng)組試管振打 80 次PBS5.0ml中和劑5.0ml中和劑5.0ml中和產(chǎn)物5.0ml稀釋液5.0ml作用 10min作用 10min/取原液或稀釋用稀釋液用稀釋液 10 倍用中和劑 10用中和產(chǎn)物用稀釋液10稀釋液液 1.0ml 接種平板（ 2 個(gè)/ 樣10 倍系列稀釋系列稀釋倍系列稀釋10 倍系列稀釋倍系列稀釋中和劑各 1.0ml本）接種平板操作要點(diǎn)即刻混勻，并按規(guī)定時(shí)間接種培養(yǎng)基中和劑鑒定評(píng)價(jià)第 1 組不第 2 組有且較第第 3、4、5 組菌數(shù)相似，且其誤差率15%第 6 組無(wú)評(píng)價(jià)規(guī)定長(zhǎng)菌或明顯少于第 2組1 組為多，較第3、 4、 5 組為少 的菌數(shù)生長(zhǎng)，并三組間平均菌數(shù) =（第 3+4+5 組菌數(shù)）3；菌生長(zhǎng)中和劑鑒定合 格標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)1、 2 組菌數(shù)要求。符合下表要求。0 5X（1-10 ）(X 5) Y( 10)1.5 Y誤差率 %=（三組平均菌數(shù) - 各組菌落平均 數(shù)）的絕對(duì)值之和 /3 三組間平均菌數(shù) 100符合上述評(píng)價(jià)的中和劑表明可消除試驗(yàn)樣品對(duì)指示菌的作用，中和劑與試驗(yàn)樣品的中結(jié)論和產(chǎn)物對(duì)指示菌無(wú)毒害，鑒定為該試驗(yàn)樣品的中和劑。a 菌懸液濃度及制備：用 PBS將指示菌制成1 104 9 104 cfu/ml懸液。（ -GB15979）cfu/ml ）備注消毒技術(shù)規(guī)范用 PBS（試驗(yàn)菌懸液在1 107 5107b 中和產(chǎn)物的配置：先將試驗(yàn)樣液1.0ml 與中和劑溶液9ml 混合，作用10min 后制成四、 3 鑒定試驗(yàn)操作程序中和劑懸液定量鑒定試驗(yàn)操作程序- GB/T 15979 試驗(yàn)分組第 1 組第2 組第 3 組第 4 組第 5 組第 6 組取 0.10ml 菌懸取試驗(yàn)樣品5.0ml加入各取 5.0ml 中和取 5.0ml 中取 5.0mlPBS液, 分別加入各組對(duì)應(yīng)組劑 加 入 對(duì) 應(yīng)組和產(chǎn)物 b 加入對(duì)應(yīng)組（稀釋液）加入對(duì)應(yīng)組振敲 80 次，混勻作用至試驗(yàn)預(yù)定時(shí)間，取 0.5ml 加入下列對(duì)應(yīng)組作用 10min，取 0.5ml 加入下列各對(duì)應(yīng)組PBS4.5ml中和劑4.5ml中和劑4.5ml中和產(chǎn)物4.5mlPBS4.5ml振敲 80 次、混勻/作用 10min/取適宜稀釋度懸液 1.0ml 接種平 板（ 2 個(gè) / 樣本）活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)用中和劑10倍系列稀釋用中和產(chǎn)物10 倍系列稀 釋用稀釋液 10倍系列稀釋PBS中和劑各 1.0ml 接 種平板第 1 組不長(zhǎng)第 2 組菌數(shù)第 3、4、5 組菌數(shù)相似，第 6 組無(wú)菌中和劑鑒定評(píng)價(jià)規(guī)定菌或明顯少于第 2 組大于 5 且明顯少于第 3、 4、 5 組誤差率 15%生長(zhǎng)三組間平均菌數(shù) =（ 第 3+4+5 組菌數(shù)） 3； 誤差率 %=（三組平均菌數(shù) - 各組菌落平均數(shù)）中和劑鑒定合格標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)1、 2 組菌數(shù)要求。05X（ 1-10 ）(X5) Y( 10) 1.5 Y的絕對(duì)值之和 /3 三組間平均菌數(shù)100符合上述評(píng)價(jià)的中和劑表明可消除試驗(yàn)樣品對(duì)指示菌的作用，中和劑與試驗(yàn)樣品的中結(jié)論和產(chǎn)物對(duì)指示菌無(wú)毒害，鑒定為該試驗(yàn)樣品的中和劑。a 菌懸液濃度及制備：用 PBS將指示菌制成1 104 9 104 cfu/ml懸液。（ -GB15979）備注b 中和產(chǎn)物的配置：先將試驗(yàn)樣液1.0ml 與中和劑溶液9ml 混合，作用10min 后制成七、消毒劑的常用中和劑的配置1、用于氯型殺菌劑（有效氯0.1-0.5% ）：硫代硫酸鈉2、用于非氧化型殺菌劑：a：磷酸二氫鉀1.36g 、磷酸氫二鈉2.83g 、卵磷脂 10.0g 、甘氨酸 10.0g 、吐溫 -80 30.0g 、蒸餾水1000mlb：磷酸二氫鉀1.36g 、磷酸氫二鈉2.83g 、卵磷脂 3.0g 、吐溫 -80