肺炎鏈球菌的實(shí)驗(yàn)活動(dòng)生物危害評(píng)估報(bào)告.doc

肺炎鏈球菌的實(shí)驗(yàn)活動(dòng)生物危害評(píng)估報(bào)告一、細(xì)菌的傳播與致病肺炎鏈球菌在自然界中分布廣泛，常生活在正常人的鼻腔中，多數(shù)不致病或致病力很弱，少數(shù)致病力較強(qiáng)。肺炎鏈球菌主要引起大葉性肺炎以及氣管炎、中耳炎、腦膜炎、胸膜炎、心內(nèi)膜炎、敗血癥等疾病。典型的大葉性肺炎起病急驟，病人有高燒、寒顫，開始時(shí)有陣發(fā)性干咳，不久有少量粘液痰，隨后痰變黃色，呈粘膿性，一般病程12周。二、細(xì)菌的生物學(xué)特性肺炎鏈球菌 (S.pneumoniae)屬鏈球菌科，鏈球菌屬。為革蘭氏陽性球菌，呈矛尖狀，成雙排列，標(biāo)本或液體培養(yǎng)中可連成鏈狀。有莢膜，無鞭毛，不形成芽胞。本菌營養(yǎng)要求較高，需在含血液或血清的培養(yǎng)基中生長。兼性厭氧，C02 5-10%生長最好，且生成的菌落周圍有草綠色溶血環(huán)。若于液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)24h，呈均勻混濁，后期可因產(chǎn)生自溶而變得澄清。該菌可分解多種糖類，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。膽汁溶解試驗(yàn)陽性O(shè)ptochin敏感試驗(yàn)陽性。其抗原結(jié)構(gòu)包括：莢膜多糖抗原：多糖抗原，型特異性，共85型，型引起大葉性肺炎；菌體種屬特異性抗原為多糖抗原，存在于細(xì)胞壁，稱C多糖。在鈣離子存在時(shí),C多糖可與正常人血清中稱為C-反應(yīng)蛋白(C reactive protein,CRP)的球蛋白結(jié)合，發(fā)生沉淀。該菌抵抗力較弱，加熱56 ，20min即死亡。而且它對(duì)一般消毒劑敏感，對(duì)干燥抵抗力較強(qiáng)。 肺炎鏈球菌可能發(fā)生的變異有莢膜變異：即從有莢膜有毒力的光滑（S）型菌變異為失去莢膜毒力減低或消失的粗糙（R）型。三、細(xì)菌的實(shí)驗(yàn)室檢查1、標(biāo)本采集 包括痰、膿液、血液等標(biāo)本。2. 涂片染色鏡檢 革蘭氏色染色呈陽性球菌，呈矛頭狀成雙排列，坦面相鄰，尖端向外。若標(biāo)本可見大量炎性細(xì)胞同時(shí)存在時(shí)有重要的參考價(jià)值。3、莢膜染色 陽性。4、分離培養(yǎng) 常采用羊血平板，有助于其溶血特征的識(shí)別和進(jìn)一步鑒定，而且初代分離應(yīng)置5%10%CO2的環(huán)境下培養(yǎng)。在血平板上，肺炎鏈球菌的菌落直徑0.51.5mm，灰白色、半透明、表面光滑（有些菌株可表現(xiàn)為粘液狀）扁平，周圍環(huán)繞著草綠色溶血環(huán)。培養(yǎng)或放置24h以上的培養(yǎng)物還會(huì)由于肺炎鏈球菌的自溶作用而致菌落中央塌陷而邊緣隆起，而呈臍窩狀。5、鑒定試驗(yàn)?zāi)懼芫囼?yàn)：本試驗(yàn)的原理基于膽鹽能夠通過活化肺炎鏈球菌的自溶酶而溶解肺炎鏈球菌，但不能溶解草綠色鏈球菌。常用的方法包括快速平板法和標(biāo)準(zhǔn)試管法。前者取一接種環(huán)2%去氧膽酸鈉溶液加于血平板待鑒定菌的菌落上，置35孵育1530min，菌落溶解消失為陽性。而后者則是在1ml待鑒定菌1824h培養(yǎng)液中加入2滴10%去氧膽酸鈉溶液，35孵育5-10min后鑒定菌管由混濁變?yōu)橥该髡邽殛栃?。Optochin試驗(yàn) 用以與其他草綠色鏈球菌相鑒別。用接種環(huán)將單個(gè)待鑒定菌落均勻涂于血平板上，用含量為5g的optochin紙片貼于接種區(qū)中央，35需氧培養(yǎng)過夜，抑菌圈 18mm的為陽性。本菌為陽性。6、小鼠毒力試驗(yàn) 若用有毒力的菌株接種小鼠，接種后12-36h，小鼠死亡。四、細(xì)菌的防治肺炎鏈球菌感染關(guān)鍵在于養(yǎng)成良好的衛(wèi)生習(xí)慣，保持環(huán)境衛(wèi)生。必要時(shí)對(duì)體弱兒童及老年人可用疫苗進(jìn)行預(yù)防注射，如用細(xì)菌莢膜多糖制備的多糖疫苗進(jìn)行預(yù)防，效果較好。病人在發(fā)熱期間，應(yīng)臥床休息，吃容易消化的食物，多喝水?；前奉愃幬?、青霉素等對(duì)肺炎等疾病的治療較為有效。五、細(xì)菌的生物安全防護(hù)根據(jù)病原微生物生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例中的有關(guān)規(guī)定，人間傳播的微生物名錄（待頒布）肺炎鏈球菌屬于三類，BSL-2。相關(guān)的防護(hù)事宜包括：（1）操作要求1、實(shí)驗(yàn)時(shí)，未經(jīng)實(shí)驗(yàn)室主任同意，限制或禁止進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室。2、不許在工作區(qū)域飲食、吸煙、清洗隱型眼鏡和化妝。食物應(yīng)存放在工作區(qū)域以外專用櫥柜或冰箱中。3、所有的操作過程應(yīng)盡量細(xì)心，避免產(chǎn)生和濺出氣溶膠。4、對(duì)于污染的銳器，必須時(shí)刻保持高度的警惕，包括針、注射器、玻片、加樣器等。5、注射和吸取感染材料時(shí)，只能使用針頭固定注射器或一次性注射器（即注射器和針頭是一體的）。用過的一次性針頭必須彎曲、切斷、破碎、重新套上針頭套、從一次性注射器上去掉，或在丟棄前進(jìn)行人工處理，要不將之小心放入不會(huì)被刺穿的、用于收集廢棄銳器的容器中。非一次性銳器必須放置在堅(jiān)壁容器中，轉(zhuǎn)移至處理區(qū)消毒，最好高壓殺菌。6、打碎的器皿不能直接用手處理，必須用其它工具處理，如刷子和簸箕、夾子或鑷子。盛污染的針頭、銳器、碎玻璃的容器在倒掉前，應(yīng)按照相關(guān)的規(guī)定進(jìn)行消毒。7、所有的培養(yǎng)物、儲(chǔ)存物及其它規(guī)定的廢物在釋放前，均應(yīng)使用可行的消毒方法進(jìn)行消毒，如高壓滅菌。轉(zhuǎn)移到就近實(shí)驗(yàn)室消毒的物料應(yīng)置于耐用、防漏容器內(nèi)，密封運(yùn)出實(shí)驗(yàn)室。離開該系統(tǒng)進(jìn)行消毒的物料，在轉(zhuǎn)移前應(yīng)包裝，其包裝應(yīng)符合有關(guān)的法規(guī)。8、濺出或偶然事件中，明顯暴露于傳染源時(shí)，要立即向?qū)嶒?yàn)室主任報(bào)告。進(jìn)行適當(dāng)?shù)尼t(yī)學(xué)評(píng)估、觀察、治療，保留書面記錄。9、按日常程序、在有關(guān)傳染源的工作結(jié)束后、尤其是傳染源濺出或?yàn)⒊龊?、或受到其他傳染源污染后，?shí)驗(yàn)室設(shè)備和工作臺(tái)面應(yīng)當(dāng)使用有效的消毒劑消毒。污染的設(shè)備在送去修理、維護(hù)前，要按照相關(guān)的規(guī)定消毒；在離開設(shè)施轉(zhuǎn)移前，要按照相關(guān)的規(guī)定打包運(yùn)輸。（2）安全設(shè)備1、正確使用和保養(yǎng)生物安全柜、最好是二級(jí)生物安全柜、或其他合適的人員防護(hù)設(shè)施、或物理遏制裝置。2、確定可能形成傳染性氣溶膠或?yàn)R出物的實(shí)驗(yàn)過程，包括離心、研磨、勻漿、劇烈震蕩或混勻、超聲波破裂、開啟裝有傳染源的容器、采集感染標(biāo)本等。3、涉及高濃度或大體積的傳染源時(shí)，若選用密封轉(zhuǎn)頭或帶安全罩的離心機(jī)，若轉(zhuǎn)頭或安全罩僅在生物安全柜中打開，則可在開放實(shí)驗(yàn)室內(nèi)離心。4、當(dāng)必須在生物安全柜外處理標(biāo)本時(shí)，需采取面部保護(hù)措施（跟鏡、口罩、面罩、或其他防濺裝置），以免傳染源或其他有害物濺或?yàn)⒌矫嫔稀?、在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，必須使用專用的防護(hù)性外衣、大褂、罩衫或制服。人員到非實(shí)驗(yàn)室區(qū)域時(shí)，防護(hù)服必須留在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)。防護(hù)服可以在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)處理，