芳酸及其酯類藥物的分析.ppt

典型藥物分析 1 學(xué)習(xí)目標(biāo) 1 掌握典型藥物的鑒別和含量測定的原理 方法2 熟悉典型藥物中主要特殊雜質(zhì)的來源及檢查方法3 了解典型藥物的結(jié)構(gòu)特征和主要理化性質(zhì)4 學(xué)會根據(jù)藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 對典型藥物進(jìn)行鑒別 檢查和含量測定操作 學(xué)會正確計算和判斷檢驗結(jié)果5 具有強(qiáng)烈的質(zhì)量觀念 認(rèn)真負(fù)責(zé)的工作態(tài)度 科學(xué)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng) 2 第四章芳酸及其酯類藥物的分析 3 苯甲酸 羥苯乙酯 丙磺舒 4 芳酸及其酯類藥物 水楊酸類 羧基直接與苯環(huán)相連 并且鄰位有羥基取代 苯甲酸類 羧基直接與苯環(huán)相連 其它芳酸及其酯類 酸性基團(tuán)為磺酸基或羧基通過烴氧基等與苯環(huán)相連 二 芳酸及其酯類藥物 5 一 典型藥物 第五章芳酸及其酯類藥物的分析 第一節(jié)典型藥物的分類與性質(zhì) 一 苯甲酸類 苯甲酸丙磺舒甲芬那酸 6 性質(zhì) 1 固體 具有一定的熔點 2 具有紫外和紅外特征吸收光譜 本類藥物結(jié)構(gòu)中的苯環(huán)及其取代基 具有特征的紫外和紅外吸收光譜 可用于鑒別和含量測定 3 溶解性游離芳酸類藥物幾乎不溶于水 易溶于有機(jī)溶劑 芳酸堿金屬鹽及其它鹽易溶于水 難溶于有機(jī)溶劑 苯甲酸藥物結(jié)構(gòu)中 羧基直接與苯環(huán)相連 因此具有較強(qiáng)的酸性 可用于含量測定 1 物理性質(zhì) 第一節(jié)典型藥物的分類與性質(zhì) 7 2 酸性pKa 3 6 水楊酸 pKa 2 95 阿司匹林 pKa 3 49 苯甲酸 pKa 4 26 8 芳酸中有如下取代基使酸性 X NO2 OH COOH芳酸中有如下取代基使酸性 CH3 NH2 9 水楊酸 pKa 2 95 鄰位羥基對羧基的鄰位效應(yīng)鄰位羥基與羧基形成分子內(nèi)氫鍵 阿司匹林 pKa 3 49 羥基被乙?；?不與羧基生成分子間內(nèi)氫鍵 10 水楊酸類多可用酸堿滴定法測定含量 在中性乙醇中 以酚酞為指示劑以標(biāo)準(zhǔn)氫氧化鈉滴定液測定含量 芳酸堿金屬鹽易溶于水 水解 溶液呈堿性 但堿性太弱 所以其含量測定方法為雙相滴定法或非水堿量法 11 3 水解特性 1 芳酸酯可水解 利用其水解得到酸和醇的性質(zhì)可進(jìn)行鑒別 2 利用芳酸酯水解定量消耗氫氧化鈉的性質(zhì) 芳酸酯類藥物可用水解后剩余滴定法測定含量 3 芳酸酯類藥物還應(yīng)檢查因水解而引入的特殊雜質(zhì) 12 4 取代基特性 取代芳酸類藥物可利用其取代基的性質(zhì)進(jìn)行鑒別和含量測定 如具有酚羥基的藥物可用FeCl3反應(yīng)鑒別 具芳伯氨基的藥物可用重氮化 偶合反應(yīng)鑒別 亞硝酸鈉滴定法測定含量 13 第一節(jié)水楊酸類藥物分析 14 預(yù)習(xí)提示 阿司匹林的結(jié)構(gòu)特點阿司匹林的鑒別方法有哪些 阿司匹林需要檢測哪些雜質(zhì) 阿司匹林含量測定的方法與計算 15 一 典型藥物的結(jié)構(gòu)與性質(zhì) 阿司匹林 苯環(huán) 紫外吸收 羧基 酸性 16 一 典型藥物的結(jié)構(gòu)與性質(zhì) 苯環(huán) 紫外吸收 17 酚羥基 三氯化鐵顯色反應(yīng) 對氨基水楊酸鈉 苯環(huán) 紫外吸收 有機(jī)酸的鈉鹽 鈉鹽的鑒別反應(yīng) 一 典型藥物的結(jié)構(gòu)與性質(zhì) 18 二 阿司匹林及其制劑的分析 一 性狀1 外觀與臭味白色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末 無臭或微帶醋酸臭 味微酸 遇濕氣即緩緩水解 19 二 阿司匹林及其制劑的分析 一 性狀2 溶解度本品在乙醇中易溶 在三氯甲烷或乙醚中溶解 在水或無水乙醚中微溶 在氫氧化鈉溶液或碳酸鈉溶液中溶解 但同時分解 為什么阿司匹林難溶于水 卻可溶解在氫氧化鈉溶液或碳酸鈉溶液中 20 二 鑒別 1 三氯化鐵反應(yīng)方法 取本品約0 1g 加水10ml 煮沸 放冷 加三氯化鐵試液1滴 即顯紫堇色原理 阿司匹林結(jié)構(gòu)中無游離的酚羥基 其水解產(chǎn)物水楊酸有酚羥基 在中性或弱酸性條件下 可與三氯化鐵試液反應(yīng) 將溶液煮沸的目的是什么 21 二 鑒別 反應(yīng)式 紫堇色配位化合物 22 二 鑒別 2 水解反應(yīng)方法 取本品約0 5g 加碳酸鈉試液10ml 煮沸2分鐘后 放冷 加過量的稀硫酸 即析出白色沉淀 并發(fā)生醋酸的臭氣原理 阿司匹林分子結(jié)構(gòu)中具有酯鍵 與碳酸鈉試液共熱 水解生成水楊酸鈉和醋酸鈉 放冷后用稀硫酸酸化 析出白色的水楊酸沉淀 并產(chǎn)生醋酸的臭氣 23 二 鑒別 白色沉淀 醋酸臭氣 反應(yīng)式 24 二 鑒別 3 紅外分光光度法阿司匹林供試品的紅外吸收圖譜應(yīng)與 藥品紅外光譜集 中對照的圖譜 光譜集第5圖 一致 25 二 鑒別 4 高效液相色譜法在含量測定項下記錄的色譜圖中 供試品溶液主峰的保留時間應(yīng)與對照品溶液主峰的保留時間一致 中國藥典 2010年版阿司匹林片 阿司匹林腸溶片 阿司匹林腸溶膠囊 阿司匹林泡騰片等均采用高效液相色譜法鑒別 26 水楊酸 熾灼殘渣 有關(guān)物質(zhì) 易碳化物 溶液的澄清度 重金屬 Aspirin 三 雜質(zhì)檢查 27 三 雜質(zhì)檢查 1 溶液的澄清度 1 檢查的雜質(zhì) 無羧基的雜質(zhì) 如未反應(yīng)的酚類 副產(chǎn)物醋酸苯酯 水楊酸苯酯及乙酰水楊酸苯酯等 28 三 雜質(zhì)檢查 1 溶液的澄清度 2 檢查方法 取供試品0 50g 加溫?zé)嶂良s45 的碳酸鈉試液10ml溶液后 溶液應(yīng)澄清 3 檢查原理 利用有無羧基 在碳酸鈉試液中溶解行為的差異 29 三 雜質(zhì)檢查 2 游離水楊酸 1 雜質(zhì)來源 阿司匹林在生產(chǎn)過程中乙酰化不完全或貯藏過程中水解產(chǎn)生水楊酸 水楊酸對人體有毒性 而且分子中的酚羥基在空氣中被逐漸氧化成一系列醌型有色 如淡黃 紅棕甚至深棕色 物質(zhì) 使阿司匹林成品變色 30 三 雜質(zhì)檢查 2 游離水楊酸 2 檢查方法 高效液相色譜法按外標(biāo)法以峰面積計算 游離水楊酸限量不得超過0 1 31 三 雜質(zhì)檢查 2 游離水楊酸 2 檢查方法 高效液相色譜法供試品溶液的制備 取本品約0 1g 精密稱定 置10ml容量瓶中 加1 冰醋酸甲醇溶液適量 振搖使溶解 并稀釋至刻度 搖勻 作為供試品溶液 對照品溶液的制備 取水楊酸對照品約10mg 精密稱定 至100ml容量瓶中 用1 冰醋酸甲醇溶液適量使溶解并稀釋至刻度 搖勻 精密量取5ml 至50ml容量瓶中 用1 冰醋酸甲醇溶液稀釋至刻度 搖勻 作為對照品溶液 32 三 雜質(zhì)檢查 阿司匹林中游離水楊酸的檢查對照品 水楊酸對照品固定相 C18流動相 乙腈 四氫呋喃 冰醋酸 水 20 5 5 70 流速 1 0ml min進(jìn)樣體積 10 l檢測波長 303nm 33 三 雜質(zhì)檢查 阿司匹林制劑中游離水楊酸的限量 34 三 雜質(zhì)檢查 3 有關(guān)物質(zhì)方法 高效液相色譜法主成分自身對照法結(jié)果判斷 供試品溶液的色譜圖中如有雜質(zhì)峰 除水楊酸峰外 其他各雜質(zhì)峰面積的和不得大于對照溶液主峰面積 0 5 35 三 雜質(zhì)檢查 色譜柱 C18流動相 乙腈 四氫呋喃 冰醋酸 水 20 5 5 70 為流動相A 乙腈為流動相B 按下表進(jìn)行線性梯度洗脫 流速 1 0ml min進(jìn)樣體積 10 l檢測波長 276nm柱溫 室溫 36 四 含量測定 1 阿司匹林的含量測定 1 原理 利用阿司匹林游離羧基的酸性 用氫氧化鈉滴定液直接滴定 37 四 含量測定 1 阿司匹林的含量測定 2 方法 直接酸堿滴定法取本品約0 4g 精密稱定 加中性乙醇 對酚酞指示液顯中性 20ml溶解后 加酚酞指示液3滴 用氫氧化鈉滴定液 0 1mol L 滴定 每1ml氫氧化鈉滴定液 0 1mol L 相當(dāng)于18 02mg的C8H9O4 38 四 含量測定 1 阿司匹林的含量測定 3 注意事項 阿司匹林在水中溶解度小 同時阿司匹林酯鍵在滴定時易水解 致使測定結(jié)果偏高 因此不用水為溶劑 而用中性乙醇溶液溶解樣品 本品為有機(jī)酸 酸性較弱 用強(qiáng)堿進(jìn)行滴定時 化學(xué)計量點偏堿性 故選用堿性區(qū)變色的酚酞作為指示劑 中性乙醇的配制是取一定量乙醇加酚酞指示劑幾滴 用氫氧化鈉滴定液 0 1mol L 滴至顯粉紅色 39 四 含量測定 阿司匹林片的含量測定方法 高效液相色譜法外標(biāo)法流動相 乙腈 四氫呋喃 冰醋酸 水 20 5 5 70 檢測波長 276nm 阿司匹林腸溶片 阿司匹林腸溶膠囊 阿司匹林泡騰片 阿司匹林栓等均用此法測定含量 40 四 含量測定 41 點滴積累 42 目標(biāo)檢測 一 單項選擇題 A型題 1 阿司匹林與三氯化鐵試液反應(yīng)生成紫堇色 是因為阿司匹林結(jié)構(gòu)中具有 A 羧基B 酚羥基C 氨基D 苯環(huán)E 酯鍵水解產(chǎn)生水楊酸2 阿司匹林與碳酸鈉試液共熱 放冷后用稀硫酸酸化 析出的白色沉淀是 A 乙酰水楊酸B 醋酸C 水楊酸鈉D 水楊酸E 苯甲酸 43 目標(biāo)檢測 一 單項選擇題 A型題 3 阿司匹林與碳酸鈉試液共熱 放冷后用稀硫酸酸化 產(chǎn)生的臭氣為 A 硫酸B 醋酸C 水楊酸鈉D 苯甲酸E 水楊酸4 檢查阿司匹林中游離水楊酸 中國藥典 2010年版采用的方法是 A 薄層色譜法B 氣相色譜法C 高效液相色譜法D 紫外 可見分光光度法E 旋光法 44 目標(biāo)檢測 一 單項選擇題 A型題 5 中國藥典 2015年版阿司匹林及其制劑都需要檢查的特殊雜質(zhì)是 A 游離水楊酸B 有關(guān)物質(zhì)C 溶液的澄清度D 重金屬E 易炭化物6 可用直接酸堿滴定法測定阿司匹林含量 是因為阿司匹林結(jié)構(gòu)中具有 A 羧基B 酚羥基C 氨基D 苯環(huán)E 酯鍵 45 目標(biāo)檢測 一 單項選擇題 A型題 7 用酸堿滴定法測定阿司匹林含量時 使用酚酞指示液 用氫氧化鈉滴定液 0 1mol L 進(jìn)行滴定 滴定終點時溶液的顏色是 A 紫紅色B 粉紅色C 粉紅色褪去D 藍(lán)綠色E 藍(lán)色 46 目標(biāo)檢測 二 配伍選擇題 B型題 A 直接酸堿滴定法B 兩步酸堿滴定法C 比色法D 比濁法E 高效液相色譜法8 阿司匹林片的含量測定 中國藥典 2015年版采用的方法是 9 阿司匹林的含量測定 中國藥典 2015年版采用的方法是 47 目標(biāo)檢測 二 配伍選擇題 B型題 A 直接酸堿滴定法B 兩步酸堿滴定法C 比色法D 比濁法E 高效液相色譜法10 檢查阿司匹林中游離水楊酸 中國藥典 2015年版采用的方法是 11 檢查阿司匹林在碳酸鈉試液中的不溶物 中國藥典 2015年版采用的方法是 48 目標(biāo)檢測 三 多項選擇題 X型題 12 阿司匹林需要檢查的特殊雜質(zhì)有 A 氯化物B 重金屬C 溶液的澄清度D 游離水楊酸E 有關(guān)物質(zhì)13 下列藥物中 加熱水解后可與三氯化鐵試液反應(yīng) 產(chǎn)生顏色反應(yīng)的有 A 水楊酸B 貝諾酯C 苯甲酸D 阿司匹林E 對氨基水楊酸鈉 49 目標(biāo)檢測 三 多項選擇題 X型題 14 酸堿滴定法測定阿司匹林含量時 所用的試劑溶劑有 A 乙醇B 中性乙醇C 鹽酸滴定液D 氫氧化鈉滴定液E 酚酞指示液 50 目標(biāo)檢測 三 多項選擇題 X型題 15 在藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的檢查項下 檢查內(nèi)容主要包括 A 物理常數(shù)B 有效性C 均一性D 安全性E 純度要求16 對藥品檢驗原始記錄的要求是 A 真實B 完整C 清晰D 可以補(bǔ)記E 可以用修正液涂改 51 1 對氨基苯甲酸酯類藥物本類藥物分子中都具有對氨基苯甲酸酯的母體 結(jié)構(gòu)通式如下 典型藥物有 苯佐卡因 鹽酸普魯卡因和鹽酸丁卡因等局部麻醉藥 三 胺類藥物 52 主要化學(xué)性質(zhì) 芳伯氨基特性顯重氮化 偶合反應(yīng) 與芳醛縮合反應(yīng) 易氧化變色等 用亞硝酸鈉滴定法進(jìn)行含量測定 53 水解特性含酯鍵 或酰胺鍵 易水解 其水解的快慢受光線 熱或堿性條件的影響 水解產(chǎn)物主要為對氨基苯甲酸 PABA 利用水解產(chǎn)物的性質(zhì)來進(jìn)行鑒別 注 水解速度受空間位阻 光線 熱或堿性條件的影響 54 2 酸性pKa 3 6 水楊酸 pKa 2 95 阿司匹林 pKa 3 49 苯甲酸 pKa 4 26 55 弱堿性除苯佐卡因外 因其脂烴胺側(cè)鏈為叔胺氮原子 故具有弱堿性 因此能與生物堿沉淀劑發(fā)生沉淀反應(yīng) 但在水溶液中不能用標(biāo)準(zhǔn)酸直接滴定 在非水溶劑中能滴定 56 其它特性本類藥物的游離堿多為堿性油狀液體或低熔點固體 難溶于水 可溶于有機(jī)溶劑 其鹽酸鹽均系白色結(jié)晶性粉末 具有一定的熔點 易溶于水和乙醇 難溶于有機(jī)溶劑 57 其它特性本類藥物的游離堿多為堿性油狀液體或低熔點固體 難溶于水 可溶于有機(jī)溶劑 其鹽酸鹽均系白色結(jié)晶性粉末 具有一定的熔點 易溶于水和乙醇 難溶于有機(jī)溶劑 58 二 主要性質(zhì)苯甲酸溶解后以氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)成的中性溶液與三氯化鐵試劑反應(yīng) 可生成赭色沉淀 含硫的丙磺舒受熱可分解成亞硫酸鹽等均可用于本類藥物的鑒別 第五章芳酸及其酯類藥物的分析 一 苯甲酸類 59 一 典型藥物 第五章芳酸及其酯類藥物的分析 第一節(jié)典型藥物的分類與性質(zhì) 二 水楊酸類 水楊酸阿司匹林二氟尼柳 60 一 典型藥物 第五章芳酸及其酯類藥物的分析 第一節(jié)典型藥物的分類與性質(zhì) 二 水楊酸類 對氨基水楊酸鈉雙水楊酯貝諾酯 61 二 主要性質(zhì)本類藥物的基本結(jié)構(gòu)為鄰羥基苯甲酸 由于羧基鄰位的羥基取代 能與羧基形成分子內(nèi)氫鍵 增強(qiáng)羧基中氧氫鍵的極性 使其酸性增強(qiáng) 因此水楊酸的酸性 pKa 2 95 比苯甲酸 pKa 4 26 強(qiáng) 鄰位羥基如被酯化 則酸性下降 對氨基水楊酸鈉結(jié)構(gòu)中含有游離芳伯氨基 可采用亞硝酸鈉滴定法測定含量 第五章芳酸及其酯類藥物的分析 第一節(jié)典型藥物的分類與性質(zhì) 二 水楊酸類 62 二 主要性質(zhì)貝諾酯無游離羧基 但其取代苯環(huán)在紫外區(qū)有特征吸收可用于含量測定 其結(jié)構(gòu)中有乙?；姆疾被?經(jīng)酸水解后可顯芳香第一胺的鑒別反應(yīng) 由于鄰位的羥基取代 使本類藥物在弱酸性溶液中可與三價鐵離子生成紫色配位化合物 為本類藥物的特征鑒別反應(yīng) 亦可用于水楊酸酯類藥物中游離水楊酸的檢查 水楊酸酯類結(jié)構(gòu)易于水解 生成游離水楊酸 第五章芳酸及其酯類藥物的分析 第一節(jié)典型藥物的分類與性質(zhì) 二 水楊酸類 63 一 典型藥物 第五章芳酸及其酯類藥物的分析 第一節(jié)典型藥物的分類與性質(zhì) 三 其它芳酸類 布洛芬氯貝丁酯 64 1 水楊酸及其鹽類在中性或弱酸性條件下 可與三氯化鐵試液反應(yīng) 生成紫色配位化合物 第五章芳酸及其酯類藥物的分析 第二節(jié)鑒別試驗 一 與鐵鹽的反應(yīng) 該反應(yīng)適宜的pH值為4 6 在強(qiáng)酸性溶液中此配位化合物可分解 65 2 苯甲酸鹽的中性或堿性溶液 與三氯化鐵試液可生成堿式苯甲酸鐵鹽的赭色沉淀 第五章芳酸及其酯類藥物的分析 第二節(jié)鑒別試驗 一 與鐵鹽的反應(yīng) 66 3 丙磺舒加少量氫氧化鈉試液生成鈉鹽溶解后 pH約5 0 6 0 與三氯化鐵試液反應(yīng) 生成米黃色沉淀 產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)式為 第五章芳酸及其酯類藥物的分析 第二節(jié)鑒別試驗 一 與鐵鹽的反應(yīng) 67 4 布洛芬的無水乙醇溶液 加入高氯酸羥胺的無水乙醇試液及N N 雙環(huán)己基羧二亞胺 DDC 的無水乙醇溶液 混合 在溫水中加熱20min 冷卻后加高氯酸鐵的無水乙醇溶液 呈紫色 第五章芳酸及其酯類藥物的分析 第二節(jié)鑒別試驗 一 與鐵鹽的反應(yīng) 68 5 氯貝丁酯的乙醚溶液數(shù)滴 加鹽酸羥胺的乙醇飽和溶液與氫氧化鉀的乙醇飽和溶液各2 3滴 水浴加熱約2min 冷卻 加稀鹽酸使呈酸性 加1 三氯化鐵溶液1 2滴 顯紫色 其反應(yīng)產(chǎn)物為羥肟酸鐵配位化合物 該反應(yīng)多用于羧酸及其酯類的鑒別 第五章芳酸及其酯類藥物的分析 第二節(jié)鑒別試驗 一 與鐵鹽的反應(yīng) 69 貝諾酯具有潛在的芳伯氨基 加酸水解后產(chǎn)生游離芳伯胺基結(jié)構(gòu) 在酸性溶液中 與亞硝酸鈉試液進(jìn)行重氮化反應(yīng) 生成重氮鹽 再與堿性 萘酚偶合生成橙紅色沉淀 第五章芳酸及其酯類藥物的分析 第二節(jié)鑒別試驗 二 重氮化 偶合反應(yīng) 三 氧化反應(yīng) 甲芬那酸的硫酸溶液 加熱后顯黃色 并有綠色熒光 與重鉻酸鉀試液反應(yīng) 呈深藍(lán)色 隨即變?yōu)樽鼐G色 70 1 阿司匹林與碳酸鈉試液加熱水解 得水楊酸鈉及醋酸鈉 加過量稀硫酸酸化后 生成白色水楊酸沉淀 并產(chǎn)生醋酸的臭氣 分離的沉淀物可溶于醋酸銨試液中 于100 105 干燥后 熔點為156 161 2 雙水楊酯與氫氧化鈉試液煮沸 水解生成水楊酸鹽 對水楊酸鹽的鑒別反應(yīng)呈陽性 第五章芳酸及其酯類藥物的分析 第二節(jié)鑒別試驗 四 水解反應(yīng) 71 1 苯甲酸鹽可產(chǎn)生苯甲酸 苯甲酸受熱后可升華 此性質(zhì)可用于鑒別 如苯甲酸鈉置于干燥試管中 加少量硫酸 加熱 不炭化 試管壁上可觀察到白色升華物 2 含硫的藥物可分解后鑒別 如丙磺舒高溫加熱時 可產(chǎn)生二氧化硫的特殊臭味 與氫氧化鈉共熔融 可分解生成亞硫酸鈉 經(jīng)硝酸氧化成硫酸鹽 顯硫酸鹽反應(yīng) 第五章芳酸及其酯類藥物的分析 第二節(jié)鑒別試驗 五 分解產(chǎn)物的反應(yīng) 72 中國藥典 采用紫外分光光度法鑒別本類的藥物有 丙磺舒 布洛芬 貝諾酯 甲芬那酸 氯貝丁酯 二氟尼柳等 第五章芳酸及其酯類藥物的分析 第二節(jié)鑒別試驗 六 紫外分光光度法 73 中國藥典 采用紅外分光光度法鑒別苯甲酸 丙磺舒 甲芬那酸 水楊酸 阿司匹林 二氟尼柳 對氨基水楊酸鈉 貝諾酯以及布洛芬和氯貝丁酯 第五章芳酸及其酯類藥物的分析 第二節(jié)鑒別試驗 七 紅外分光光度法 苯甲酸的紅外吸收圖譜 溴化鉀壓片 74 藥物制劑中由于有大量的輔料存在 常對原料藥所采用的某些鑒別方法產(chǎn)生一定的干擾 可采用色譜法分離后進(jìn)行鑒別 薄層色譜法 TLC 設(shè)備簡單 操作方便 故較為常用 中國藥典 采用TLC法鑒別二氟尼柳膠囊 第五章芳酸及其酯類藥物的分析 第二節(jié)鑒別試驗 八 薄層色譜法 75 當(dāng)含量測定項下采用高效液相色譜法 HPLC 時 可直接使用含量測定項下記錄的色譜圖進(jìn)行鑒別 中國藥典 鑒別阿司匹林腸溶膠囊與泡騰片的方法如下 在含量測定項下記錄的色譜圖中 供試品溶液主峰的保留時間應(yīng)與對照品溶液主峰的保留時間一致 第五章芳酸及其酯類藥物的分析 第二節(jié)鑒別試驗 九 高效液相色譜法 76 一 合成工藝 第五章芳酸及其酯類藥物的分析 第三節(jié)特殊雜質(zhì)檢查 一 阿司匹林中特殊雜質(zhì)的檢查 77 二 檢查1 溶液的澄清度檢查碳酸鈉試液中的不溶物 此類不溶性雜質(zhì)包括未反應(yīng)的酚類 或水楊酸精制時溫度過高 發(fā)生脫羧副反應(yīng)而生成的苯酚 以及合成工藝中由其它副反應(yīng)生成的醋酸苯酯 水楊酸苯酯和乙酰水楊酸苯酯等 這些雜質(zhì)均不溶于碳酸鈉試液 而阿司匹林可溶于碳酸鈉試液中 利用雜質(zhì)與阿司匹林在碳酸鈉試液中的溶解性差異控制限量 具體方法取本品0 50g 加溫?zé)嶂良s45 的碳酸鈉試液10ml溶解后 溶液應(yīng)澄清 第五章芳酸及其酯類藥物的分析 第三節(jié)特殊雜質(zhì)檢查 一 阿司匹林中特殊雜質(zhì)的檢查 78 二 檢查2 水楊酸生產(chǎn)過程和貯藏過程中均可能引入雜質(zhì)水楊酸 由于水楊酸分子中的酚羥基在空氣中容易被氧化生成一系列對人體有害的醌式結(jié)構(gòu)的有色雜質(zhì) 因此在所有能引入水楊酸雜質(zhì)的藥物及制劑 游離水楊酸都是必須檢查的項目 中國藥典 2005年版 采用比色法和高效液相色譜法檢查游離水楊酸 第五章芳酸及其酯類藥物的分析 第三節(jié)特殊雜質(zhì)檢查 一 阿司匹林中特殊雜質(zhì)的檢查 79 一 合成工藝與間氨基酚的產(chǎn)生對氨基水楊酸鈉的合成工藝有很多 其中以間氨基酚為原料的生產(chǎn)工藝最為常見 因此在成品中可能含有未反應(yīng)完全的原料 另外 對氨基水楊酸鈉不穩(wěn)定 在潮濕的環(huán)境中 暴露日光或受熱時容易脫羧生成間氨基酚 間氨基酚在體內(nèi)可致癌 因此對氨基水楊酸鈉中需要對間氨基酚這一特殊雜質(zhì)進(jìn)行檢查 第五章芳酸及其酯類藥物的分析 第三節(jié)特殊雜質(zhì)檢查 二 對氨基水楊酸鈉中特殊雜質(zhì)的檢查 80 81 二 雙相滴定法及其原理利用間氨基酚易溶于乙醚而對氨基水楊酸鈉不溶于乙醚的特性 用乙醚提取后 在提取液中加入適量水和指示劑后 用鹽酸滴定液滴定 生成的間氨基酚鹽酸鹽不溶于乙醚層 以消耗一定量鹽酸滴定液來控制其限量 第五章芳酸及其酯類藥物的分析 第三節(jié)特殊雜質(zhì)檢查 二 對氨基水楊酸鈉中特殊雜質(zhì)的檢查 82 三 高效液相色譜法在此方法中 選用氫氧化四丁基銨為離子對試劑 同時采用磷酸鹽緩沖體系 檢測波長為254nm 反相離子對色譜法是指在采用反相分配色譜進(jìn)行分離可能離解生成有機(jī)離子的有機(jī)化合物時 在流動相或者在樣品中加入與有機(jī)離子帶相反電荷的有機(jī)物 使其與待分析的有機(jī)離子形成離子對然后進(jìn)行分析 從而調(diào)整色譜保留行為 提高樣品保留值和色譜峰的對稱性 第五章芳酸及其酯類藥物的分析 第三節(jié)特殊雜質(zhì)檢查 二 對氨基水楊酸鈉中特殊雜質(zhì)的檢查 83 一 合成工藝 第五章芳酸及其酯類藥物的分析 第三節(jié)特殊雜質(zhì)檢查 三 二氟尼柳中特殊雜質(zhì)的檢查 84 二 有關(guān)物質(zhì)檢查由于二氟尼柳有多條合成路線 因此可能存在多種合成中間體及副產(chǎn)物 且結(jié)構(gòu)與性質(zhì)相差較大 單一的檢測方法難以完全檢出有關(guān)物質(zhì) 因此 中國藥典 采用TLC 正相 和反相HPLC法 以自身對照法檢查有關(guān)物質(zhì)A和B 第五章芳酸及其酯類藥物的分析 第三節(jié)特殊雜質(zhì)檢查 三 二氟尼柳中特殊雜質(zhì)的檢查 85 一 合成工藝 第五章芳酸及其酯類藥物的分析 第三節(jié)特殊雜質(zhì)檢查 四 甲芬那酸中特殊雜質(zhì)的檢查 1 由于合成工藝中使用銅作催化劑 因此 中國藥典 規(guī)定檢查銅 采用原子吸收分光光度法 86 2 有關(guān)物質(zhì)的檢查 中國藥典 采用高效液相色譜法測定 第五章芳酸及其酯類藥物的分析 第三節(jié)特殊雜質(zhì)檢查 四 甲芬那酸中特殊雜質(zhì)的檢查 87 一 合成工藝 第五章芳酸及其酯類藥物的分析 第三節(jié)特殊雜質(zhì)檢查 五 氯貝丁酯中特殊雜質(zhì)的檢查 88 二 對氯酚的檢查 GC取本品10 0g 加氫氧化鈉試液20ml 振搖提取 分取下層液 用水5ml振搖洗滌后 留作揮發(fā)性物質(zhì)檢查用 上述水洗液并入堿性提取液中 用三氯甲烷振搖洗滌2次 每次5ml 棄去三氯甲烷液 加稀鹽酸使成酸性 用三氯甲烷提取2次 每次5ml 合并三氯甲烷提取液 并加三氯甲烷稀釋成10ml 作為供試品溶液 另取0 0025 對氯酚的三氯甲烷溶液作為對照品溶液 照氣相色譜法 用2m玻璃色譜柱 以甲基硅橡膠為固定液 涂布濃度為5 在柱溫160 測定 含對氯酚不得過0 0025 第五章芳酸及其酯類藥物的分析 第三節(jié)特殊雜質(zhì)檢查 五 氯貝丁酯中特殊雜質(zhì)的檢查 89 一 直接滴定法本類藥物的游離羧基有較強(qiáng)酸性 因此可用堿滴定液直接滴定 中國藥典 采用直接滴定法對苯甲酸 丙磺舒 水楊酸 二氟尼柳 雙水楊酯 布洛芬和阿司匹林原料藥的含量進(jìn)行測定 滴定應(yīng)該在不斷振搖下快速進(jìn)行 否則會因堿局部濃度過大引起阿司匹林水解 溫度控制在0 40 之間為宜 本法缺乏專屬性 易受水楊酸及醋酸的干擾 因此不宜用于水楊酸含量較高樣品的測定 第五章芳酸及其酯類藥物的分析 第四節(jié)含量測定 一 酸堿滴定法 90 二 水解后剩余滴定法利用阿司匹林在堿性溶液中易于水解的特性 加入定量過量的氫氧化鈉滴定液 加熱使其酯鍵水解 剩余氫氧化鈉滴定液用硫酸滴定液返滴定 堿液在受熱時易吸收二氧化碳 用酸返滴定時 酸滴定液的消耗將減少 使得測定結(jié)果偏高 故需在相同條件下用空白試驗校正 第五章芳酸及其酯類藥物的分析 第四節(jié)含量測定 一 酸堿滴定法 91 三 兩步滴定法1 阿司匹林片含量測定因為片劑中除加入了少量的酒石酸或枸櫞酸作穩(wěn)定劑外 制劑工藝中又有可能產(chǎn)生水楊酸與醋酸 因此不能直接采用氫氧化鈉滴定法或水解后剩余滴定法測定 而需要首先中和供試品中共存的各種酸 同時中和了阿司匹林的游離羧基 然后再照 水解后剩余滴定法 測定 因本法分兩步進(jìn)行 所以稱為 兩步滴定法 第五章芳酸及其酯類藥物的分析 第四節(jié)含量測定 一 酸堿滴定法 92 三 兩步滴定法2 氯貝丁酯含量測定氯貝丁酯具有酯結(jié)構(gòu) 可采用加堿水解后剩余滴定法測定其含量 但在合成過程中易引入酸性雜質(zhì) 從而使測定結(jié)果偏高 因此 為消除供試品中共存酸性雜質(zhì)的干擾 采用兩步滴定法測定 第五章芳酸及其酯類藥物的分析 第四節(jié)含量測定 一 酸堿滴定法 93 對氨基水楊酸鈉具有芳伯氨基 用鹽酸酸化后可與亞硝酸鈉定量發(fā)生重氮化反應(yīng) 生成重氮鹽 因此可以用亞硝酸鈉滴定法 永停法指示終點 測定對氨基水楊酸鈉及其制劑的含量 第五章芳酸及其酯類藥物的分析 第四節(jié)含量測定 二 亞硝酸鈉滴定法 94 苯甲酸鈉為芳酸堿金屬鹽 易溶于水 其水溶液呈堿性 可用酸堿滴定液滴定 但在滴定過程中析出的游離苯甲酸微溶于水 使溶液渾濁 且由于其具有一定的酸性 可形成一定的緩沖體系而使滴定終點pH突躍不夠明顯 干擾滴定終點的準(zhǔn)確判斷 因此 利用苯甲酸能溶于有機(jī)溶劑的性質(zhì) 在水相中加入與水不相混溶的有機(jī)溶劑 將滴定過程中產(chǎn)生的苯甲酸不斷萃取入有機(jī)溶劑中 降低苯甲酸在水相中的量 使滴定反應(yīng)完全 終點易于判斷 第五章芳酸及其酯類藥物的分析 第四節(jié)含量測定 三 雙相滴定法 95 一 直接紫外分光光度法如貝諾酯的測定方法如下 取本品適量 精密稱定 加無水乙醇溶解并定量稀釋制成約含7 5 g ml 1的溶液 照紫外 可見分光光度法 在波長240nm處測定吸光度 另取貝諾酯對照品 精密稱定 同法測定 計算 即得 第五章芳酸及其酯類藥物的分析 第四節(jié)含量測定 四 紫外分光光度法 96 二 離子交換 紫外分光光度法氯貝丁酯在波長226nm處有最大吸收 可用紫外 可見分光光度法測定含量 但對氯酚等有關(guān)雜質(zhì)亦有吸收 對測定有干擾 由于對氯酚 對氯苯氧異丁酸等顯酸性 可發(fā)生離解的性質(zhì) USP 29 采用陰離子交換色譜分離后 再用紫外 可見分光光度法測定含量 第五章芳酸及其酯類藥物的分析 第四節(jié)含量測定 四 紫外分光光度法 97 三 柱分配色譜 紫外分光光度法USP 29 采用柱分配色譜 紫外分光光度法測定阿司匹林膠囊中阿司匹林和水楊酸的含量 1 水楊酸限量測定色譜柱的制備標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備供試溶液的制備測定法 第五章芳酸及其酯類藥物的分析 第四節(jié)含量測定 四 紫外分光光度法 98 三 柱分配色譜 紫外分光光度法2 阿司匹林的含量測定色譜柱的制備填充劑為硅藻土3g和新制碳酸氫鈉液 1 12 2ml的混合物 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備取阿司匹林對照品 以冰醋酸的三氯甲烷溶液 1 100 為溶劑 制成含50 g ml 1的溶液 供試溶液的制備測定法 第五章芳酸及其酯類藥物的分析 第四節(jié)含量測定 四 紫外分光光度法 99 以 中國藥典 測定布洛芬緩釋膠囊為例 測定法取裝量差異項下的內(nèi)容物 混合均勻 精密稱取適量 約相當(dāng)于布洛芬0 1g 置200ml容量瓶中 加甲醇100ml 振搖30min 加水稀釋至刻度 搖勻 濾過 取續(xù)濾液20 l注入液相色譜儀 記錄色譜圖 另取布洛芬對照品適量 精密稱定 同法測定 按外標(biāo)法以峰面積計算 即得 第五章芳酸及其酯類藥物的分析 第四節(jié)含量測定 五 高效液相色譜法 100 經(jīng)臨床驗證 低劑量口服阿司匹林 ASA 可抑制血小板過度凝集 預(yù)防缺血性腦血管病的作用 而阿司匹林口服時劑量小 且容易水解 因此可以采用LC MS MS方法靈敏地進(jìn)行測定 樣品處理方法將血漿樣品于室溫下解凍并混勻后 取200 L加入1 5ml離心管中 再加入50 L1mol L 1的鹽酸和200 L的內(nèi)標(biāo) 混勻后加入600 L乙酸乙酯 振蕩1min 13000r min 1離心5min 取上層清液 氮?dú)獯蹈?加入300 L流動相復(fù)溶 10 L進(jìn)樣 第五章芳酸及其酯類藥物的分析 第五節(jié)體內(nèi)藥物分析 一 血漿中阿司匹林和水楊酸的LC MS MS定量測定法 101 結(jié)果表明 HPLC MS MS測定方法靈敏度高 特異性強(qiáng) 滿足了準(zhǔn)確測定人血漿中阿司匹林和水楊酸濃度的要求 第五章芳酸及其酯類藥物的分析 第五節(jié)體內(nèi)藥物分析 一 血漿中阿司匹林和水楊酸的LC MS MS定量測定法 102 第五章芳酸及其酯類藥物的分析 第五節(jié)體內(nèi)藥物分析 二 人血漿中布洛芬對映體的柱切換高效液相色譜測定法 布洛芬是一類應(yīng)用廣泛的非甾體解熱鎮(zhèn)痛藥 其左右旋體在體內(nèi)的藥理活性及代謝過程存在顯著的差異 體外實驗表明其右旋體的藥理作用是左旋體的160倍 但在體內(nèi)僅為1 4倍 主要原因是在體內(nèi)無活性的R 布洛芬轉(zhuǎn)化為活性的S 布洛芬 因此布洛芬對映體的拆分測定十分必要 采用手性色譜柱來檢測手性異構(gòu)體是一種非常有效的分析方法 實驗結(jié)果顯示柱切換HPLC法測定人血漿中布洛芬對映體濃度 血漿用量少 重現(xiàn)性好 準(zhǔn)確度高 血樣預(yù)處理操作簡便易行 103 第五章芳酸及其酯類藥物的分析 第五節(jié)體內(nèi)藥物分析 三 血漿中二氟尼柳的固相萃取 反相HPLC測定法 采用固相萃取方法 以大孔網(wǎng)格樹脂小柱凈化樣本 用快速 靈敏的反相HPLC法測定人血