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文檔簡介
將樣品點在距濾紙一端約2 3cm的某一處 該點稱為原點 然后在密閉容器中層析溶劑沿濾紙的一個方向進(jìn)行展層 這樣混合氨基酸在兩相中不斷分配 由于分配系數(shù) Kd 不同 結(jié)果它們分布在濾紙的不同位置上 物質(zhì)被分離后在紙層析圖譜上的位置 可用比移值 Rf 來表示 所謂Rf 是指在紙層析中 從原點至氨基酸停留點 又稱為層析點 中心的距離 X 與原點至溶劑前沿的距離 Y 的比值 如圖 在一定條件下 如溫度 展層劑的組成 層析紙質(zhì)量等不變 某種物質(zhì)的Rf值是常數(shù) 因此可作為定性依據(jù) 由于氨基酸無色 可利用茚三酮反應(yīng)使氨基酸層析斑點顯色 從而作定性分析 本實驗利用紙層析法分離氨基酸 三 操作 1 在層析缸中裝入展層劑 其高度約1 5 2cm 2 準(zhǔn)備濾紙 戴上手套 取層析濾紙 長22cm 寬14cm 一張 在紙的一端距邊緣3cm處用鉛筆畫一條直線 在此直線上每間隔2cm作一記號 為點樣位置 即原點 如圖 注意事項 手不能直接接觸濾紙 直線與底邊平行 3 點樣 用毛細(xì)管依次將Lys 賴 Gly 甘 Pro 脯 Val 纈 Leu 亮 和混合樣品分別點在這6個位置上 點樣點干后再點一次 注意每點在紙上擴(kuò)散的直徑 最大不超過3mm 紙層析點樣標(biāo)準(zhǔn)圖 LysGlyProValLeu混合樣品 4 展層 將點好樣的濾紙 點樣面朝外 卷成筒狀 用透明膠紙粘接或用線縫好 紙的兩邊不能接觸 將濾紙直立于層析缸中 注意 點樣的一端在下 展層劑的液面需低于點樣線1cm 濾紙勿與缸壁接觸 蓋好層析缸蓋 進(jìn)行展層 待溶劑上升15 20cm時 取出濾紙 用鉛筆描出溶劑前沿界線 電吹風(fēng)吹干 5 顯色 用噴霧器均勻噴上0 1 水合茚三酮正丁醇溶液 然后用電吹風(fēng)吹干即可顯出各層析斑點 卷成筒狀的濾紙 四 計算 用直尺測量并計算出各種氨基酸的Rf值 試劑和器材 1 試劑 1 氨基酸溶液 0 5 m V 的賴氨酸 脯氨酸 纈氨酸 苯丙氨酸 亮氨酸溶液及它們的混合液 各組分的濃度均為0 5 2 展層劑 正丁醇 冰醋酸 水 4 1 3 V V 3 顯色劑 0 1 m V 水合茚三酮正丁醇溶液 2 器材
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