微生物實驗室規(guī)范指導原則.ppt

微生物實驗室規(guī)范指導原則 影響藥品微生物的檢驗結(jié)果的因素 1 實驗人員在取樣或試驗過程中污染微生微 2 生物學分析方法本身的誤差 3 樣品中或環(huán)境中微生物分布不均勻等因素在藥品檢驗中 為保證微生物試驗數(shù)據(jù)的可靠性和重現(xiàn)性 藥品微生物實驗室必須使用經(jīng)驗證的檢測方法并按良好的實驗室規(guī)范指導試驗 藥品微生物實驗室規(guī)范包括以下幾個方面 人員 培養(yǎng)基 菌種 實驗室的布局和運行 設備 文件 實驗記錄 結(jié)果的判斷等 人員培訓從事藥品微生物試驗工作的人員均要受到教育 培訓及具備相關(guān)工作的經(jīng)驗 微生物實驗人員應具備微生物學或相近專業(yè)知識的教育背景 崗前培訓1 根據(jù)實驗人員的崗位及職責對其進行相應的培訓2 工作所必需的設備操作的培訓3 微生物檢驗技術(shù)的培訓4 實驗室生物安全等方面的培訓經(jīng)考核合格后方可上崗 同時 實驗室應制定所有級別實驗人員的繼續(xù)教育計劃 微生物實驗室管理人員的培訓 1 微生物實驗室管理人員培訓包括 管理技能 實驗室安全 試驗按排 預算 實驗室研究 實驗結(jié)果評估和數(shù)據(jù)偏差的調(diào)查及技術(shù)報告書寫等 微生物實驗室設施規(guī)劃和運行微生物實驗室的規(guī)劃和設計應充分考慮到微生物操作規(guī)范和實驗室安全操作的要求 合理的規(guī)劃及活動區(qū)域的劃分將提高微生物實驗室操作的可靠性 無菌室布局無菌室應遠離交通干道 廁所及污染區(qū) 應選上 下水道及其他安裝適宜的位置 無菌室的配套設施包括洗刷 培養(yǎng)基配制 消毒滅菌 滅菌物品存放和傳輸 培養(yǎng)間 結(jié)果觀察 試驗菌實驗和辦公室等 要集中 減少污染 便于管理和使用 微生物實驗室的規(guī)劃實驗室應劃分成潔凈區(qū) 無菌區(qū)和培養(yǎng)區(qū)等 藥品微生物檢驗的實驗室應符合 中國藥典 無菌檢查 微生物限度檢查試驗環(huán)境的要求1 獨立設置的潔凈室 區(qū) 或隔離系統(tǒng)2 細菌 真菌 實驗室3 培養(yǎng)室4 培養(yǎng)基及實驗用具準備 包括滅菌 區(qū)5 樣品接收和儲藏區(qū) 標準菌株儲藏區(qū)6 污染物處理區(qū)7 文檔處理區(qū)等輔助區(qū)域?qū)ι鲜鰠^(qū)域明確標識 控制程序和操作規(guī)程 實驗室應建立控制程序和標準操作規(guī)程 無菌抽樣特別是無菌生產(chǎn)的產(chǎn)品 應有非常嚴格的無菌防護措施 避免在抽樣過程中造成微生物的污染 隔離器技術(shù)也適于微生物試驗或無菌試驗 隔離器也應定期對試驗區(qū)的潔凈度和滅菌效果等功能進行驗證 實驗室使用的消毒劑應無菌對并定期更換 污染微生物的樣品 需進一步分析鑒定 均應在陽性菌實驗室進行 被檢樣品應有傳遞 儲存 處置和識別管理程序 待驗樣品應在合適的條件下儲存 應明確規(guī)定和記錄儲存條件 廢棄樣品和有害廢棄物應制定處理規(guī)程 設備實驗室應配備與檢驗能力和工作量相適應的儀器設備 其種類和型號 測量范圍和準確度等應滿足檢驗的要求 設備的安裝和布局應便于操作 易于維護 清潔和校準 儀器設備管理制度和操作規(guī)程 1 實驗室應建立完整的儀器設備管理制度 為保證設備處于良好工作狀態(tài) 應定期維護和期間核查 并保存相關(guān)記錄 重要的儀器設備 應由專人負責 保證其運行狀態(tài)正常和受控 同時應有相應的備用設備以保證試驗菌株和微生物培養(yǎng)的連續(xù)性 3 對于一些容易污染微生物的儀器設備 無菌器具應有明確標識及標準的操作規(guī)程 記錄 規(guī)范化管理記錄檔案將充分證明試驗規(guī)范化和檢驗結(jié)果的真實性 包括以下幾個方面 1 試驗人員2 試驗設備3 培養(yǎng)基及稀釋液4 試驗操作程序 實驗記錄的保存 完整的實驗記錄 以便確認數(shù)據(jù)的完整性 實驗記錄應是原始記錄 為保證實驗記錄的真實性 微生物實驗室的質(zhì)量控制 制定嚴格的微生物實驗室質(zhì)量控制程序1 培養(yǎng)基的質(zhì)量和規(guī)范化操作2 菌種的保藏3 實驗結(jié)果的正確判斷 培養(yǎng)基的制備和質(zhì)量控制 1 培養(yǎng)基的制備方法2 貯藏條件3 質(zhì)量控制試驗 1 培養(yǎng)基制備 培養(yǎng)基可按處方制備也可使用按處方生產(chǎn)的符合規(guī)定的商品化成品培養(yǎng)基 配制時應按使用說明上的要求操作確保培養(yǎng)基的質(zhì)量符合要求 配制培養(yǎng)基最常用的溶劑是純化水 特殊情況下需要用去離子水和蒸餾水 對熱敏感的培養(yǎng)基應用滅菌水和無菌容器配制與分裝 配制時若需加熱助溶應注意溫度不要過高 2 培養(yǎng)基的滅菌培養(yǎng)基滅菌方法和條件 應按說明書和驗證試驗的參數(shù) 采用不同的方法進行滅菌 通常多用流通蒸汽滅菌濾膜過濾除菌 過濾器應通過驗證 每批培養(yǎng)基滅菌后均應測定PH值除非經(jīng)驗證表明培養(yǎng)基的PH允許的變化范圍很寬 否則 培養(yǎng)基的PH的范圍不得超過規(guī)定的 0 2 制成平板或分裝于試管的培養(yǎng)基檢查 固體培養(yǎng)基檢查 氧化還原指示劑檢查 詳細記錄 三 培養(yǎng)基的貯藏商品化培養(yǎng)基應根據(jù)使用說明書上的要求進行儲存 所采用的保藏和運輸條件應使培養(yǎng)基最低限度失去水分并提供機械保護 自配培養(yǎng)基應標記培養(yǎng)基的名稱 批號 配置日期并在驗證的條件下儲存 1 不得儲藏在高壓菌器中 2 制備好的培養(yǎng)基應保存在2 25 避光的環(huán)境 3 保存于密閉容器中 可防止水分流失以延長保存時間 3 置冰箱保存一般不超過一周 瓊脂培養(yǎng)基不得在0 或0 以下存放 若要延長保存 保存期需經(jīng)驗證保存 4 固體培養(yǎng)基滅菌后的再融化應在加熱的水浴中或采用流通蒸汽進行 只允許一次 融化的培養(yǎng)基應放在45 50 的水浴中 不得超過8小時 四 培養(yǎng)基的質(zhì)量控制為保證培養(yǎng)基的質(zhì)量對所配置的培養(yǎng)基均應進行質(zhì)量控制試驗 1 實驗室配制的培養(yǎng)基的常規(guī)質(zhì)控項目有 pH值測定 適用性試驗 定期的穩(wěn)定性檢查 培養(yǎng)基有效期的確定 2 當一批培養(yǎng)基的質(zhì)控試驗不符合規(guī)定 應查找造成不合格的原因 避免問題的重復出現(xiàn) 處理后應重新進行質(zhì)控試驗 合格后再使用 3 用于環(huán)境監(jiān)控的培養(yǎng)基 最好終端滅 否則在使用前應進行100 的預培養(yǎng) 避免出現(xiàn)假陽性結(jié)果 4 培養(yǎng)基的有效期 是指已通過促生長試驗的培養(yǎng)基在整個有效期內(nèi)均需符合這些相應的標準 5 對配制培養(yǎng)基的過程作詳細的記錄 常用菌種管理和保存 菌種的保存 微生物實驗過程中 實驗菌株可能是最敏感的 因為它們的生物活性和特性依賴于合適的試驗操作和貯藏條件 菌種的保存和處理 1 實驗室菌種的處理和保藏的程序應標準化 使盡可能減少菌種污染和生長特性的改變 2 工作菌種的傳代次數(shù)應嚴格控制 不得超過5代 從菌種保藏中心獲得的標準菌株為第0代 防止過度的傳代造成菌種變異 工作菌株不可替代標準菌株 標準菌株的商業(yè)衍生物僅可用作工作菌株 未使用完的菌懸液或被污染 變異的菌種應滅菌后丟棄 菌種的管理實驗室必須建立菌種保存和使用文件化的程序管理制度 1 朔源2 貯藏條件3 培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件4 鑒定5 銷毀的記錄6 其它需要的程序 菌懸液的制備與保存采用經(jīng)驗證的方法制備菌懸液 除另有規(guī)定外 微生物限度試驗用菌懸液的制備同培養(yǎng)基靈敏度試驗 常用菌種保藏方法菌種保藏方法有多種常用的保藏方法有 瓊脂斜面保藏方法 半固體培養(yǎng)基保藏法及液體培養(yǎng)基低溫保藏方法 試驗結(jié)果的判斷一 影響試驗結(jié)果的因素 活微生物