HPLC-法測定黃芩苷分散片的含量及有關(guān)物質(zhì).doc

HPLC法測定黃芩苷分散片的含量及有關(guān)物質(zhì)Determination of Baicalin and its Related substances in Dispersible tablets by HPLC楊 清YANG Qing湖南省藥品審評認證與不良反應(yīng)監(jiān)測中心（中國 410013）Center for Drug Evaluation and Authentication,ADR monitoring of hunan(China 410013)中圖分類號：R917 文獻標識碼：A 文章編號：18180086（2008）03摘 要： 目的 采用高效液相色譜法測定黃芩苷分散片含量及有關(guān)物質(zhì)。方法 C18（Polaris 4.6150mm，5）色譜柱，以甲醇-水-磷酸（47：53：0.2）為流動相；檢測波長280nm；流速1.0mlmin；柱溫30；進樣量10l。結(jié)果 分散片中輔料對主藥測定無干擾，黃芩苷與有關(guān)物質(zhì)完全分離。在12.68114.12g/ml范圍內(nèi)峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系(r=0.9999，n=5)。平均回收率為99.3%（RSD=0.33%, n=6）。結(jié)論 本方法簡便，迅速，準確，專屬性強。關(guān)鍵詞：黃芩苷；分散片；高效液相色譜法；含量測定；有關(guān)物質(zhì) Abstract： Objective To establish an HPLC-UV method for determination of Baicalin and its related substances in dispersible tablets. Methods C18（Polaris 4.6150mm，5） column was used. The mobile phase was consisted of methanol-water-phosphoric acid (47530.2). The flow rate was 1.0 mlmin with The detection wavelength was at 280nm. The column temperature was 30. The injection volume was 10l.Results The linear range for the content of Baicalin was 0.12681.1412g ,the corretation coeffient was 1.0(n=5); The average recovery was 99.3%，and its RSD was 0.66%(n=6).Conclusion The method is simple， sensitive，accurate and specific.Key words: Baicalin；Dispersible Tablets； HPLC； Determination； Related Substances黃芩苷分散片系黃芩苷與適宜輔料制成的分散片，用于急、慢性肝炎、遷延性肝炎的輔助治療。原劑型為普通片劑，崩解慢，藥物溶出速度慢，不能滿足患者希望藥物迅速起效的需求。而分散片是近年來研究應(yīng)用較多的一種速釋固體劑型，其兼有片劑和液體制劑的優(yōu)點，并克服兩者的不足。原劑型收載于國家藥品監(jiān)督管理局國家藥品標準化學藥品地標升國標第十二冊，原質(zhì)量標準規(guī)定了黃芩苷的含量測定及兩個化學反應(yīng)鑒別。在原標準的基礎(chǔ)上，采用高效液相色譜法測定黃芩苷分散片的含量及其有關(guān)物質(zhì)，方法專屬性強，靈敏度高，重復性好。1儀器與試藥 HP1100高效液相色譜儀（Agilent），TL9900數(shù)據(jù)處理軟件。甲醇為色譜純試劑，水為重蒸餾水；黃芩苷對照品（由中國藥品生物制品檢定所提供，批號為715-200211）；黃芩苷分散片（研制單位自制）。2實驗方法2.1 色譜條件 色譜柱：C18（Polaris 4.6150mm，5）；流動相：甲醇-水-磷酸（47：53：0.2）；流速1.0 ml/min；檢測波長280nm；柱溫30；進樣量10l。2.2 系統(tǒng)適用性實驗 取處方量輔料適量和黃芩苷分散片，按“2.9”項下操作，記錄色譜圖。另取經(jīng)60減壓干燥6小時的黃芩苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含60g的溶液，取10l注入液相色譜儀，記錄色譜圖。取黃芩苷適量，分別進行酸、堿、高溫（熱）、光照破壞處理后，各進樣10l，色譜圖見圖1。實驗結(jié)果表明，在“2.1”項的色譜條件下，輔料對測定無干擾，黃芩苷經(jīng)酸、堿、高溫、光照破壞后，均有明顯的分解產(chǎn)物峰，但分解產(chǎn)物均與主峰有良好的分離度，不影響測定。色譜柱理論塔板數(shù)按黃芩苷計算不得少于3000。圖1 黃芩苷HPLC圖A-空白輔料溶液；B-對照品溶液；C-片劑溶液；D-堿破壞；E-酸破壞；F-高熱破壞；G-光照破壞；1-黃芩苷2.3 線性實驗取黃芩苷對照品12.68mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，作為貯備液（126.8g/ml）。精密量取貯備液1、3、5、7、9ml，分別置10ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，各取10l進樣，記錄色譜圖，以濃度（C，g）為橫坐標，峰面積（A）為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程：A=41841876C+219813，r=1.0，可見在黃芩苷0.12681.1412g范圍內(nèi)線性良好。2.4 精密度實驗 配制濃度約為60g/ml的黃芩苷對照品溶液，進樣10l，連續(xù)進樣5次，記錄峰面積，RSD為0.23%。2.5 重現(xiàn)性實驗 取040316批樣品，按“2.9”項下操作平行測定5次，計算其含量分別為標示量的99.54%、98.97%、98.79%、99.66%、98.97%，平均值為99.19%，RSD為0.4%。2.6 穩(wěn)定性實驗 按“2.9”項下方法，取供試品溶液一份，于室溫下放置，于0，2，4，8，12小時，分別進樣1次，進樣量為10l，記錄峰面積，RSD=0.66%，說明樣品溶液在12h內(nèi)較穩(wěn)定。2.7 回收率實驗取黃芩苷對照品與空白輔料，按處方工藝，制成主藥濃度為標示濃度的80%、100%、120%各二份，按“2.9”項下方法，制成供試品溶液，精密取溶液10l進樣，記錄峰面積，并計算回收率，結(jié)果分別為99.35%、99.15%、98.98%、98.38%、100.17%、99.96%，平均回收率99.33，RSD為0.66%（n=6）。2.8 最低檢測限 在選定的色譜條件下，按信噪比為3對最低檢測限進行測定，結(jié)果表明，最小檢出量1.5ng。2.9 含量測定取經(jīng)60硅膠干燥器中減壓干燥至恒重的黃芩苷對照品適量，加甲醇制成每1ml中約含60g的溶液，作為對照品溶液；另取本品10片，精密稱定，研細，精密稱取適量（約相當于黃芩苷6mg），置100ml量瓶中，加甲醇適量，超聲30分鐘使溶解，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。精密吸取對照溶液和供試品溶液各10l，注入高效液相色譜儀，測定，按外標法以峰面積計算，即得。3批樣品的含量分別為標示量的99.2%、98.8%、98.6%。2.10 有關(guān)物質(zhì)測定取本品5片，研細，精密稱取適量(約相當于黃芩苷5mg)，置25ml量瓶中，加甲醇適量，超聲處理使溶解，放冷，加甲醇稀釋至刻度，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液 (約含黃芩苷0.2mg/ml)。取經(jīng)60硅膠干燥中減壓干燥至恒重的黃芩苷對照品適量，加甲醇制成每1ml中約含20g的溶液，作為對照溶液。精密吸取對照溶液10l ,注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)儀器靈敏度，使主成分峰高為記錄儀滿制度的1525%，再量取供試品溶液10l注入液相色譜儀，記錄色譜圖（圖2）至主成分峰保留時間的2倍，如有雜質(zhì)峰，量取各雜質(zhì)峰面積之和, 與對照溶液的主峰面積相比較。圖2 黃芩苷有關(guān)物質(zhì)HPLC圖3 討論3.1 流動相比例的選擇 實驗中曾用不同比例的甲醇-水-磷酸（42：58：0.2，50：50：0.2，47：50：0.2）為流動相，但分離效果差（與前后雜質(zhì)峰未達基線分離）；改用甲醇-水-磷酸（47：53：0.2）為流動