2019_2020學(xué)年高中生物第1章無菌操作技術(shù)實(shí)踐素能提升課學(xué)案蘇教版選修1.docx

無菌操作技術(shù)實(shí)踐素能提升課一、微生物的分離與鑒定微生物的分離方法有很多種，本專題中常用的是平板劃線法、涂布平板法、微生物的選擇培養(yǎng)等。針對(duì)不同微生物的特點(diǎn)選擇不同的方法，對(duì)目的微生物進(jìn)行篩選。以下是尿素分解菌和纖維素分解菌的分離與鑒定比較。項(xiàng)目尿素分解菌的分離與鑒定纖維素分解菌的分離與鑒定分離選擇條件利用尿素為唯一氮源利用纖維素為唯一碳源鑒定方法培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，變紅色在以纖維素為唯一碳源的培養(yǎng)基上，利用剛果紅染色法，出現(xiàn)透明圈鑒定原理細(xì)菌等微生物合成脲酶，將尿素分解產(chǎn)生NH3，使pH升高，加入酚紅變紅色分解纖維素的微生物產(chǎn)生纖維素酶，將纖維素分解為纖維二糖或葡萄糖，使纖維素剛果紅復(fù)合物降解而出現(xiàn)透明圈步驟土壤取樣制備培養(yǎng)基樣品梯度稀釋涂布平板培養(yǎng)觀察進(jìn)一步鑒定土壤取樣制備培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)富集培養(yǎng)梯度稀釋涂布培養(yǎng)剛果紅染色法挑取菌落進(jìn)一步鑒定二、純化細(xì)菌的方法1倒平板與涂布平板法的操作(1)倒平板操作(2)涂布平板操作將涂布器浸在盛有酒精的燒杯中 取少量菌懸液(不超過0.1 mL） 滴加到培養(yǎng)基表面將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃， 用涂布器將菌懸液均勻地涂布在待酒精燃盡后，冷卻810 s 培養(yǎng)基表面，涂布時(shí)可轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿使涂布均勻2兩種純化細(xì)菌的方法比較項(xiàng)目?jī)?yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)適用范圍平板劃線法可以觀察菌落特征，對(duì)混合菌進(jìn)行分離不能計(jì)數(shù)適用于好氧菌稀釋涂布平板法可以計(jì)數(shù)，可以觀察菌落特征吸收量較少，較麻煩，平板不干燥，效果不好，容易蔓延適用于厭氧菌和兼性厭氧菌三、影響植物組織培養(yǎng)過程的幾種主要因素1培養(yǎng)材料不同的植物組織，培養(yǎng)的難易程度差別很大，容易進(jìn)行無性繁殖的植物也容易進(jìn)行組織培養(yǎng)。同一種植物材料，材料的年齡、保存時(shí)間的長(zhǎng)短對(duì)培養(yǎng)也有影響。幼齡、保存時(shí)間短的植物材料容易培養(yǎng)成功。菊花的組織培養(yǎng)，一般選擇未開花植株的莖上部新萌生的側(cè)枝。2無菌條件培養(yǎng)基上有細(xì)菌等微生物存在時(shí)，它們比植物細(xì)胞生長(zhǎng)、繁殖得更快，而且它們會(huì)產(chǎn)生毒素，使培養(yǎng)的植物細(xì)胞很快中毒死亡。因此在培養(yǎng)過程中要求進(jìn)行一系列的消毒、滅菌，并且要求無菌操作。3植物激素在配制好的MS培養(yǎng)基中，常常需要添加植物激素。其中生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素是啟動(dòng)細(xì)胞分裂、脫分化和再分化的關(guān)鍵性激素。植物激素的濃度、使用的先后順序以及用量的比例等，都會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。1在進(jìn)行分離分解尿素的細(xì)菌的實(shí)驗(yàn)時(shí)，甲同學(xué)從培養(yǎng)基上篩選出大約150個(gè)菌落，而其他同學(xué)只篩選出大約50個(gè)菌落。某同學(xué)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生的原因可能有()土樣不同培養(yǎng)基污染操作失誤沒有設(shè)置對(duì)照ABC DA某同學(xué)從培養(yǎng)基上篩選出的菌落較多，存在多種原因，如土樣不同、培養(yǎng)基可能被雜菌污染或操作過程失誤混入雜菌造成污染等。2下列有關(guān)平板劃線操作的說法正確的是()A使用已滅菌的接種環(huán)、培養(yǎng)皿，操作過程中不再滅菌B打開含菌種的試管需通過火焰滅菌，取出菌種后需馬上塞上棉塞C將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，劃三至五條平行線即可D最后將平板倒置，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)D在培養(yǎng)基上接種時(shí)，一定要做到無菌操作，以防止雜菌污染影響實(shí)驗(yàn)或研究的結(jié)果。在酒精燈火焰附近約10 cm的四周為無菌區(qū)，因而含菌種試管和待接種試管管口不能離開火焰附近，接種環(huán)、棉塞也不能離開火焰附近。接種完畢之后為了防止菌體污染，保證安全，要用火焰灼燒管口和接種環(huán)，立即蓋上皿蓋。為防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基造成污染，應(yīng)將平板倒置。3菊花的組織培養(yǎng)需要嚴(yán)格的無菌操作，下列說法不正確的是()A培養(yǎng)基連同其他器械一起進(jìn)行高壓蒸汽滅菌B幼苗要先移植到消過毒的蛭石或者珍珠巖等環(huán)境下生活一段時(shí)間C用于植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基同樣適合于某些微生物的生長(zhǎng)，一旦感染雜菌則前功盡棄D將菊花莖段插入時(shí)應(yīng)注意方向，不應(yīng)倒插，是為了防止雜菌污染D植物的組織培養(yǎng)需要嚴(yán)格的無菌操作，將菊花莖段插入時(shí)，不應(yīng)倒插是因?yàn)榈共宓那o段不能形成愈傷組織，而不是為了防止雜菌污染。4美國科學(xué)家斯圖爾德應(yīng)用植物組織培養(yǎng)技術(shù)，將二倍體胡蘿卜韌皮部的一些細(xì)胞進(jìn)行離體培養(yǎng)，最終發(fā)育成完整的新植株(如圖)。關(guān)于這一科學(xué)事實(shí)，下列敘述中錯(cuò)誤的是()A該實(shí)驗(yàn)證明了植物細(xì)胞具有全能性B在此過程必須確保無菌操作C韌皮部細(xì)胞通過減數(shù)分裂增加數(shù)目D此種生殖產(chǎn)生的后代能保持親本的性狀C該實(shí)驗(yàn)是利用胡蘿卜的體細(xì)胞發(fā)育成完整的植株，因此體現(xiàn)了植物細(xì)胞的全能性；植物組織培養(yǎng)技術(shù)是一種無性繁殖方式，因此后代能保持親本的性狀；韌皮部細(xì)胞屬于體細(xì)胞，體細(xì)胞依靠有絲分裂增加細(xì)胞的數(shù)目。5某化工廠的污水池中含有一種有害的難以降解的有機(jī)化合物A。研究人員用化合物A、磷酸鹽、鎂鹽以及微量元素配制的培養(yǎng)基，成功篩選到能高效降解化合物A的細(xì)菌(目的菌)。實(shí)驗(yàn)的主要步驟如圖所示，請(qǐng)分析回答下列問題：(1)培養(yǎng)基中加入化合物A的目的是_，這種培養(yǎng)基屬于_培養(yǎng)基。(2)“目的菌”生長(zhǎng)所需的氮源和碳源是來自培養(yǎng)基中的_。實(shí)驗(yàn)需要振蕩培養(yǎng)，由此推測(cè)“目的菌”的代謝類型是_。(3)在上述實(shí)驗(yàn)操作過程中，獲得純凈“目的菌”的關(guān)鍵是_。(4)轉(zhuǎn)為固體培養(yǎng)基時(shí)，常采用平板劃線法進(jìn)行接種，此過程中所用的接種工具是_，操作時(shí)采用_滅菌的方法。(5)如何確認(rèn)培養(yǎng)基是否合格？_。解析欲篩選可降解有機(jī)物A的微生物，需配制只以有機(jī)物A為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基，以保障目的菌的生長(zhǎng)，抑制非目的菌的生長(zhǎng)繁殖；若需“振蕩”培養(yǎng)，表明該目的