分光光度法測定食品中亞硝酸鹽的不確定度評定.doc

分光光度法測定食品中亞硝酸鹽的不確定度評定1、目的 對用分光光度法測定結果的不確定度進行分析，找出影響不確定度的因素，對不確定度進行評定，給出不確定度。2、測量方法 樣品經沉淀脂肪和蛋白質后，進行過濾。加入N-1-萘基-乙二胺二鹽，使其顯紫紅色，然后用分光光度計在538nm波長下測其吸光度。將測得的吸光度與亞硝酸鈉標準系列溶液的吸光度進行比較就可以計算出樣品的亞硝酸鹽含量。3、主要儀器與試劑 電子天平：AA-250型，美國丹法特儀器公司 分光光度計：UV755B 單標線吸管：20 mL，A級 容量瓶：100 mL，A級4、紫外分光光度法測定樣品中亞硝酸鹽含量的數學模型亞硝酸鹽含量（以亞硝酸鈉計），mg/kg= （1）5、不確定度來源分析 從檢測過程和數學模型分析，樣品中亞硝鹽含量測定結果不確定度來源于：（1）測量重復性標準不確定度分量u1；（2）天平示值誤差引起的不確定度分量u2；（3）V1容積誤差引起的不確定度分量u3；（4）V2容積誤差引起的不確定度分量u4； (5)由標準曲線求得亞硝酸鈉含量m（分光光度測定）引起的不確定度分量u5。6、標準不確定度分量的計算6.1測量重復性標準不確定度分量u1 表1為同一批樣品按照GB5009.33-2010重復測定6次的結果。表1項目 次數123456吸光度0.0360.0340.0330.0350.0340.0340.0360.0330.0330.0340.0340.0340.0370.0340.0330.0340.0350.035吸光度平均值0.0360.0340.0330.0340.0340.034相當于氮質量，g0.47250.44560.43220.44560.44560.4456稱樣量，g2.30812.13162.08132.16152.20322.1624亞硝酸鹽含量含量（以亞硝酸鈉計），mg/kg5.0395.1525.1175.0814.9845.079平均值（）5.08單次測量結果的標準偏差：=0.059mg/Kg則u1rel=0.038/5.17=0.00746.2天平示值誤差引起的不確定度分量u2rel 實際使用的天平經有關部門校準，按均勻分布，其不確定度據電子天平檢定證書，天平最大允許誤差為1mg，四角誤差為 2mg，重復性誤差為 2mg，按正態(tài)分布考慮，則有：=9.99910-4(g)則相對不確定度：4.59810-46.3 v1容積誤差引起的不確定度分量U3rel100mL容量瓶最大允許誤差為0.10mL(A級)，按均勻分布，其不確定度為U3=0.10/= 0.0578 mL, 則相對不確定度：U3rel=6.4 v2容積誤差引起的不確定度分量U4rel 20mL單表線吸管最大允許誤差為0.030mL（A級），按均勻分布，不確定度為U4=0.030/=0.018mL, 則相對不確定度：=6.5由標準曲線求得亞硝酸鈉含量C（分光光度測定）引起的不確定度分量u7rel C的不確定度又兩個部分構成，一為由標準溶液的濃度吸光度擬和的直線求得C的量所產生的不確定度；二是由標準儲備液配置成標準溶液時所產生對C的測量帶來的不確定度。6.5.1 標準溶液的濃度吸光度擬和的直線求得C的量所產生的不確定度該實驗是用紫外可見分光光度計測量一些列亞硝酸鈉溶液，以試劑空白為參比，對個不同濃度亞硝酸鈉標準溶液進行3次重復測定，其測量數據如表2所示。表2 不同濃度度亞硝酸鈉標準溶液測定結果xi/(g/100mL)00.200.400.600.801.001.502.00yi(A)0.0000.0150.0310.0450.0620.0750.1120.1480.0000.0150.0310.0450.0610.0740.1140.1470.0000.0140.0300.0440.0620.0760.1130.1480.0000.0150.0310.0450.0620.0750.1130.148計算相關系數r值，若r值大于0.995則表明y與x之間成線性關系。（1） 算y對x的回歸直線y=a+bxa) 斜率b b) 截距ac) 回歸直線根據所求r值，可看出x和y成線性關系，其回歸直線（即標準曲線）方程為 y=0.0745x0.0008（2） 計算回歸直線的標準偏差（即y殘差的標準偏差）Sy/x 式中 yij儀器的各點響應值； yi回歸直線的計算值；n測量點的個數；m每個測量點重復測量的次數；mn-2自由度計算各個yi和yij yi值，如表2所示。表2 中間結果 xiyij(A) yi(A) yijyi(A)(yijyi)2(A2)00.0000.0000.0010.00030.00030.0003-0.0003-0.0003-0.0002910-8910-8410-80.20.0150.0150.0140.01470.01470.01470.00030.0003-0.0007910-8910-84910-80.40.0310.0310.0300.03070.03070.03070.00030.0003-0.0007910-8910-84910-80.60.0450.0450.0440.04470.04470.04470.00030.0003-0.0007 910-8910-84910-80.80.0620.0610.0620.06170.06170.06170.0003-0.00070.0003910-84910-8910-81.00.0750.0740.0760.07500.07500.07500.0013-0.00100.00100.01.010-6110-61.50.1120.1140.1140.11330.11330.1133-0.0013 0.00070.000716910-8491084910-82.00.1480.1470.1480.14770.14770.14770.0003-0.0007 0.0003 910-84910-8910-8g = 上式中，P為對樣品進行分光光度測量的次數，n總為對標準系列測定的總次數。6.5.2 標準溶液配置成標準溶液時所產生對C的測量帶來的不確定度。分光光度法的測定過程：取1.00mL標準溶液用水定容至100mL容量瓶中。從亞硝酸鈉標準使用液中吸取一系列溶液50mL比色管中，配置標準系列溶液，在分光光度計上讀取其吸光度，通過線性回歸方程求出亞硝酸鈉的質量與吸光度的關系式。6.5.2.1 標準使用液的不確定度u51（1）標準溶液的不確定度 按標準物質證書，擴展不確定度為k=2（%），則不確定為：，則相對不確定度為： （2）100mL容量瓶最大允許誤差為0.10mL（A級），按均勻分布，其不確定度為:0.10/=0.0578mL。 則相對不確定度：0.0578/100=5.7810-4（3）1mL單標線吸管最大允許誤差為0.007mL（A級），按均勻分布，其不確定度為:0.007/=0.0041mL。則相對不確定度：0.0041/1.00=4.110-3 則：Ucrel=1.010-27 合成標準不確定度表3為標準不確定度分量一覽表表3標準不確定度一覽表標準不確定分量不確定度來源分布類型標準不確定度測量重復性隨機效應正態(tài)分布A0.0047樣品稱樣量天平示值誤差正態(tài)分布B4.6010-6V1容量瓶均勻分布B5.7810-4V2單標線吸管均勻分布B9.010-4標準溶液標準溶液均勻分布B1.0010-2由標準曲線求得亞硝酸鈉含量m1標準溶液的濃度吸光度擬和的直線正態(tài)分布A0.9710-2合成相對標準不確定度 =（0.0074）2（4.6010-4）2(5.7810-4)2+(9.01