肺炎培訓(xùn)2019-03-08.ppt

肺炎支原體與衣原體,美國美德聲科學(xué)技術(shù)公司中國市場產(chǎn)品支持專線：8008106607med2med-2,AniLabsystemsLtd.Oy-芬蘭的診斷產(chǎn)品公司,主要致力于感染疾病等酶標(biāo)產(chǎn)品的研發(fā)和銷售，產(chǎn)品在全球銷售。,肺炎支原體IgM/IgG/IgA,肺炎衣原體IgM/IgG/IgA,百日咳桿菌IgM/IgG/IgA,呼吸道疾病產(chǎn)品,肺炎（pneumonia）是指終末氣道、肺泡和肺間質(zhì)的炎癥，可由病原微生物、理化因素、免疫損傷、過敏及藥物所致。,肺炎概述,細(xì)菌、病毒、真菌，等支原體肺炎衣原體肺炎,病原微生物：,肺炎支原體MycoplasmaPneumoniae,從人體分離出16種支原體，5種對人有致病性，即肺炎支原體、解脲支原體、人型支原體、生殖支原體及發(fā)酵支原體。肺炎支原體是呼吸道感染、肺炎的主要原因,1938年，Reimann報(bào)道了7名罹患肺炎的患者，臨床表現(xiàn)不同于一般的細(xì)菌性肺炎，當(dāng)時(shí)稱為原發(fā)性非典型肺炎。,概述,1944年，Eaton等從一名患原發(fā)性非典型肺炎患者的痰液中，分離出一種病原體，可引起棉鼠和地鼠肺炎，因其能通過慮菌器而疑為病毒，稱為Eaton因子。,1962年，Chanock和Hayflick應(yīng)用無細(xì)胞人工培養(yǎng)基成功分離培養(yǎng)Eaton因子，并提議將其命名為肺炎支原體。,是一類目前所知能獨(dú)立生活，自行繁殖的最小微生物?；蚪M是環(huán)狀雙股DNA。2019年，首次對肺炎支原體進(jìn)行了全基因組測序，測序株全長816,394bp，編碼687個(gè)基因。二分裂的生長方式。,生物學(xué)特性,MP僅寄生于人類，傳染源是患者及攜帶者。MP由感染者的鼻、咽、喉、器官排出，借飛沫或氣溶膠而傳播。潛伏期和治療期間均有傳染性，病初46天傳染性最強(qiáng)，35周后消失。,流行病學(xué)1,-傳染源及傳播途徑,人類對MP普遍易感，總的發(fā)病率取決于人群易感性。59歲兒童為發(fā)病高峰，其次是1014歲年齡段兒童，近年來發(fā)病年齡有提前的趨勢，另有新生兒支原體肺炎的報(bào)道。集中在大、中、小學(xué)生，軍人和囚犯為高危人群。成人癥狀較輕，免疫功能低下者常引起嚴(yán)重感染，且?guī)Ь鸂顟B(tài)可持續(xù)很長時(shí)間。,流行病學(xué)2,-易感人群,全球性分布，無地區(qū)性差異。局部流行、爆發(fā)流行。平時(shí)散發(fā)，寒冷季節(jié)發(fā)病率較高，占住院肺炎的1020%，流行期間可占30%。每45年有1次流行，被戲稱為“奧林匹克病”；近年來平均每26年在全球出現(xiàn)流行。MP和CP占CAP混合感染的1/32/3，尤與肺炎鏈球菌混合感染常見。,流行病學(xué)3,-流行特征,支原體學(xué)/吳移謀等主編.-2版.-北京：人民衛(wèi)生出版社，2019.1,臨床表現(xiàn),MP經(jīng)飛沫傳播侵入機(jī)體，粘附于呼吸道細(xì)胞表面，并由上呼吸道逐漸向下呼吸道蔓延，引起氣管及支氣管、喉炎，重癥者導(dǎo)致肺炎。此外，也可同時(shí)或相繼引起腦炎、心肌炎、肝炎等肺外癥狀。,呼吸道癥狀:潛伏期1-11天，發(fā)熱可持續(xù)1-2周，X線表現(xiàn)近半數(shù)兩側(cè)可被侵害，75-90%有下葉受累，X線體征可長達(dá)3周以上。,肺外并發(fā)癥:MP可進(jìn)入血液，在呼吸系統(tǒng)以外的部位增值，引起肺外并發(fā)癥，出現(xiàn)于呼吸道癥狀后330天。,皮膚損害：皮疹的發(fā)生率約25%。神經(jīng)系統(tǒng)：MP感染患兒約7%發(fā)生中樞神經(jīng)系統(tǒng)損害。心血管系統(tǒng)：發(fā)生率約45%。血液系統(tǒng)：以溶血性貧血多見，也有血小板、WBC減少。泌尿系統(tǒng)：可出現(xiàn)蛋白尿、血尿、腎衰竭。運(yùn)動(dòng)系統(tǒng)：可導(dǎo)致關(guān)節(jié)炎等。其他損害：可出現(xiàn)肝功能輕、中度損害。,支原體學(xué)/吳移謀等主編.-2版.-北京：人民衛(wèi)生出版社，2019.1,病理生理肺炎病理生理發(fā)生發(fā)展示意圖病原體毒素上呼吸道炎支氣管炎肺炎肺組織充血水腫滲出支氣管粘膜充血水腫滲出換氣障礙通氣障礙低氧血癥高碳酸血癥毒血癥肺動(dòng)脈肺動(dòng)脈反呼吸呼吸衰竭高壓射性收縮循環(huán)系統(tǒng)DIC神經(jīng)腦水腫，腦病心力心肌消化出血，腸麻痹衰竭受損酸堿失衡中毒性心肌炎,實(shí)驗(yàn)室診斷,-支原體及血清學(xué)檢查陽性，是診斷本病的主要依據(jù)。,病原學(xué)檢查,典型“油煎蛋”菌落,原代菌落,沒有細(xì)胞壁，基本形態(tài)有球型、雙球型及絲狀。在固體培養(yǎng)基上一般37天后方能形成集落，肉眼很難觀察，必須借助低倍鏡觀察，典型菌落呈“油煎蛋”樣。,電鏡下形態(tài),病原學(xué)檢查,肉湯培養(yǎng)基左陰性對照（紅色）右MP生長（黃色）,OXOID變色培養(yǎng)基左陰性對照（深色）右MP生長（綠色）,培養(yǎng)基：需要豐富的膽固醇、血清蛋白和酵母浸液。,培養(yǎng)條件：pH為7.08.0，溫度3637，環(huán)境510%CO2。,生化反應(yīng)：利用其分解葡萄糖、甘露糖，還原亞甲藍(lán)等生化特性與其他支原體進(jìn)行鑒別。,免疫學(xué)檢查,非特異性試驗(yàn)：3376%的MP感染者冷凝集試驗(yàn)陽性，一般在第1周末或第2周出現(xiàn)，12個(gè)月消失。冷凝集效價(jià)在1：64或以上有診斷意義。不適用于MP感染的確認(rèn)。,特異性試驗(yàn)：感染后79天，血清特異性抗體開始升高，34周達(dá)高峰?；謴?fù)期較急性期抗體滴度升高4倍或以上有診斷意義。特異性高，對于確認(rèn)MP感染有一定的診斷價(jià)值。,分子生物學(xué)檢查,PCR法：擴(kuò)增的靶基因包括16SrRNA基因的可變區(qū)、P1蛋白、ATP酶操縱子，敏感性和特異性從53.8100%不等。易出現(xiàn)假陽性和假陰性。標(biāo)本類型：咽拭子、痰及支氣管肺泡灌洗液。,DNA探針雜交法：目前用于MP研究的探針有特異性DNA片段探針、人工合成的核苷酸探針和全DNA探針。標(biāo)本類型：痰液，對咽拭子標(biāo)本檢測價(jià)值不大。,輔助性檢查,影像學(xué)檢查：X線檢查，特異性不高，不能確診。,血象檢查：CRP、血沉、LH等指標(biāo)均出現(xiàn)異常，白細(xì)胞升高不明顯，而細(xì)菌性肺炎時(shí)白細(xì)胞升高明顯，可鑒別。特異性不高。,產(chǎn)品介紹,美德聲推廣的MP-IgM抗體檢測試劑盒用于定性檢測人血清和血漿中肺炎支原體特異的IgM抗體。有助于輔助診斷記性肺炎支原體感染。,-AniLabsystems,MycoplasmapneumoniaeEIAs(2000)：全球首個(gè)取得CE認(rèn)證,肺炎支原體試劑盒組成,加入樣本,37度孵育60分鐘,洗板后加入標(biāo)記有HRP的二抗,37度孵育60分鐘,加入底物顯色液,室溫孵育30分鐘,加入終止液后測OD值,需時(shí)150分鐘,準(zhǔn)確、特異性強(qiáng),肺炎支原體試劑盒檢測原理,微孔板表面包被有一層P1片段特異抗原,產(chǎn)品性能1,批內(nèi)重復(fù)性,批間重復(fù)性,產(chǎn)品性能2,標(biāo)本：17對提示MP感染的標(biāo)本；21對確認(rèn)RSV感染標(biāo)本；20對確認(rèn)甲流感染標(biāo)本；13個(gè)確認(rèn)EBV感染標(biāo)本；20個(gè)確認(rèn)CP感染和1對確認(rèn)的CP感染標(biāo)本。,即用型試劑，可拆卸板條；IgG去除劑，有效消除類風(fēng)濕因子的干擾；陰性對照、臨界值對照、陽性對照均為人血清基質(zhì)；獨(dú)特的標(biāo)記便于板條的識(shí)別。底物、洗液、終止液可以通用。與ANILabsystemsCP、BP等可同步操作。28儲(chǔ)存，有效期12個(gè)月。,肺炎支原體產(chǎn)品特點(diǎn),競爭產(chǎn)品,培養(yǎng)法,原理：通過MP生長分解Glu產(chǎn)酸，使指示劑的顏色由紅變黃。,采樣：咽后部扁桃體部位,傳統(tǒng)培養(yǎng)法培養(yǎng)時(shí)間較長。武漢菁華：快速培養(yǎng)法，6小時(shí)出結(jié)果。,特點(diǎn)：傳承徽生物檢測的“金標(biāo)準(zhǔn)”,創(chuàng)建了“快速培養(yǎng)法”。創(chuàng)新世界微生物培養(yǎng)技術(shù)。突破傳統(tǒng)培養(yǎng)時(shí)間障礙(3-7天)，首創(chuàng)6小時(shí)快速培養(yǎng)。穩(wěn)定性好可在常溫下保存7天不影響到效果。,凝集法,特異性檢測MP總抗體，日本富士。,原理：致敏粒子與人血清中存在的MP抗體發(fā)生凝集反應(yīng)。,特點(diǎn)：MP（Mac株）細(xì)胞膜成分致敏明膠粒子，采用凝集法定性/半定量檢測MP抗體。致敏/未致敏粒子為凍干粉，使用前復(fù)溶，當(dāng)天使用，冷藏可5天內(nèi)使用，每次使用前充分混勻。陽性對照滴度為1：320，來源為兔血清。反應(yīng)時(shí)間3小時(shí)后觀察結(jié)果。試劑有效期，28保存12個(gè)月。無法區(qū)分急性期感染還是急性期后期（伴有其他并發(fā)癥）。,ELISA法,在血清學(xué)檢測方法中應(yīng)用最為廣泛，方便、快捷。特異性檢測血清中MP特異性抗體。,試劑品牌：,EUROIMMUN,定性/半定量（與Cut-off比值）檢測MP-IgM,有效期1年反應(yīng)時(shí)間：30+30+15=75min（室溫）,Virion/Serion,定性/定量檢測MP-IgM,GenBio/ImmunoWell,定量檢測MP-IgM，A(U/mL)=（OD樣本濃度cal）/ODcal陰性：A770U/mL陽性：A950U/mL,廠家介紹：蘭州雅華、濰坊康華,膠體金法,快速檢測MP-IgM，特異性不高，易出現(xiàn)假陽性，不適于批量標(biāo)本檢測。,特點(diǎn)：一步法檢測，簡便、快速。,PCR法,廠家介紹：達(dá)安基因，試劑報(bào)價(jià)1200/20tests,檢測MP-DNA，需要配PCR分析儀，實(shí)驗(yàn)室及技術(shù)人員要求高。對感染早期診斷有意義。,標(biāo)本：痰液、肺及支氣管灌洗液、咽拭子,肺炎衣原體ChlamydiaPneumoniae,1986年Grayeton等在學(xué)生急性呼吸道感染中，發(fā)現(xiàn)一種衣原體，以后于成人呼吸道疾病中亦被發(fā)現(xiàn)，當(dāng)時(shí)命名為鸚鵡熱衣原體TWAR-TW株，后經(jīng)研究證明該衣原體為一新種、并定名為肺炎衣原體。衣原體是一種嚴(yán)格的細(xì)胞內(nèi)寄生生物，已知有3種對人有致病性，即肺炎衣原體、沙眼衣原體、鸚鵡熱衣原體。肺炎衣原體是呼吸道感染、肺炎的主要原因。肺炎衣原體只有一個(gè)血清型TWAR株。,概述,具有DNA和RNA兩種類型的核酸，二分裂增值。沒有合成ATP等高能化合物的能力。對多種抗生素敏感：四環(huán)素、紅霉素等。對熱敏感：56-60，只能存活5-10min。有獨(dú)特的發(fā)育周期。,生物學(xué)特性,CP僅寄生于人類和哺乳動(dòng)物，人類是CP唯一儲(chǔ)存宿主，傳染源是患者及無癥狀攜帶者。傳播途徑：主要經(jīng)飛沫或呼吸分泌物道傳播，可廣泛寄居于呼吸道。,流行病學(xué)1,-傳染源及傳播途徑,CP感染表現(xiàn)差異較大，?？蔁o任何癥狀，事實(shí)上每一個(gè)人在一生中某一個(gè)時(shí)段都會(huì)受到CP的感染CP擴(kuò)散較緩慢，機(jī)體產(chǎn)生的免疫力極其微弱，易造成持續(xù)感染和反復(fù)感染。,流行病學(xué)2,-易感人群,：衣原體肺炎流行病學(xué)特征，張建華.實(shí)用兒科臨床雜志.第24卷16期：2009年8月.,具有散發(fā)和流行交替出現(xiàn)的特點(diǎn)。四季均可發(fā)生，隨年齡增長，抗體陽性率呈線性上升。國外對成人肺炎研究表明243%的CAP與CP感染有關(guān)；對連續(xù)住院的CAP患者，CP抗體陽性率高達(dá)63.8%。國內(nèi)報(bào)道經(jīng)DNA和血清學(xué)檢測亞洲地區(qū)成人CAP的流行病學(xué)研究表明CP占成人病原的5.8%。,流行病學(xué)3,-流行特征,：衣原體肺炎流行病學(xué)特征，張建華.實(shí)用兒科臨床雜志.第24卷16期：2009年8月.,臨床表現(xiàn),CP經(jīng)飛沫傳播侵入機(jī)體，引起咽炎及支氣管、喉炎，輕癥無明顯癥狀，成年人肺炎多較嚴(yán)重。此外，并可能伴隨肺外表現(xiàn)如神經(jīng)系統(tǒng)損害、心腦血管疾病等。,呼吸道癥狀:白細(xì)胞計(jì)數(shù)正常，X線無特異性，表現(xiàn)多為單側(cè)下葉浸潤，咳嗽癥狀可持續(xù)3周以上。,肺外并發(fā)癥:CP感染可以有肺外多個(gè)系統(tǒng)損害，兒童較成人少見。,心血管系統(tǒng)：損傷冠狀動(dòng)脈，引起冠心病和ACS等。神經(jīng)系統(tǒng)：導(dǎo)致成人腦梗死，引起腦炎、腦膜炎等。反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎：偶爾出現(xiàn)，肺炎癥狀后3周發(fā)生。結(jié)節(jié)?。号c結(jié)節(jié)病，慢性肉芽腫等相關(guān)。自身免疫性疾病：（ANCA相關(guān)）腎炎。其他損害：腹主動(dòng)脈瘤、甲狀腺炎、結(jié)節(jié)性紅斑等。,1)避免長時(shí)間在人群擁擠的地方逗留，減少空氣傳播機(jī)會(huì)。2)避免接觸高熱、咳嗽、胸悶等呼吸道感染癥狀的患者，如發(fā)現(xiàn)家人有明顯呼吸道癥狀請及早就醫(yī)，并做好隔離措施。3)保持家庭居住及工作環(huán)境的清潔和通氣。,預(yù)防,實(shí)驗(yàn)室診斷,-分離、培養(yǎng)或血清學(xué)檢測陽性是診斷CP感染的標(biāo)準(zhǔn)。,病原學(xué)檢查,輔助性檢查,血液檢查&影像學(xué)檢查,病原學(xué)檢查,CP培養(yǎng)只能在細(xì)胞內(nèi)生長繁殖，分離培養(yǎng)方法復(fù)雜，所需時(shí)間長，分離率低，不適宜臨床快速診斷。CP能在呼吸道來源的細(xì)胞系：HEp-2和HL細(xì)胞系中穩(wěn)定生長，在細(xì)胞內(nèi)形成包涵體。標(biāo)本置于室溫會(huì)降低活性，需盡快培養(yǎng)。標(biāo)本類型：鼻咽或喉拭子、痰和胸腔積液標(biāo)本分離CP。鼻咽部拭子分離較理想。,ELISA:常用于對CP感染者的篩查。MIF：國際上標(biāo)準(zhǔn)且常用的方法，常用于實(shí)驗(yàn)研究。IHA：通過凝集試驗(yàn)，檢測CP總抗體。,血清學(xué)檢查,包括ELISA、MIF、IHA等檢測方法，針對CP特異性抗體的檢測。,急性感染：雙份血清IgG滴度4倍以上增高，單份血清IgM滴度1:16或IgG1:512。既往感染：單份血清1:16IgG1:512。,分子生物學(xué)檢查,最常用的引物是omp1、16SrRNA、16S和16S23SrRNA、CP特異性克隆PstI片段等測定擴(kuò)增產(chǎn)物用瓊脂糖凝膠電泳、PAGE電泳等。對CP感染早期診斷有一定價(jià)值。存在假陽性或假陰性問題。對技術(shù)人員及設(shè)備要求較高。標(biāo)本類型：咽拭子、支氣管肺泡灌洗液。,輔助檢查,血象檢查：CRP、血沉、IgG、IgM、血漿銅藍(lán)蛋白等指標(biāo)均出現(xiàn)異常，白細(xì)胞不升高。特異性不高。,影像學(xué)檢查：X線檢查，特異性不高，不能確診。,產(chǎn)品介紹,美德聲推廣的CP-IgM抗體檢測試劑盒用于定性檢測人血清和血漿中肺炎衣原體特異的IgM抗體。有助于輔助診斷記性肺炎支原體感染。,-AniLabsystems,ChlamydiapneumoniaeEIAs(2019)：全球首個(gè)CPEIA產(chǎn)品,肺炎衣原體試劑盒組成,加入樣本,37度孵育60分鐘,洗板后加入標(biāo)記有HRP的二抗,37度孵育60分鐘,加入底物顯色液,室溫孵育30分鐘,加入終止液后測OD值,需時(shí)150分鐘,準(zhǔn)確、特異性強(qiáng),肺炎衣原體試劑盒檢測原理,微孔板表面包被有一層CP特異抗原,產(chǎn)品性能1,批內(nèi)重復(fù)性,批間重復(fù)性,產(chǎn)品性能2,標(biāo)本：2019年瑞典爆發(fā)肺炎衣原體流行期間采集的血清標(biāo)本。,肺炎衣原體產(chǎn)品特點(diǎn),即用型試劑，可拆卸板條；IgG去除劑，有效消除類