小鼠骨髓細(xì)胞染色體制備與觀察ppt課件VIP

.,實(shí)驗(yàn)二小鼠骨髓細(xì)胞染色體制備與觀察,.,實(shí)驗(yàn)原理,小鼠骨髓細(xì)胞始終保持較強(qiáng)的分裂活性，且細(xì)胞數(shù)量較多。,.,秋水仙素，可以抑制細(xì)胞分裂時(shí)的紡錘體形成，使處于增殖狀態(tài)的細(xì)胞停止在中期。注射到動(dòng)物活體內(nèi)，可以收集到較多的中期分裂相的骨髓細(xì)胞。,.,.,實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c要求：1.熟悉小鼠骨髓細(xì)胞染色體制備方法。2.了解小鼠染色體核型。3.認(rèn)識(shí)秋水仙素對細(xì)胞增殖的作用。器材與試劑內(nèi)容與方法（一）小鼠骨髓細(xì)胞染色體制備預(yù)處理,取材，收集細(xì)胞,低滲,固定、再固定,滴片,染色,.,取材前23h，向腹腔內(nèi)注射秋水仙素。注射濃度隨動(dòng)物種類不同而異。秋水仙素的主要作用是使分裂細(xì)胞阻斷在有絲分裂中期，增加中期分裂相的比例。,腹腔內(nèi)注射秋水仙素23小時(shí)后，頸椎脫臼處死小鼠。,.,小白鼠骨骼標(biāo)本,.,.,取出小鼠的后肢股骨，注意不要將股骨剪斷，否則容易造成骨髓細(xì)胞的流失。,.,用紗布擦股骨上的肌肉組織，清除干凈,注射器抽取生理鹽水沖洗骨髓,.,收集細(xì)胞：,暴露骨髓腔，反復(fù)沖洗骨髓腔獲得骨髓細(xì)胞，收集到離心管中,定容至6ml.,.,滴23滴于玻片上，吹氣，在酒精燈火焰過火8次，做記號，涼干，染色,滴片：,滴片后，將片子侵入Giemsa染液缸中，1015分鐘，棄去染液，水洗，晾干，鏡檢。,.,.,.,作業(yè)與思考題,1、繪制一個(gè)你所觀察到的小鼠骨髓細(xì)胞染色體中期分裂相。2、本實(shí)驗(yàn)中秋水仙素、低滲液、固定液各起什么作用？3、簡述實(shí)驗(yàn)中應(yīng)注意那些關(guān)鍵問題？,.,（二）染色體標(biāo)本片觀察1.標(biāo)本片質(zhì)量評價(jià)（1）細(xì)胞密度合適、均勻；（2）背景干凈，細(xì)胞核和染色體清晰；（3）有較多的分裂相；（4）染色體分散較好。,.,細(xì)胞密度,.,染色體分散度,.,2.染色體形態(tài)特征觀察,.,3.染色體計(jì)數(shù),（10010）,15,16,9,9+16+15=40,10,8,22,22+8+10=40,.,4.細(xì)胞增殖指數(shù)統(tǒng)計(jì),細(xì)胞增殖指數(shù)=,100%,.,實(shí)驗(yàn)三細(xì)胞器的觀察,一、中心體二、高爾基體,.,一、中心體（410）,馬蛔蟲子宮橫切片全貌,.,中心體（1010）,.,中心體（4010）,.,二、高爾基體（410）