原發(fā)性肝癌組織庫及數(shù)據(jù)庫的建立

原發(fā)性肝癌組織庫及數(shù)據(jù)庫的建立目的：建立原發(fā)性肝癌組織庫及數(shù)據(jù)庫，通過對肝癌患者的血液、新鮮組織、病理蠟塊等標本的收集、保存和研究，對其進行科學的管理和質(zhì)量控制，為肝癌的基礎(chǔ)和臨床研究提供寶貴材料，并能為腫瘤患者的個性化治療和隨訪提供幫助。材料：腫瘤患者血液樣本及腫瘤標本。納入標準：診斷為原發(fā)性肝癌或原發(fā)性肝癌轉(zhuǎn)移的患者?；颊邔ρ骸颖静杉橥?，符合醫(yī)學倫理學標準。排除標準：其他腫瘤轉(zhuǎn)移到肝臟上的患者予以排除。所需試劑及儀器：1. 液氮罐2. -80 超低溫冰箱3. 4-20 冰箱4. 離心機 我科均已配置采集前準備：術(shù)前一天安排采集標本人員，填寫肝癌標本臨床資料表（對具有診斷意義的影像學資料進行照相留影存檔），請患者或家屬簽署知情同意書，確認轉(zhuǎn)移式液氮罐充滿液氮，消毒滅菌兩套手術(shù)標本采集器械（手術(shù)刀、手術(shù)剪、手術(shù)鑷、不銹鋼標尺、錫箔紙、凍存管）。手術(shù)當天攜帶冰盒、轉(zhuǎn)移式液氮罐、標本采集器械、10%福爾馬林溶液、照相機、標記好的凍存管（標本庫專用標記碼）、肝癌標本資料表等，提前入手術(shù)室準備好標本采集臺，鋪無菌手術(shù)巾，做好標本采集的準備。1. 血清和血漿的采集及處理：患者按術(shù)前、術(shù)中、術(shù)后當天、術(shù)后1 周等不同時間段取血，每次采6 mL1 份3 mL EDTA抗凝，采血后輕輕顛倒混勻3次靜置，防止溶血1份3 mL不抗凝，室溫靜置 2 h，2 000 r/min離心10 min抗凝2 h內(nèi)分離血漿：2 000 r/min離心10 min。每管100 L分裝3 mL N.S+3 mL抗凝靜脈血，再加等體積Ficoll分離液至液面上，2 000 r/min離心10 min加樣器吸取血清，每管100 L 分裝，作蛋白組學分析在界面白膜處吸取淋巴細胞，N.S漂洗3次，沉淀于凍存管上述標本編號、作好標記，在采血后3 h內(nèi)凍存在-80 冰箱中2. 組織標本的處理和保存：手術(shù)結(jié)束后在不影響病理診斷取材需要的前提下采集組織樣本。整個切取標本的過程應控制在20分鐘內(nèi)。用于提取RNA及蛋白的組織新鮮組織的采集及保存組織標本切成厚度小于0.5 cm小塊，放入滅菌的EP管中，迅速放入冰盒生理鹽水沖洗2次，取腫瘤組織、癌旁組織(癌組織旁1 cm)、正常組織(癌組織旁35 cm以外或最遠處)。將標本切成小塊(0.5 cm0.5 cm，厚度1.6，28S和18S條帶清晰明亮，且28S亮度強于18S，比值在2左右，則完整性良好。若比值1，則RNA已降解。總蛋白測定濃度后加入5xloading Buffer并在100煮5min變性后放入-20冰箱中保存?？俁NA樣本利用Fermentas反轉(zhuǎn)錄試劑盒逆轉(zhuǎn)錄成cDNA入-20冰箱保存剩余RNA樣本-80低溫冰箱保存。3. 標本的標記和儲存3.1 標本分裝入凍存管。標記：凍存管編號、患者姓名、住院號、疾病種類、組織部位(或血清、血漿)、標本收集日期、標本入庫日期。3.2 凍存管編號由存放位置坐標確定。3.3 數(shù)據(jù)庫的管理。采用EXCEL軟件。3.3.1 患者信息錄入：包括患者的姓名、性別、年齡、民族、職業(yè)、聯(lián)系方式、隨訪時間、住院號（如多次住院則詳細記錄每次住院號）、臨床診斷、病史摘要（主要記錄有無肝炎、陽性家族史、黃疸、腹水、肝功Child分級等肝癌相關(guān)情況）、手術(shù)情況（包括手術(shù)方式、日期、術(shù)中探查所得重要信息、術(shù)中出血量等）、病理診斷（病理號）?；颊咻o助檢查信息：檢查項目、檢查日期、檢查結(jié)果等。3.3.2 標本信息錄入：（A）病理信息：腫瘤體積、組織類型、分級、浸潤深度、切緣情況、門脈及肝門淋巴結(jié)情況。（B）標本基本信息：入庫編號、入庫時間、入庫類別、病變部位、標本描述（附照片）、標本采集時組織離體時間、收集人、保存方式、初步處理方式。（C）存放位置信息：存放位置坐標。3.3.3 標本使用管理：包括使用登記、標本原始位置、使用單位、使用人、經(jīng)手人等。3.3.4 標本廢除管理：包括廢除登記、標本原始位置、廢除日期、廢除原因、審批人等。標本庫的系統(tǒng)管理：標本的采集、保存、使用實行專人管理。管理人員經(jīng)過專業(yè)的培訓后，應嚴格按照標本庫制定的各項規(guī)章制度進行標準化管理。定期核對，隨機取庫存標本進行光鏡檢查、核酸抽提，了解保存質(zhì)量。病歷資料嚴格按照規(guī)范化錄入，定期進行統(tǒng)計學的分析。注意事項：1. 組織標本的離體時間對于標本的保存質(zhì)量至關(guān)重要，應在切除后1 h內(nèi)取材。2. 應盡量避免