各種細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法比較

各種細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法比較細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法包括DEAE葡聚糖法，磷酸鈣法，陽(yáng)離子脂質(zhì)體法，陽(yáng)離子聚合物，病毒介導(dǎo)法，Biolistic 顆粒傳遞法 （基因槍粒子轟擊法），顯微注射法，電穿孔法等，對(duì)各種方法的原理，應(yīng)用，特點(diǎn)，廠家產(chǎn)品等信息的比較結(jié)果如下表：轉(zhuǎn)染方法原理主要應(yīng)用特點(diǎn)廠家及產(chǎn)品DEAE葡聚糖法帶正電的DEAE-葡聚糖與核酸帶負(fù)電的磷酸骨架相互作用形成的復(fù)合物被細(xì)胞內(nèi)吞 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染相對(duì)簡(jiǎn)便、重復(fù)比磷酸鈣好，但對(duì)細(xì)胞有一定的毒副作用，轉(zhuǎn)染時(shí)需除血清且一般只用于BSC-1，CV-1，COS細(xì)胞系Sigma-Aldrich(DEAE-Dextran Transfection Kit)磷酸鈣法磷酸鈣DNA復(fù)合物吸附細(xì)胞膜被細(xì)胞內(nèi)吞穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，染瞬轉(zhuǎn)染不適用于原代細(xì)胞（所需的DNA濃度較高），操作簡(jiǎn)便但重復(fù)性差，有些細(xì)胞不適用細(xì)胞建議用CSCL梯度離心，轉(zhuǎn)染是拷貝數(shù)較多GIBCO BRL ，Promega陽(yáng)離子脂質(zhì)體法帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成復(fù)合物，然后脂質(zhì)體上剩余的電核與細(xì)胞膜上的唾液酸殘基的負(fù)電核結(jié)合；另一種解釋是通過(guò)細(xì)胞是內(nèi)吞作用而被進(jìn)入細(xì)胞。(若DNA濃度過(guò)高，中和脂質(zhì)體表面電核，而降低了與細(xì)胞的結(jié)合能力)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，瞬時(shí)轉(zhuǎn)染，所有細(xì)胞 使用方法簡(jiǎn)單，可攜帶大片段DNA，通用于各種類(lèi)型的裸露DNA或RNA，能轉(zhuǎn)染各種類(lèi)型的細(xì)胞，沒(méi)有免疫原性。雖在體外基因轉(zhuǎn)染中有很高的效率，但在體內(nèi)，能被血清清除，并在肺組織內(nèi)累積，誘發(fā)強(qiáng)烈的抗炎反應(yīng)，導(dǎo)致高水平的毒性，這在很大程度上限制了其應(yīng)用Invitrogen（Lipofectamine 2000，Lipofectamine，Lipofectin，Lipofectamine Plus，Cellfectin）Roche（Dosper，DOTAP，F(xiàn)uGENE 6）CPG Biotech Co（GeneLimo Plus，GeneLimo Super）Promega（Transfast，Tfx，Transfectam）陽(yáng)離子聚合物帶正電的聚合物與核酸帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成帶正電的復(fù)合物后與細(xì)胞表面帶負(fù)電的蛋白多糖相互作用，并通過(guò)內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，瞬時(shí)轉(zhuǎn)染，所有細(xì)胞 除了具有陽(yáng)離子脂質(zhì)體的轉(zhuǎn)染效率高，操作簡(jiǎn)單，適用范圍廣，重復(fù)性好等特點(diǎn)外，還具有在體內(nèi)，轉(zhuǎn)染效率高，細(xì)胞毒性低等特點(diǎn)，是新一代的轉(zhuǎn)染試劑。Sunma(梭華Sofast)Qbiogene（jetPEI）Qiagen(SuperFect，Polyfect）病毒介導(dǎo)法逆轉(zhuǎn)錄病毒(RNA)通過(guò)病毒中膜糖蛋白和宿主細(xì)胞表面的受體相互作用而進(jìn)入宿主細(xì)胞，之后反轉(zhuǎn)入酶啟動(dòng)合成DNA并隨機(jī)整合到宿主基因組中穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，特定宿主細(xì)胞可用于難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞、原代細(xì)胞，體內(nèi)細(xì)胞等，但攜