動物細胞培養(yǎng)和核移植技術ppt

.,1,2.2動物細胞工程,2.2.1動物細胞培養(yǎng)和核移植技術,.,2,1.動物細胞培養(yǎng)的概念：,動物細胞培養(yǎng)就是從動物有機體中取出相關的組織，將它離散成單個細胞。然后,放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細胞在體外生長和增殖。,一、動物細胞培養(yǎng),原理：細胞增殖,.,3,動物胚胎或幼齡動物的組織、器官,胰蛋白酶,單個細胞,加培養(yǎng)液,制成,細胞懸液,10代細胞,部分細胞“癌變”，無限傳代,50代細胞,原代培養(yǎng),傳代培養(yǎng),細胞貼壁,剝離、分瓶,細胞,3.動物細胞培養(yǎng)過程：,.,4,無菌操作,培養(yǎng)箱,4細胞培養(yǎng)基本器械和要求,.,5,培養(yǎng)器皿,.,6,動物胚胎或幼齡動物的組織、器官,胰蛋白酶,單個細胞,加培養(yǎng)液,制成,細胞懸液,10代細胞,部分細胞“癌變”，無限傳代,50代細胞,原代培養(yǎng),傳代培養(yǎng),細胞貼壁,剝離、分瓶,細胞,3.動物細胞培養(yǎng)過程：,.,7,動物細胞培養(yǎng)條件,1、無菌、無毒的環(huán)境（添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液）2、營養(yǎng)（葡萄糖、氨基酸、無機鹽、微量元素、動物血清、血漿等。）3、溫度和PH36.5+0.5度；PH為7.2-7.4。4、氣體環(huán)境：O2和CO2（95%空氣和5%CO2）,補充合成培養(yǎng)基中缺乏的物質(zhì),.,8,注意關鍵詞:細胞貼壁接觸抑制原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng),.,9,有關概念:,原代培養(yǎng)：從機體取出后立即培養(yǎng)的細胞為原代細胞。傳代培養(yǎng)：將原代細胞從培養(yǎng)瓶中取出，配制成細胞懸浮液，分裝到兩個或兩個以上的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，稱為傳代培養(yǎng)。,.,10,接觸抑制,定義：細胞從接種到長滿底物表面后，由于細胞繁殖數(shù)量增多相互接觸后，不再增加。,思考題：,1、為什么選用動物胚胎或幼齡個體的器官或組織做動物細胞培養(yǎng)材料？,2、為什么培養(yǎng)前要將組織細胞分散成單個細胞？,因為這些組織或器官，分裂能力旺盛，易于培養(yǎng)。,(1)成塊組織使細胞靠在一起限制了細胞的生長和增殖(2)成塊組織使細胞不能與培養(yǎng)液充分接觸，不利于培養(yǎng)。,3、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可說明細胞間的物質(zhì)是什么成份？,催化蛋白質(zhì)水解。細胞間的物質(zhì)主要是蛋白質(zhì)(膠原蛋白等)。,4、細胞膜的主要成份是什么？,蛋白質(zhì)和磷脂,5、胰蛋白酶能將細胞消化掉嗎？,能,6、既然胰蛋白酶能將細胞消化掉，那將動物組織分散成單個細胞要注意什么問題呢？,7、能夠用胃蛋白酶代替胰蛋白酶嗎？為什么？,注意時間的控制,不能，因為兩者的最適PH不同，而正常組織細胞的生存環(huán)境與胰蛋白酶的最適PH較接近,8、動物細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)表面為何要光滑、無毒？,易于培養(yǎng)細胞貼壁，進行生長增殖,.,14,一、動物細胞培養(yǎng),1、過程：,動物胚胎或幼齡動物的組織、器官,細胞懸浮液,胰蛋白酶,10代細胞,原代培養(yǎng),傳代培養(yǎng),無限傳代,單個細胞,加培養(yǎng)液,（分解彈性纖維）,.,15,獲得細胞,細胞的全能性,植物體,培養(yǎng)結果,或細胞產(chǎn)物,快速繁殖、培育無病毒植株等,培養(yǎng)目的,葡萄糖、動物血清,蔗糖、植物激素,培養(yǎng)基特有成分,液體培養(yǎng)基,固體培養(yǎng)基,培養(yǎng)基性質(zhì),細胞增殖,原理,動物細胞培養(yǎng),植物組織培養(yǎng),比較項目,植物細胞和動物細胞培養(yǎng)的比較,細胞群體,.,16,動物細胞培養(yǎng)技術應用,a、生產(chǎn)生物制品b、與基因工程相結合c、有毒物質(zhì)的檢測,克隆就是無性繁殖，具體地說，是指一個共同的祖先，通過無性繁殖的方法產(chǎn)生出來的一群遺傳特性相同的DNA分子、細胞或個體。,a.分子水平上：,b.細胞水平上：,c.個體水平上：,1.什么是克?。?一般指DNA克隆。,指一個單一的細胞分裂所形成的細胞群體。,指基因型完全相同的兩個或一個群體。,.,18,動物細胞核移植技術和克隆動物,動物細胞核移植：,是將動物的一個細胞核，移入一個已經(jīng)去掉細胞核的卵母細胞中，使其重組并發(fā)育成為一個新的胚胎，這個新的胚胎最終發(fā)育為動物個體（克隆動物）,分類：,細胞分化程度低，恢復全能性容易,細胞分化程度高，恢復全能性困難,.,19,多莉羊的培育過程,體細胞核移植的過程,卵母細胞去核,體細胞取核,重組細胞,重組胚胎,新個體,電激使兩細胞融合或核移植,.,21,顯微操作儀,.,22,顯微操作示意圖,.,23,.,24,（2）核供體細胞的準備在核移植操作中，細胞核供體細胞首先必須是完整的二倍體，該細胞必須保持有供體動物完整的基因組；其次，供體細胞核必須能夠在受體細胞質(zhì)的作用下，產(chǎn)生細胞分化過程的倒轉，變得如同剛剛受精的合子一樣，能重新完成從受精到發(fā)育成一個正常動物個體的全過程。供體細胞主要有兩大類：胚胎卵裂球、體細胞、胚胎干細胞和胎兒成纖維細胞。,.,25,（3）細胞核移植常用的核移植方法有兩種，即胞質(zhì)內(nèi)注射和透明帶下注射。胞質(zhì)內(nèi)注射是用一個外徑58m的注核針吸取供體核后直接注射進卵母細胞胞質(zhì)內(nèi)的方法。透明帶下注射則是把供體細胞核注射在透明帶與卵母細胞之間的卵周隙中，核移植后用電刺激進行細胞融合。,整個過程用了哪些技術？細胞培養(yǎng)、核移植、胚胎移植新生牛的性別、基因？性別與供體相同、基因與供體的基本相同繁殖方式？無性繁殖原理？動物細胞核的全能性,歸納:,1、體細胞核移植方法生產(chǎn)的克隆動物是對體細胞供體動物進行了100%的復制嗎？為什么？,克隆動物絕大部分DNA來自供體細胞核，但核外還有少部分DNA（如線粒體DNA）來自受體卵母細胞。,不是,.,28,1、卵母細胞為減數(shù)第二次分裂中期的次級卵母細胞2、原因？,細胞比較大，易操作細胞質(zhì)中含有使體細胞核全能性表達出來的物質(zhì),3、克隆過程運用的技術手段？,動物體細胞核移植、動物細胞培養(yǎng)和胚胎移植,4、多利的大部分性狀與誰一樣？,白面綿羊,5、結論？,高度分化的體細胞核具有全能性,.,29,體細胞核移植技術的應用前景,1、在畜牧業(yè)中可以加速家畜遺傳改良的進程,2、保護瀕危物種,3、醫(yī)藥衛(wèi)生領域生產(chǎn)醫(yī)用蛋白質(zhì)及組織器官的移植,.,30,體細胞核移植技術存在的問題,在研究方面，克隆動物基因組重新編程的機制尚不清楚，克隆技術效率低，克隆動物畸形率高、死亡率高、易出現(xiàn)早衰等問題。這些問題尚在研究中。在應用上，生產(chǎn)克隆動物費用昂貴，距大規(guī)模應用還有一定距離。,2、在動物細胞培養(yǎng)過程中遺傳物質(zhì)發(fā)生改變的細胞是（）A獲得不死性的細胞B10代以內(nèi)細胞C原代細胞D傳代細胞,1、動物細胞工程技術的基礎是（）A.動物細胞融合B.單克隆抗體C.胚胎移植D.動物細胞培養(yǎng),A,D,課堂反饋練習,3、在動物細胞培養(yǎng)的有關敘述中正確的是：（）A、動物細胞培養(yǎng)的目的只是為了獲得大量的細胞分泌蛋白B、動物細胞培養(yǎng)前要用胰蛋白酶使細胞分散C、細胞的癌變發(fā)生在原代培養(yǎng)向傳代培養(yǎng)的過渡過程中D、培養(yǎng)至50代后傳代細胞遺傳物質(zhì)沒有發(fā)生改變,B,4、一般說來，動物細胞體外培養(yǎng)需要滿足以下條件（）,無毒的環(huán)境無菌的環(huán)境培養(yǎng)基需要加入血清溫度與動物體溫相似需要O2，不需要CO2CO2能調(diào)節(jié)培養(yǎng)液PH,A、B、C、D、,D,5、動物細胞培養(yǎng)的特點（）細胞貼壁有絲分裂細胞分化接觸抑制減數(shù)分裂原代培養(yǎng)一般傳110代A、B、C、D、,A,6、在動物細胞培養(yǎng)過程中遺傳物質(zhì)發(fā)生改變的細胞是-（）A細胞系B細胞株C原代細胞D傳代細胞,A,7、用于動物細胞培養(yǎng)的組織和細胞大都取自胚胎或出生不久的幼齡動物的器官或組織，其