沉淀蛋白題庫(kù)

1、 去除蛋白質(zhì)的方法有哪些？答：(1) 加入與水混溶的有機(jī)溶劑；(2).加入中性鹽；(3).加入強(qiáng)酸;(4).加入重金屬鹽;(5).超濾法;(6).酶水解法;(7).加熱法.2、 去除蛋白質(zhì)的意義是什么？答：使結(jié)合型藥物釋放出來(lái)，以便測(cè)定藥物的總濃度；得到較“干凈”的提取液，減少乳化；消除對(duì)測(cè)定的干擾；保護(hù)儀器，延長(zhǎng)使用期限。3、 沉淀蛋白中加入甲醇或乙腈的目的是什么？答：加入水溶性的有機(jī)溶劑甲醇或乙腈，可使蛋白質(zhì)的分子內(nèi)及分子間的氫鍵發(fā)生變化而是蛋白凝聚，是蛋白質(zhì)結(jié)合的藥物釋放出來(lái)。4、 ，有機(jī)溶劑沉淀蛋白的原理是什么？答：原理是降低水的介電常數(shù)，導(dǎo)致具有表明水層的生物大分子脫水，相互聚集，最后析出。5、 用強(qiáng)酸沉淀蛋白的原理是什么？答：酸沉試劑（高氯酸等）原理是，在低于蛋白質(zhì)等電點(diǎn)的pH條件下，蛋白質(zhì)陽(yáng)離子與沉淀劑的陰離子形成難溶性鹽而沉淀，蛋白變性而沉淀。6、 常見(jiàn)蛋白沉淀劑的試劑有：甲醇、乙腈、乙醇、丙酮、高氯酸、四氫呋喃、三氯乙酸。（至少寫三種）7、 沉淀蛋白的操作步驟：血漿樣品解凍，渦流混勻備用。在EP管中，依次加入內(nèi)標(biāo)、血漿樣品、沉淀試劑，之后渦流混勻，15000 rpm離心5 min，取上清進(jìn)樣分析。8、 用甲醇、乙腈作為沉淀試劑時(shí)，血漿與沉淀劑的比例是多少？答：一般用血漿與沉淀劑的比例為乙腈最低1:2（一般1:3以上），甲醇最低1:3（一般1:5以上）。9、 簡(jiǎn)述沉淀蛋白的注意事項(xiàng)（答案開(kāi)放，僅供參考）答：（1）渦流混勻一定要充分，至少30 S以上； （2）沉淀試劑量一定要足，沉淀要充分。（3）有時(shí)需要考慮溶劑效應(yīng)，對(duì)峰型的影響 （4）熱不穩(wěn)定的藥物，離心時(shí)需要冷凍離心。 （5）注意操作，防止污染。10、 比較下面沉淀試劑的沉淀效率：甲醇、乙腈、乙醇、高氯酸。答：高氯酸乙腈乙醇甲醇。表1常見(jiàn)沉淀試劑的蛋白沉淀效率沉淀劑上清液pH值沉淀0.5 mL血漿中95%以上蛋白時(shí)所需沉淀劑體積（mL）三氯乙酸（10%，W/V）1.42.00.2高氯酸（6%，W/V）1.50.4鎢酸2.2-3.90.6焦磷酸（5%,W/V）1.6-2.70.4硫酸銅、鎢酸鈉5.7-7.31,0氫氧化鋅6.5-7.51,5硫酸銨（飽和）7.0-7.72.0乙腈8.5-9.51.0丙酮9-101.0乙醇9-101.5甲醇8.5-9.51.511、 與液液萃取和固相萃取相比，沉淀蛋白的優(yōu)缺點(diǎn)是什么？（答案開(kāi)放，僅供參考）答：優(yōu)點(diǎn)：簡(jiǎn)單、方便、迅速、提取回收率高、成本低、易于操作缺點(diǎn)：雜質(zhì)多，對(duì)特殊的藥物基質(zhì)效應(yīng)強(qiáng)。 將待測(cè)物稀釋，不能達(dá)到濃縮的作用，待測(cè)物含量低時(shí)不適用。 上清比較臟，柱壓高，有可能會(huì)導(dǎo)致系統(tǒng)堵塞。12、 簡(jiǎn)述沉淀蛋白的基質(zhì)效應(yīng)、提取回收率的操作過(guò)程答：提取回收率（RE）：空白基質(zhì)，加入沉淀試劑后，渦流混勻，離心。在上清中加入一定量的的內(nèi)標(biāo)和標(biāo)系，渦流混勻進(jìn)樣。與QC比較峰面積?；|(zhì)效應(yīng)（ME）：加入內(nèi)標(biāo)和標(biāo)系，加入水（代替空白基質(zhì)），然后沉淀試劑，渦流，進(jìn)樣。與上述RE比較峰面積。13、 沉淀蛋白以后，進(jìn)LC-MS分析，出現(xiàn)哪些情況，需要考慮將上清液稀釋？答：有溶劑效應(yīng)，峰型不好；響應(yīng)高，最高點(diǎn)可能會(huì)導(dǎo)致系統(tǒng)飽和；基線高，基質(zhì)效應(yīng)大（前提是信號(hào)響應(yīng)夠）。14、 如果外標(biāo)響應(yīng)很高，沉淀蛋白后，響應(yīng)特別低，怎樣判斷是共沉淀還是基質(zhì)效應(yīng)導(dǎo)致的？答：沉淀空白基質(zhì)，在上清中加入內(nèi)標(biāo)和標(biāo)系，看響應(yīng)，如果響應(yīng)高，那證明是共沉淀，如果仍沒(méi)有響應(yīng)，說(shuō)明是基質(zhì)效應(yīng)的影響。15、 二氯甲烷反提的原理是什么？答：二氯甲烷與乙腈的溶解能力比水強(qiáng)，能將乙腈完全從水相中提取出來(lái)。二氯甲烷將乙腈提取出來(lái)，藥物留在上層水相，相當(dāng)于濃縮。甲醇在二氯甲烷和水中都有一定的溶解，所以反提一般不用甲醇。16、 二氯甲烷反提時(shí)，二氯甲烷的量怎么確定？水相在上層還是下層？答：乙腈：二氯甲烷的比例1:3左右。水相在上層。17、 什么藥物適合用二氯甲烷反提？答：一些極性大的，在水相的溶解性強(qiáng)的藥物。18、 簡(jiǎn)述二氯甲烷反提的操作流程。答：血漿樣品室溫解凍后，渦流混勻后，精密取內(nèi)標(biāo)、血漿樣品、乙腈，混勻，離心。取上清加入二氯甲烷，渦流混合，離心，取上層水相進(jìn)樣。19、 影響沉淀效率的因素有哪些？答：沉淀試劑的選擇，沉淀