胎盤因子的制備及其對淋巴細胞免疫調節(jié)作用的體外研究_醫(yī)學論文_醫(yī)藥學論文__8404

胎盤因子的制備及其對淋巴細胞免疫調節(jié)作用的體外研究_醫(yī)學論文_醫(yī)藥學論文_【摘要】為了建立制備胎盤因子（PLACENTAFACTOR,PF）的新方法，研究PF理化性質，并探討PF體外應用對淋巴細胞的影響，應用超濾法制備PF，對PF的含量及各種成分的分子量進行測試，并以環(huán)孢素ACSA為陽性對照，生理鹽水NS為陰性對照。應用甲基噻唑基四唑（MTT）法檢測植物血凝素（PHA）誘導的淋巴細胞增殖及混合淋巴細胞反應（MLR）；應用流式細胞術檢測T細胞CD69的表達；應用乳酸脫氫酶釋放法測定自然殺傷（NK）細胞對腫瘤細胞K562的殺傷作用。結果表明在本研究中所制備的PF是一組小分子多肽類物質，主要含有兩種成分，分子量分別為9187KD及4794KD；用BRADFORD法證實，多肽質量為5769MG/G鮮重胎盤。體外研究顯示，PF抑制PHA誘導的淋巴細胞增殖及混合淋巴細胞反應的作用與環(huán)孢菌素A（CSA）相當（P005）。PF和CSA均可下調佛波酯（PMA）離子霉素（IONOMYCIN）刺激后T淋巴細胞活化抗原CD69的表達（PFVSCSA,P005）。細胞殺傷試驗顯示，PF組NK細胞殺傷活性略高于或等于NS組（P005），而CSA組殺傷活性明顯低于NS組（P005）BOTHPFANDCSACOULDDOWNREGULATETHEEXPRESSIONOFCD69ONTCELLSWHICHHADBEENSTIMULATEDBYPMAPLUSIONOMYCINPFVSCSA,P005THECYTOTOXICITYOFNKCELLSAGAINSTK562CELLSINPFGROUPWASSLIGHTLYHIGHEROREQUIVALENTASCOMPAREDWITHTHATINNSGROUPP005,BUTTHECYTOTOXICITYINCSAGROUPWASMUCHLOWERTHANTHATINNSGROUPP005），并呈劑量依賴關系。CD69抗原亦稱早期激活抗原，文獻報道CD69可通過提高鈣離子濃度，上調IL2R的P55鏈，產(chǎn)生TH1型細胞因子，引發(fā)淋巴細胞增殖，起到信號傳遞功能17，CD69僅表達于活化的T細胞，而在靜止的T細胞表面沒有表達。我們應用流式細胞儀檢測了PMA離子霉素刺激后T細胞CD69的表達情況，發(fā)現(xiàn)PF可顯著抑制由PMA離子霉素誘導的T細胞活化，亦與劑量相關，尤其是在高劑量組，抑制作用強于CSA（P005）。NK細胞具有廣譜的抗腫瘤作用，尤其對淋巴瘤、白血病最為有效。另外，NK細胞還可以殺傷病毒感染的靶細胞，并且對某些胞內感染的細菌、真菌及寄生蟲也有殺傷作用。我們應用乳酸脫氫酶釋放法檢測NK細胞對腫瘤細胞K562的殺傷活性，研究證實，PF不影響NK細胞對腫瘤的殺傷，甚至在某些劑量組，還可促進NK細胞對腫瘤的殺傷，但CSA卻明顯降低NK細胞對腫瘤細胞的殺傷活性。上述體外試驗結果表明，對T細胞而言，PF可以產(chǎn)生與CSA相當?shù)拿庖咭种谱饔?；但與CSA不同，它不影響甚或促進NK細胞對腫瘤的殺傷。本研究建立了一種制備PF的新方法，并首次證實PF體外應用對T細胞有強大的免疫抑制作用，可抑制由絲裂原及異基因抗原誘導的T細胞增殖及活化，同時不影響甚或促進NK細胞對腫瘤細胞的殺傷作用。這些結果表明，PF在抑制GVHD的同時，或許可以較好地保留移植物抗腫瘤效應（GVT），是一種較理想的、有應用潛能的抗GVHD制劑。今后，我們將進一步研究PF在動物體內應用對機體免疫系統(tǒng)功能的影響?！緟⒖嘉墨I】1LIUF，LUDPPURIFICATIONOFPLACENTAELUTEDGAMMAGLOBULINSANDTHEIRSTRONGEFFECTAGAINSTGRAFTVERSUSHOSTREACTIONSINVITROANDINVIVOINTJHEMATOL,2005821621682CULOUSCOUJM,REMACLEBONNETMM,POMMIERG,ETALIMMUNOSUPPRESSIVEPROPERTIESOFHUMANPLACENTASTUDYOFSUPERNATANTSFROMSHORTTERMSYNCUTIOTROPHOBLASTCULTURESJREPRODIMMUNOL,1986933473SILVERRK,TURBOVJM,BEAIRDJA，ETALSOLUBLEFACTORPRODUCEDBYISOLATEDFIRSTTRIMESTERCHORIONICVILLIDIRECTLYINHIBITPROLIFERATIONOFTCELLSAMJOBSTETGYNECOL,1990163191419194SANYALMK,BRANICJ,BISCHOFP,ETALIMMUNOREGULATORYACTIVITYINSUPERNATANTSFROMCULTURESOFNORMALHUMANTROPHOBLASTCELLSOFTHEFIRSTTRIMESTERAMJOBSTETGYNECOL,1989,1614464535劉月新，王勛楚，段茂芳等一種新的免疫調節(jié)劑中國免疫學雜志,1985151536梁積恒，張麗生，張力圖等胎盤免疫調節(jié)因子治療惡性腫瘤313例的臨床研究廣西醫(yī)學,199921137黃寧玲，齊準，馬寧等胎盤肽為主治療兒童支氣管哮喘12例醫(yī)學理論與實踐,199581191208焦文舉，張甫，戴巍等胎盤肽治療乙型慢性活動型肝炎療效觀察哈爾濱醫(yī)藥,19961615179元曉茗，黃春林，趙月菊等胎盤肽治療變應性鼻炎臨床觀察中國中西醫(yī)結合耳鼻咽喉科雜志，20031111812010任建梅，吳駿，王玉珍胎盤因子的研制包頭醫(yī)學，199721192011黃楚華，殷學倫超濾法制備胎盤肽的初步研究中國生化藥物雜志,19911513313412張曉楠，曹云新，程司坤等用于測定小分子多肽的兩種電泳方法的比較生物工程進展,200117747613石繼紅，趙永同，王俊樓等SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳分析小分子多肽第四軍醫(yī)大學學報,20002176176314馬布仁，李素華，謝軼勛等胎盤免疫活性的實驗研究解放學醫(yī)學雜志,19881333533715李恩善，董邦金，楊琨等胎盤免疫調節(jié)因子理化性質及生物學活性的實驗研究上海免疫學雜志,19931320520616VOGELSANGGB,HESSADGRAFTVERSUSHOSTDISEASENEWDIRECTIONSFORAPERSISTENTPROBLEMBLOOD，1994842061206717RUTELLAS,RUMIC,LUCIAM