影響ELISA試驗效果常見問題原因分析及解決辦法.ppt

1、一.影響ELISA試驗效果常見問題原因分析及解決辦法,(1)試劑,1.觀察外包裝，內(nèi)主份有無漏液，注意效期等。 2.仔細閱讀說明書，嚴格按照試劑說明書進行操作。 3.操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘，保證酶等液體的初始反應溫度及活性劑的溶解。,(2)加樣過程應注意的問題,標本 ：1.血清或血漿標本分離不好即進行加樣。 2.不加抗凝劑（以HBsAg影響較大）。 3.漏加樣品或加樣量不足的，加液器的校正。 加樣時間： 4.手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵 箱前等待時間過長(以HIV試劑較為明顯。)；,(3)孵育過程中出現(xiàn)的問題,1.溫箱孵育時未貼封片或加蓋，使標本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔

2、壁，難于清洗徹底； 2.孵育時間人為延長，導致非特異性結(jié)合，難以清洗徹底。 3.孵育時溫度不符合說明書的規(guī)定范圍。,(4)洗板過程中易出現(xiàn)的幾點情況,1.采用手工洗板,孔與孔之間液體容易交叉，切不可隨意洗板。 2.采用洗板機洗板時，洗液注入孔中量不足，導致洗板不徹底，造成本底高。 3.由于血液中纖維原蛋白，造成洗板針堵塞，抽吸不完全，造成洗板不暢，導致洗板效果差，直接影響本底。 4.反應板過多，不能保證及時洗板，造成洗板等待時間過長，影響結(jié)果。 5.洗板前先將孔內(nèi)液體甩出包被板。,(5)顯色過程中易出現(xiàn)的問題,顯色劑配制后放置時間過長或使用已經(jīng)變色失效的顯色劑； 2. 用排槍加A、B混合液時，

3、加樣槽不夠干凈，造成花板 。 3. 不同廠家試劑的顯色液混用。,(6)終止和讀數(shù)時的注意事項,1加完終止后30分鐘內(nèi)讀取數(shù)據(jù)。 2讀板時板底如果不清潔，就會導致所讀的 數(shù)據(jù)不準確，所以在讀數(shù)前盡量保證酶標板的 底部是清潔的。,二.實驗完成后異常結(jié)果出現(xiàn)的原因分析,問題1：只有單次實驗出現(xiàn)靈敏度偏低或 者偏高。,處理意見：重新實驗，并在實驗中注意試 劑盒的溫度平衡、溫育的時間、 顯色的時間等影響因素的控制 。,問題2：質(zhì)控品漏檢,處理意見：檢查質(zhì)控品是否有反復凍融 的情況、質(zhì)控品是否有批內(nèi) 差異、質(zhì)控品是否為4攝氏度 久置。,問題3：日常使用中出現(xiàn)弱陽性標本漏檢。,處理意見：A標本本身由于各種因

4、素影響而表現(xiàn) 為弱陽性，實際上為陰性標本。 B由于標本自身含量較低，易隨實 驗水平位試劑盒調(diào)整等因素波動， 對這部份標本的處理應格外慎重， 有條件的地區(qū)應進行確證實驗。,處理意見：C注意檢查實驗中所用的儀器設備 是否定期校準。 D注意檢查實驗中所用的板、酶標 試劑的批號是否相同，不同批號 試劑不得混用。,問題4：質(zhì)控品靈敏度偏高 。,處理意見：衛(wèi)生部臨檢中心的質(zhì)控品存在 批間批內(nèi)差異。 實驗室相關(guān)條件改變導致質(zhì)控變化，看陽性對照品是否有明顯變化。,問題5：多次實驗靈敏度一直偏低。,處理意見：A保存環(huán)境不規(guī)范。 B孵箱溫度不足。 C溫育時間不足。,問題6：單次實驗中出現(xiàn)假陽性,處理意見：注意實驗

5、過程中的影響因素，特 別是實驗中的洗板應設置浸泡 30-60秒時間。,問題7：臨床實驗中出現(xiàn)假陽性偏高。,處理意見：A注意檢查洗滌液中結(jié)晶部份是否 完全溶解。 B注意檢查實驗中所使用的儀器設 備是否定期校準 。 C注意檢查實驗中所用的板、酶標 試劑的批號是否相同，不同批號 試劑不得混用。,處理意見：D假陽性標本表現(xiàn)在臨界值附近較 多，通常與當時實驗的水平有關(guān)， 注意檢查實驗條件的波動 。 E避免加樣時間過長 。 F由于試劑盒靈敏度過高而造成臨 床假陽性偏高的結(jié)果。,問題8：多次實驗重復性差。,處理意見：A加樣后充分混均。 B盡可能使用同一加樣器，裝緊 槍頭。 C測量波長保持一致。 D加樣量、加試劑量保持一致。,三.血型常見問題分析,1.關(guān)于效價的問題： 目前公司內(nèi)部質(zhì)量規(guī)程規(guī)定A,B細胞均需達到1：128 O細胞需達到1：8。 2.關(guān)于凝集的問題： A , B細胞 1：128 + O細胞 1：8 + 此處的“+”為肉眼可見清晰的凝集顆粒。 3.關(guān)于變色及溶血的問題： 當細胞近效期時，有可能出現(xiàn)細胞濁液顏色發(fā)暗紅，屬正?，F(xiàn)象。 正常細