生化試劑注意事項ppt課件

1、生化試劑在全自動生化分析儀中應用的注意事項,1,Contents,1.試劑的保存,2.實驗室有關試劑使用的SOP的建立,3. 試劑類型和機器的匹配,4. 校準和質控與試劑的匹配性,7.對外觀異常的標本的處理,8.對特殊項目進行特殊的處理,6.合理的試劑上機順序,9.對異常結果的標本的處理,5.機器性能和水機狀態(tài)對檢測的影響,2,1.試劑的保存,1.1. 合適的溫度和避光保存：大部分為2-8少部分為2-26。 1.2 .試劑擺放時注意不要貼近冰箱后背的內膽，防止試劑結冰。,試劑放置的偏后， 貼近后背的內膽， 現(xiàn)在的冷凝器在 兩側，后背有制冷 管路就會造成結冰。,3,2.實驗室有關試劑使用的SOP

2、的建立,2.1.不同項目在同一型號機器上SOP的建立。 2.2.同一個項目在不同型號上SOP的建立。,HBA1C的溶血劑 D-D標本類型,三試劑HCY HBA1C在AU5400和AU5800的應用區(qū)別,4,3.試劑類型和機器的匹配,5,4.校準和質控與試劑的匹配性,首先必須明確生化分析儀不論如何先進，它還是一個比較器，它測試出來的標本結果是隨著標準限的設置不同而變化的。所以，在衛(wèi)生部臨床檢驗中心擬定的“臨床實驗室（定量測定）室內質控工作指南”中明確指出“對測定標本的儀器一定要求進行校準，校準時要選擇合適的（配套的）標準品/校準品；如有可能，校準品應能溯源到參考方法或/和參考物質；對不同的分析項

3、目要根據(jù)其特性確立各自的校準頻率?！?6,校準品（Calibrationmaterials）含有已知量的欲測物，用以校準該測定方法的數(shù)值，它與該方法及試劑、儀器是相關聯(lián)的。校準品的作用是為了減少或消除儀器、試劑等造成的系統(tǒng)誤差。因此最好為人血清基質，以減少基質效應造成的誤差。 質控品（Controlmaterials）只用于和待測標本同時測定的，為了控制標本的測定誤差，因此要求保存時間十分穩(wěn)定。,7,8,9,10,11,5.機器性能和水機狀態(tài)對檢測的影響,5.1.優(yōu)良的機器狀態(tài)是實驗結果準確的前提。 5.2.合格且穩(wěn)定的水質是保障結果準確性和穩(wěn)定性的重要因素。,12,5.1.有關機器狀態(tài)對測量

4、結果影響,攪拌系統(tǒng)出現(xiàn)問題,13,某醫(yī)院反饋CL比色法最近結果特別異常，結果在-1000和2000之間波動。而且僅僅CL結果異常，其它項目結果沒問題。,燈泡在450的波長下不穩(wěn)定。所有項目僅僅CL在450的波長下反應。,某醫(yī)院反饋最近所有項目忽高忽低，特別是酶類，懷疑試劑出現(xiàn)問題,沖洗站最外面的打水針出現(xiàn)問題，打水量時多時少。當打水偏多的時候，水會溢到隔壁反應杯。,14,5.2.有關水機狀態(tài)對測量結果影響,15,ABS空白：33ABS27.4：475,10:194 9.8:191,9.6 9.2,9.1 9.0,合格且穩(wěn)定的水質是保障結果準確性和穩(wěn)定性的重要因素。,16,6.合理的試劑上機順序

5、,合理的試劑測試順序是防止試劑針交叉污染的重要方法之一。,TG試劑內含有高活性的脂肪酶，濃度為6000U/L。,TG和LPS的檢測之間盡量隔開。,17,18,19,7.對外觀異常的標本的處理,隨著科學技術的發(fā)展，生化檢驗測定的精密度和準確度都大大的提高了，但是這卻時一些實驗人員忽視了對血清標本外觀的觀測。事實上，血清標本的外觀對其生化結果有著很直接的影響。,溶血,黃疸,乳糜血,20,溶血：血紅蛋白的吸收峰在500nm，500-560nm都有影響。又因為血紅蛋白本身是氧化還原劑，可以與試劑中的過氧化物發(fā)生反應，致使檢測結果受到影響。 黃疸：嚴重的黃疸對比色有影響，例如ALT，Crea，GGT等項

6、目受影響更為明顯。 脂血：造成散射，波長越短越明顯，對任何測定都有影響。 建議：對于外觀異常的標本采取其它的檢測手段進行分析。,21,8.對特殊項目進行特殊的處理,HbA1C：溶血劑處理半個小時以上。 CO2：試劑盒不能長期敞開蓋子，標本盡快處理防止揮發(fā)。 NH3：含氨的抗凝劑、未去氨材質做的試管、分析過程中受到氨的污染。標本放置會導致氨的逸出。 CU：不能使用肝素抗凝的采血管。,22,9.對異常結果標本的處理,對于異常結果的標本不僅要結合臨床情況進行分析，而且也要結合反應曲線進行全面分析。,前白蛋白結果為“0”,TBA大批量做偶爾出現(xiàn)負值，單獨沒有問題,肝臟的損傷程度,機器交叉污染的情況,2

7、3,Hot spot:有關雙試劑R1剩余的問題,在生化分析儀器的長期使用過程中，出現(xiàn)雙試劑的R1剩余很多，R2已經用完。其原因是儀器在設計過程中，為了避免試劑污染，試劑探針在加入設定量的同時多加一些試劑（模擬量），設定量加入反應杯，模擬量被棄去，其模擬量隨設定量不同而不同，由于R2設定試劑量小,其相對模擬量大，造成R2短缺。,R1體積：80ml R2體積：40ml R1：R2=200:100,R1：R2=100：50,實際測試數(shù)：347，R1剩余量2.6ml,實際測試數(shù)：634，R1剩余量7.1ml,24,Hot spot:有關交叉污染的分析,1.部件間化學污染的來源 2.試劑間化學污染的類型

8、 3.試劑間化學污染的判別 4.消除試劑間化學污染的方法,25,1.部件間化學污染的來源,全自動生化分析儀發(fā)展迅速，具有多項目、多樣本的處理能力，檢測速度不斷的提高，但由于共用吸樣針、試劑針、攪拌棒以及比色杯，當生化儀長期使用致其清洗能力下降、比色杯老化后引起吸附力增加、生化儀內污垢的積聚、測試順序安排不當，且常規(guī)清洗不能有效消 除交叉污染時，就會增加試劑間化學污染的可能性，引起測定結果不準確。,26,1.1.試劑針污染：當試劑針在清洗不完全，或黏附力增加時，殘留試劑可能會對下一相臨檢測結果造成影響。 1.2.攪拌棒污染：攪拌綁若清洗不完全，或黏附力增加時，殘留試劑可能會對下一相臨檢測結果造成

9、影響。 1.3.比色杯污染：當某個比色杯清洗不完全時，吸附在比色杯上的上一個項目的殘留試劑，可能會對在這個比色杯中進行的下一個項目的檢測結果造成影響。,27,2.試劑間化學污染的類型,2.1.試劑成分的直接污染 2.2.試劑成分參與反映 2.3.反應進程相同 2.4.影響反映條件,28,2.1.試劑成分的直接污染：上一測定試劑中含有下一測定所需要測定的物質，直接干擾下一檢測的測定結果。如：AMY試劑中含有較高濃度的Ca2+ ；ALP（IFCC法）、CK（NAC法）、CK-MB（NAC法）、CO2（PEPC法）、AMY（EPS法）、TG等試劑中含有Mg2+。,29,2.2.試劑成分參與反映：上一

10、個試劑中含有的某種試劑成分與下一反應所要測定的底物有作用，因而干擾下一反應的測定結果。如：（1）鎂測定試劑的絡合劑亦能與鐵結合，影響鐵有鐵絡合劑的結合（2）CHOL試劑中含有膽固醇酯酶，可水解膽固醇酯形成游離膽固醇，而引起對游離膽固醇測定的干擾。,30,2.3.反應進程相同：上一試劑所引導的反應對下一個項目的反應進程帶來間接的干擾，下一項目所測定的是前后兩個項目反應的綜合作用結果。如：當上一個反應產物為H2O2時則對以Trinders反應產生顏色的測定結果引起干擾。如UA對CHOL結果的影響；CHOL對CREA（酶法）測定結果的影響；GLU（氧化酶法）對CREA測定結果的影響。,31,2.4影

11、響反映條件：影響下一項目的反應條件如pH等，從而改變反應速率。如：（1）直接膽紅素（釩酸鹽氧化法）試劑中含有表面活性劑的酒石酸鹽緩沖液會影響ALT活性，對測定結果有負干擾。（2）CREA（苦味酸速率法）反應條件為堿性，果糖胺（動力學法）反應條件為酸性，受到污染后反應速率會減慢。,32,3.試劑間化學污染的判別,3.1.一份樣本分成兩份，一份加生理鹽水或其他適當?shù)南♂屢?，另一份加等量的某試劑，同時測定，觀察結果的變化，進而確定發(fā)生試劑交叉污染時造成直接干擾的項目。,33,3.2.1.假設有3個項目 A，B，C，以一混合血清作為標本，按以下順序測試：A，A，A，A，A，B，A，C，A，B，B，B，

12、B，B，C，B，C，C，C，C，C。得到的結果分別為：A1，A2，A3，A4，A5，BA-B，AB-A，CA-C，AC-A，B1，B2，B3，B4，B5，CB-C，BC-B，C1，C2，C3，C4，C5。（AB-A：表示B項目對A項目污染時A項目的測定值，其余表示類同）。以A2A5、B2B5、C2C5的4次測定平均值分別作為A、B、C項目無污染時的測定值。若（AB-A/A100%）105%則強烈支持B試劑對A有交叉污染。,34,3.1.2.若上述初試驗結果B對A有污染，則可進行以下試驗進行確認，測定順序為：B,A,A,A,結果為：B，A1，A2，A3。若（A1/A3100%）105%，則強烈支

13、持B對A有交叉污染。A1A3的結果可觀察受B污染的程度是否逐漸減輕。,35,4.消除試劑間化學污染的方法,4.1.要求檢驗人員對儀器工作流程、試劑組成、測定原理要了如指掌，對試劑交叉污染的各種可能性加以考慮，合理設計程序。更換試劑時應 仔細研究說明書，發(fā)現(xiàn)和避免可能存在的試劑交叉污染。 4.2.合理安排檢測項目的順序，在有交叉污染的檢測項目中間插入一個或兩個非污染項目。最徹底的做法則是將被干擾項目置于干擾項目之前，以消除干擾發(fā)生的可能。,36,4.3.當合理設置測試順序無法消除交叉污染時，可使用生化儀的試劑針、比色杯清晰程序，對試劑針、比色杯進行2次或多次清洗。用堿性清洗掖及酸性清洗掖沖洗試劑針可以有效地避免攜帶污染。 4.4.選用具有抗交叉污染的試劑盒：如在游離膽固醇試劑中添加膽固醇酯酶抑制劑，以減少膽固醇酯酶水解膽固醇酯而引起對游離膽固醇測定的污染。,37,Hot spot:不同型號生化儀器工作注意事項,貝克曼庫爾特：