實(shí)驗(yàn)六植物細(xì)胞骨架的光學(xué)顯微鏡觀察

1、實(shí)驗(yàn)六 植物細(xì)胞骨架的光學(xué) 顯微鏡觀察,一 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1 通過(guò)對(duì)洋蔥內(nèi)皮細(xì)胞的處理，掌握植物細(xì)胞骨架的制備方法與顯微形態(tài)觀察。 2 掌握考馬斯亮藍(lán)R250 對(duì)植物細(xì)胞骨架染色的方法。,二 實(shí)驗(yàn)原理,細(xì)胞骨架是由蛋白質(zhì)絲組成的復(fù)雜網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，成分有微絲、微管和中間纖維。 Triton X-100可溶解抽提細(xì)胞中的蛋白質(zhì)和脂質(zhì)，但不破壞細(xì)胞骨架系統(tǒng)。 戊二醛固定、考馬斯亮藍(lán)R250染色，光學(xué)顯微鏡觀察網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的由微絲組成的細(xì)胞骨架。,三 實(shí)驗(yàn)儀器、材料和試劑,1 儀器、用具：普通光學(xué)顯微鏡等 2 材料：洋蔥鱗莖 3 試劑： M-緩沖液 6mmol/L磷酸緩沖液 1% Triton X-100 0.2

2、%考馬斯亮藍(lán)R250,三 實(shí)驗(yàn)儀器、材料和試劑,3 試劑： 3%戊二醛 50%、70%、95%乙醇 叔丁醇、正丁醇、二甲苯、中性樹(shù)膠,四 實(shí)驗(yàn)方法(),1 洋蔥鱗莖內(nèi)表皮（1cm大?。?50ml燒杯（磷酸緩沖液）下沉 2 吸去緩沖液 加1% Triton X-100 2030 分鐘 3 吸去Triton X-100 M-緩沖液洗 3次/10分鐘 4 3%戊二醛固定 0.5-1小時(shí),四 實(shí)驗(yàn)方法,5 PH6.8 磷酸緩沖液洗 3次/10分鐘 6 0.2%考馬斯亮藍(lán)R250染色 2030分鐘 7 蒸餾水洗 1-2次裝片觀察 8 制作永久切片,四 實(shí)驗(yàn)方法(),取洋蔥內(nèi)皮1cm 左右 置于含PBS

3、液的載玻片上 濕潤(rùn)后，吸去PBS 加2 滴1%Triton X-100/M-緩沖液，5min 吸去緩沖液，加3%戊二醛-PB 溶液，固定30min 加PBS 洗2 次，共3min 加0.2%考馬斯亮藍(lán)R250 染色30min 用PBS 洗2 次，共2min，吸干 鏡檢并繪圖 細(xì)胞骨架標(biāo)本制作過(guò)程,五 作業(yè),1 繪出植物細(xì)胞骨架微絲結(jié)構(gòu)圖。 2 分析和論述在光學(xué)顯微鏡下觀察到的細(xì)胞骨架的形態(tài)特征。 3 為什么用TritonX-100 的緩沖液處理材料？,植物細(xì)胞骨架微絲結(jié)構(gòu)圖,植物細(xì)胞骨架微絲結(jié)構(gòu)圖,植物細(xì)胞骨架微絲結(jié)構(gòu)圖,植物細(xì)胞骨架微絲結(jié)構(gòu)圖,植物細(xì)胞骨架微絲結(jié)構(gòu)圖,植物細(xì)胞骨架的形態(tài)特征,細(xì)胞骨架觀察結(jié)果 光學(xué)顯微鏡下洋蔥內(nèi)表皮細(xì)胞的輪廓清晰可見(jiàn)（如圖），細(xì)胞壁及其分界明顯。1010倍鏡下可粗略觀察到細(xì)胞內(nèi)粗細(xì)不等的藍(lán)色纖維、團(tuán)塊形成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。同一細(xì)胞內(nèi)各處骨架的密集度不均勻，細(xì)胞核區(qū)域的纖維相對(duì)密集，藍(lán)色濃重，甚至分辨不出網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，另外可見(jiàn)細(xì)胞壁區(qū)域有零星藍(lán)色纖維分布；相鄰細(xì)胞的密集程度基本一致，但有少數(shù)細(xì)胞有較大不同。,植物細(xì)胞骨架的形態(tài)特征,細(xì)胞骨架觀察結(jié)果 1040倍鏡下可清楚觀察到藍(lán)色的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)確實(shí)由線(xiàn)性纖維交織成，纖維間的結(jié)合點(diǎn)稍膨大。細(xì)胞邊緣骨架較稀疏，但可見(jiàn)由與胞壁相同走向的纖維形成的細(xì)胞質(zhì)膜的輪廓，與細(xì)胞內(nèi)部的纖維通過(guò)縱向的纖維相連。相鄰細(xì)胞有纖維