植物組織中可溶性糖含量的測定-

1、植物組織中可溶性糖含量的測定 在作物的碳素營養(yǎng)中， 作為營養(yǎng)物質(zhì)主要是指可溶性糖和淀粉。它們在營養(yǎng)中的作用主要有：合成纖維素組成細(xì)胞壁；轉(zhuǎn)化并組成其他有機(jī)物如核苷酸、核酸等；分解產(chǎn)物是其他許多有機(jī)物合成的原料，如糖在呼吸過程中形成的有機(jī)酸，可作為 NH 3 的受體而轉(zhuǎn)化為氨基酸；糖類作為呼吸基質(zhì)，為作物的各種合成過程和各種生命活動(dòng)提供了所需的能量。由于碳水化合物具有這些重要的作用，所以是營養(yǎng)中最基本的物質(zhì)，也是需要量最多的一類。 蒽酮法測定可溶性糖一、原理糖在濃硫酸作用下，可經(jīng)脫水反應(yīng)生成糠醛或羥甲基糠醛，生成的糠醛或羥甲基糠醛可與蒽酮反應(yīng)生成藍(lán)綠色糠醛衍生物，在一定范圍內(nèi)，顏色的深淺與糖的含

2、量成正比，故可用于糖的定量測定。該法的特點(diǎn)是幾乎可以測定所有的碳水化合物，不但可以測定戊糖與己糖含量，而且可以測所有寡糖類和多糖類，其中包括淀粉、纖維素等（因?yàn)榉磻?yīng)液中的濃硫酸可以把多糖水解成單糖而發(fā)生反應(yīng)），所以用蒽酮法測出的碳水化合物含量，實(shí)際上是溶液中全部可溶性碳水化合物總量。在沒有必要細(xì)致劃分各種碳水化合物的情況下，用蒽酮法可以一次測出總量，省去許多麻煩，因此，有特殊的應(yīng)用價(jià)值。但在測定水溶性碳水化合物時(shí)，則應(yīng)注意切勿將樣品的未溶解殘?jiān)尤敕磻?yīng)液中，不然會(huì)因?yàn)榧?xì)胞壁中的纖維素、半纖維素等與蒽酮試劑發(fā)生反應(yīng)而增加了測定誤差。此外，不同的糖類與蒽酮試劑的顯色深度不同，果糖顯色最深，葡萄糖次

3、之，半乳糖、甘露糖較淺，五碳糖顯色更淺，故測定糖的混合物時(shí)，常因不同糖類的比例不同造成誤差，但測定單一糖類時(shí)，則可避免此種誤差。糖類與蒽酮反應(yīng)生成的有色物質(zhì)在可見光區(qū)的吸收峰為 620 nm ，故在此波長下進(jìn)行比色。二、實(shí)驗(yàn)材料、試劑與儀器設(shè)備（一）實(shí)驗(yàn)材料任何植物鮮樣或干樣。（二）試劑1. 80 乙醇。2. 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液（ 100 g/mL ）：準(zhǔn)確稱取 100 mg 分析純無水葡萄糖，溶于蒸餾水并定容至 100 mL ，使用時(shí)再稀釋 10 倍（ 100 g/mL ）。3 蒽酮試劑：稱取 1.0 g 蒽酮，溶于 80% 濃硫酸（將 98% 濃硫酸稀釋，把濃硫酸緩緩加入到蒸餾水中） 1000

4、 mL 中，冷卻至室溫，貯于具塞棕色瓶內(nèi)，冰箱保存，可使用 2 3 周。（三） 儀器設(shè)備分光光度計(jì)，分析天平，離心管，離心機(jī)，恒溫水浴，試管，三角瓶，移液管（ 5 、 1 、 0.5 mL ），剪刀，瓷盤，玻棒，水浴鍋，電爐，漏斗，濾紙。三、實(shí)驗(yàn)步驟1. 樣品中可溶性糖的提取 稱取剪碎混勻的新鮮樣品 0.5 1.0 g （或干樣粉末 5 100 mg ），放入大試管中，加入 15 mL 蒸餾水，在沸水浴中煮沸 20 min ，取出冷卻，過濾入 100 mL 容量瓶中，用蒸餾水沖洗殘?jiān)鼣?shù)次，定容至刻度。2. 標(biāo)準(zhǔn)曲線制作 取 6 支大試管，從 0 5 分別編號(hào)，按表 24-1 加入各試劑。表 2

5、4-1 蒽酮法測可溶性糖制作標(biāo)準(zhǔn)曲線的試劑量試 劑管 號(hào)012345100 g/mL 葡萄糖溶液（ mL ）00.20.40.60.81.0蒸餾水（ mL ）1.00.80.60.40.20蒽酮試劑（ mL ）5.05.05.05.05.05.0葡萄糖量（ g ）020406080100將各管快速搖動(dòng)混勻后，在沸水浴中煮 10 min ，取出冷卻，在 620 nm 波長下，用空白調(diào)零測定光密度，以光密度為縱坐標(biāo)，含葡萄糖量（ g ）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。3 樣品測定 取待測樣品提取液 1.0 mL 加蒽酮試劑 5 mL ，同以上操作顯色測定光密度。重復(fù) 3 次。四、結(jié)果計(jì)算溶性糖含量（）從標(biāo)準(zhǔn)

6、曲線查得糖的量（g）提取液體積（ml）稀釋倍數(shù)/測定用樣品液的體積(ml)樣品重量(g)106100式中： C 從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得葡萄糖量， g 。V T 樣品提取液總體積 , mL 。V 1 顯色時(shí)取樣品液量， mL 。W 樣品重（ g ）。 苯酚法測定可溶性糖一、原理植物體內(nèi)的可溶性糖主要是指能溶于水及乙醇的單糖和寡聚糖。苯酚法測定可溶性糖的原理是：糖在濃硫酸作用下，脫水生成的糠醛或羥甲基糠醛能與苯酚縮合成一種橙紅色化合物，在 10 100mg 范圍內(nèi)其顏色深淺與糖的含量成正比，且在 485 nm 波長下有最大吸收峰，故可用比色法在此波長下測定。苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的測定，方法

7、簡單，靈敏度高，實(shí)驗(yàn)時(shí)基本不受蛋白質(zhì)存在的影響，并且產(chǎn)生的顏色穩(wěn)定 160 min 以上。二、實(shí)驗(yàn)材料、試劑與儀器設(shè)備（一）實(shí)驗(yàn)材料新鮮的植物葉片。（二）試劑1. 90 苯酚溶液：稱取 90 g 苯酚（ AR ），加蒸餾水溶解并定容至 100 mL ，在室溫下可保存數(shù)月。2. 9 苯酚溶液：取 3 mL 90 苯酚溶液，加蒸餾水至 30 mL ，現(xiàn)配現(xiàn)用。3. 濃硫酸（比重 1.84 ）。4. 1 蔗糖標(biāo)準(zhǔn)液：將分析純蔗糖在 80 下烘至恒重，精確稱取 1.000 g ，加少量水溶解，移入 100 mL 容量瓶中，加入 0.5 mL 濃硫酸，用蒸餾水定容至刻度。5. 100 g/L 蔗糖標(biāo)準(zhǔn)液

8、：精確吸取 1 蔗糖標(biāo)準(zhǔn)液 l mL 加入 100 mL 容量瓶中，加蒸餾水定容。（三）儀器設(shè)備分光光度計(jì)，電爐，鋁鍋， 20 mL 刻度試管，刻度吸管 5 mL 1 支、 l mL 2 支，記號(hào)筆，吸水紙適量。三、實(shí)驗(yàn)步驟1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 取 20 mL 刻度試管 11 支，從 0 10 分別編號(hào)，按表 24 2 加入溶液和水，然后按順序向試管內(nèi)加入 1mL 9 苯酚溶液，搖勻，再從管液正面以 5 20 s 時(shí)間加入 5 mL 濃硫酸，搖勻。比色液總體積為 8 mL ，在室溫下放置 30 min ，顯色。然后以空白為參比，在 485 nm 波長下比色測定，以糖含量為橫坐標(biāo)，光密度為縱坐標(biāo)，

9、繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出標(biāo)準(zhǔn)直線方程。表 24-2 苯酚法測可溶性糖繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線的試劑量試 劑管 號(hào)01 、 23 、 45 、 67 、 89 、 10100g/L 蔗糖標(biāo)準(zhǔn)液（ mL ）00.20.40.60.81.0蒸餾水（ mL ）2.01.81.61.41.21.0蔗糖量（ g ）0204060801002 可溶性糖的提取 取新鮮植物葉片，擦凈表面污物，剪碎混勻，稱取 0.1 0.3 g, 共 3 份，分別放入 3 支刻度試管中，加入 5 10 mL 蒸餾水，塑料薄膜封口，于沸水中提取 30 min （提取 2 次），提取液過濾入 25 mL 容量瓶中，反復(fù)沖洗試管及殘?jiān)?，定容至刻度? 測定 吸取 0.5 mL 樣品液于試管中（重復(fù) 2 次），加蒸餾水 1.5 mL ，同制作標(biāo)準(zhǔn)曲線的步驟，按順序分別加入苯酚、濃硫酸溶液，顯色并測定光密度。由標(biāo)準(zhǔn)線性方程