從口腔脫落細胞中提取人類基因組DNA

1、從口腔脫落細胞中提取人類基因組 DNA一實驗?zāi)康?、了解從細胞中提取DNA勺基本原理2、學(xué)習(xí)從口腔脫落細胞中提取高分子量DNA勺基本操作步驟和會影響提取效果勺注意事項。二實驗原理1. 用蛋白酶K （使膜上蛋白變性分解）和去污劑 SDS（破壞細胞膜的脂質(zhì)結(jié) 構(gòu)）共同消化細胞。2. 然后酚、氯仿等有機溶劑進行抽提，進行DNA勺純化，去掉蛋白質(zhì)、RNA 多糖等生物大分子。3. 最后用無水乙醇沉淀DNA干燥后用TE溶解，在4C下可保存一年。三實驗步驟1、先用清水漱口。然后用舌頭舔頰粘膜上顎、用牙刮頰部，嘬咀，用分泌 出勺唾液反復(fù)漱口；將唾液吐到杯中。用 1ml 生理鹽水洗滌，后將 1.5ml 液體 轉(zhuǎn)

2、入1個干凈的EP管中，2000rpm離心5分鐘，倒掉上清。2、重復(fù)用 1.0ml 生理鹽水洗滌沉淀 1 次，離心，去上清。3、 沉淀中加500卩l(xiāng) 1x細胞裂解液（STE,打散細胞團、混勻，再加15卩I 20mg/ml蛋白酶K,充分混勻。55 C水浴30min。4、力卩500卩I飽和酚，輕搖混勻，室溫12000rpm離心10min。5、上清（注意不要吸到中間層白色絮狀物質(zhì)以及下層有機相）移至另一加入裝有500卩I氯仿的EP管，輕搖混勻，室溫12000rpm離心10min。6、吸取400卩I上清（注意不要吸到中間層白色絮狀物質(zhì)以及下層有機相） 至已裝有900卩l(xiāng)預(yù)冷無水乙醇的離心管，混合均勻，可

3、見白色絮狀沉淀， 10000rpm離心5min，DNA沉淀在管底。7、 去上清，加入 70聽醇1ml清洗沉淀，10000rpm離心5min，去上清（盡 量用小槍頭將液體去干凈，但注意不要將沉淀也吸走） ，室溫干燥5mi n,再用 50卩l(xiāng) TE buffer 溶解沉淀，4 C儲藏備用。四實驗結(jié)果五結(jié)果分析編號：100如圖所示，100號幾乎沒有提取出DNA只有很弱的一條帶，如果量再多一 些的話，應(yīng)該也看得到會有幾條帶。經(jīng)過分析后認為主要以下幾點原因：【11 .唾液稀釋過度，導(dǎo)致取到的細胞 很少?！?1 .在破碎細胞的時候進行的不徹底， 沒有混勻，導(dǎo)致DNA抽提不完全?！?1 .加入活性去污劑到加

4、熱30min的間隔有些長導(dǎo)致部分 DNA被 DNA水解酶 降解?！?1 .加入飽和酚的時候沒有搖勻，蛋白質(zhì)的去除不徹底，部分 DNA與蛋 白質(zhì)結(jié)合，在分離DNA去除蛋白質(zhì)的時候損失了不少 DNA此外，不同的條帶代表提取出的 DNA勺大小不同，在實驗過程中，可能由于 劇烈震蕩，或DNA水解酶的緣故使得 DNA鏈被打斷。因此出現(xiàn)了不同的幾個條 帶。六.注意事項1. 取唾液時既不能過分稀釋，也不能太粘稠，發(fā)現(xiàn)細胞不足時要及時補充2. 裂解細胞的時候，要充分混勻活性去污劑，但震蕩也不能太劇烈。最好及時放入水域鍋中加熱。3. 加苯酚后要充分混勻，之后離心，盡可能多的將上清吸出，但注意不要取 到中間的蛋白質(zhì)。4. 在最后用70%勺乙醇清洗DNA后要盡可能