免疫球蛋白的提取方法

1、免疫球蛋白的提取方法根據(jù)豬血中含有的各種蛋白質(zhì)的分子大小、 電荷多少、 溶解度以 及免疫學(xué)特征等 , 從血液中提取免疫球蛋白 , 常用的有鹽析法、 有機(jī)溶 劑沉淀法、有機(jī)聚合物沉淀法、變性沉淀法等。免疫球蛋白的提取鹽析法 鹽析法是分離蛋白質(zhì)的重要方法之一 , 是利用抗體與雜質(zhì)之間對(duì)鹽濃度敏感程度的差異性進(jìn)行的。 選擇一定 濃度范圍的鹽溶液使部分雜質(zhì)呈 “鹽析”狀態(tài), 抗體成分呈“鹽溶” 溶 解狀態(tài)。離心去除鹽析沉淀狀態(tài)的雜蛋白 , 得到的上清液再選擇一定 濃度范圍的鹽溶液使抗體成分呈鹽析狀態(tài) , 離心得到的沉淀物即為純 化的目標(biāo)抗體。 目前常用的鹽析法有飽和硫酸銨分步鹽析法、 辛酸沉 淀法、氯

2、化鐵沉淀法、多聚磷酸鹽鹽析法等。飽和硫酸銨分步鹽析硫 酸銨是鹽析法最常用的無機(jī)鹽 , 主要原因是它溶解度大 , 隨溫度變化 小, 對(duì)蛋白質(zhì)有保護(hù)作用 , 高濃度時(shí)可抑制微生物和蛋白酶的活性 , 價(jià) 格也不貴。免疫球蛋白的飽和硫酸銨分步鹽析法操作簡(jiǎn)單 , 對(duì)設(shè)備和操作條 件要求不高 , 便于工業(yè)化生產(chǎn)。其具體步驟為 : 取一定量血漿 , 加生理 鹽水稀釋 , 邊攪拌邊 緩慢加入飽和硫酸銨溶液至硫酸銨終濃度 20%4C靜置1h,4000r/min 離心10min,棄沉淀，上清液中繼續(xù)加入飽 和硫酸銨溶液至硫酸銨終濃度50%,濃氨水調(diào)pH值至7.0,4 C靜置2h,4000r/min離心20m棄上清

3、，將沉淀溶于生理鹽水，超濾除鹽濃縮, 濾液中無S2- 4為止,即得IgG粗提物。免疫球蛋白的辛酸沉淀法 辛酸沉淀法提取 IgG 時(shí), 對(duì)設(shè)備和操 作條件要求較高 , 在離心時(shí) , 轉(zhuǎn)速為 10000 r/min, 普通離心機(jī)達(dá)不到 要求。在調(diào)節(jié)溶液pH值時(shí)，要控制得當(dāng)，pH值稍低或稍高對(duì)IgG的得 率和純度都有很大影響 , 這些都限制了它的廣泛應(yīng)用。 其具體步驟 為: 取一定量O.lmol調(diào)pH值至4.5;室溫下邊攪拌邊緩慢 加入辛酸（按 辛酸25卩l(xiāng)/mL血清混合液添加）,繼續(xù)攪拌30min后,10000r/min離 心 30min, 棄沉淀 , 留上清液 , 上清液用多層紗布過濾 , 留濾

4、液, 然后將 濾液裝入透析袋中析48h,每810h換一次透析液，最后超濾濃縮即 得1gG粗提液。免疫球蛋白的氯化鐵沉淀法 氯化鐵沉淀法的原理是據(jù)蛋白質(zhì)分 子與金屬離子反應(yīng)形成鹽復(fù)合物的形式和種類的不同 , 達(dá)到分離不同 蛋白質(zhì)的目的。其具體步為 : 取一定量 的血漿（ 加抗凝劑 ）, 用生理鹽 水稀釋后 , 邊攪拌邊緩加入三氯化鐵溶液 , 調(diào) pH 值至 4.5, 攪拌 混,40 C水浴保溫60min后,4000r/min離心15min,棄去 沉淀,上清液 調(diào)pH值至9.0,常溫靜置2h,離心去沉淀過濾，上清液經(jīng)超濾濃縮即得 IgG 粗提。免疫球蛋白多聚磷酸鹽鹽析法 多聚磷酸鹽作為一種食品添加

5、劑 , 常被添加在肉制品中以提高產(chǎn)品的保水性或者作為絮凝劑在食品加 工中使用。多聚磷酸鹽作為沉淀劑具有安全和高效的特點(diǎn) , 是解決豬 血清 IgG 大規(guī)模分離制備有效途徑之一 , 但目前尚未有深入系統(tǒng)的研 究。其具體步驟 為: 取一定量的血清加入相應(yīng)量的多聚 磷酸鹽溶液 , 以0.1mol/L鹽酸調(diào)至所需pH值,在一定溫度水浴中保溫反應(yīng)一段時(shí) 間后, 取出 8000r/min 離心 10min, 棄沉淀, 收集上清液 , 即為 IgG 粗提 液。免疫球蛋白的有機(jī)溶劑沉淀法 有機(jī)溶劑沉淀法廣泛用于生產(chǎn)蛋 白質(zhì)制劑 , 常用的試劑是丙酮和乙醇等 , 其中以乙醇最為常用。目前 , 國(guó) 際 上 常 用 冷 乙 醇 法 有 兩 種 , 一 種 是 美 國(guó) 等 國(guó) 主 要使 用 的 Cohn-Oncley 法 , 另 一 種 是 西 歐 等 國(guó) 主 要 使 用 的 Kistler 和 Nitschmann法。冷乙醇分離法是 WHO規(guī)程和中國(guó)生物制品規(guī)程推薦 用的方法 , 不僅 分離物質(zhì)多 , 可同時(shí)分離多種血漿成分 , 分辨率高 , 提 純效果好 , 而且有抑菌、清除和