微生物的培養(yǎng)與利用演示課件

1、微生物的培養(yǎng)與利用 微生物的培養(yǎng)與分離 某種微生物數(shù)量的測定 培養(yǎng)基對微生物的選擇作用 利用微生物進(jìn)行發(fā)酵來生產(chǎn)特定的產(chǎn)物 發(fā)酵過程中亞硝酸鹽含量的測定,微生物,原核生物界,原生生物界,真菌界,病毒界,一、微生物的類群,(細(xì)菌、放線菌、藍(lán)藻),(酵母菌、霉菌、大型真菌),(草履蟲、變形蟲、衣藻),(噬菌體、艾滋病毒),特點(diǎn)：結(jié)構(gòu)都相當(dāng)簡單,個體多數(shù)十分微小.通常要用光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡才能看到，有的甚至沒有細(xì)胞結(jié)構(gòu).,無細(xì)胞結(jié)構(gòu),原核(細(xì)胞壁、膜、質(zhì)),真核(細(xì)胞壁、膜、質(zhì)、核),真核(細(xì)胞膜、質(zhì)、核),噬菌體 煙草花葉病毒 流感病毒,細(xì)菌(形狀菌) 放線菌,霉菌、蘑菇、酵母菌,衣藻、草履蟲

2、、變形蟲,DNA或RNA,DNA,DNA,DNA,增殖：吸附注入合成裝配釋放,分裂生殖 (二分裂),孢子生殖 出芽生殖,分裂生殖 有性生殖,擬核，大型環(huán)狀DNA,質(zhì)粒(含抗生素抗藥性，固氮基因),其成分為肽聚糖,芽孢,細(xì)菌的休眠體，對惡劣的環(huán)境有抵抗力,細(xì)菌的營養(yǎng),藍(lán)藻 硝化細(xì)菌等,菌落可作為菌種鑒定的重要依據(jù),細(xì)菌的代謝,自養(yǎng),硝化細(xì)菌、鐵細(xì)菌、硫細(xì)菌等。,異養(yǎng),大腸桿菌、乳酸菌、枯草桿菌等。,枯草桿菌、硝化細(xì)菌、鐵細(xì)菌、根瘤菌等。,破傷風(fēng)桿菌、乳酸菌等。,需氧型：,厭氧型：,二、培養(yǎng)基：,培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）是由人工方法配制而成的，專供微生物生長繁殖使用的混合營養(yǎng)液。,、概念：,、營養(yǎng)成份：,

3、營養(yǎng)成份：水、碳源、氮源、無機(jī)鹽 其它：、特殊營養(yǎng)物質(zhì)、氧氣（15）,3、培養(yǎng)基的類型和用途,（1）按物理狀態(tài)來分：固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基。 其中固體培養(yǎng)基用于菌種分離、鑒定菌落等。 （2）按功能來分，可分為選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基。 （3）按成分來分，可分為天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基。,（4）選擇培養(yǎng)基的常見用途,加入青霉素的培養(yǎng)基 分離酵母菌、霉菌等真菌 加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基 分離金黃色葡萄球菌 不加氮源的無氮培養(yǎng)基 分離固氮微生物 不加含碳有機(jī)物的無碳培養(yǎng)基 分離自養(yǎng)型微生物 加入青霉素等抗生素的培養(yǎng)基 分離導(dǎo)入了目的基因的受體細(xì)胞,1、伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基為常用鑒別培養(yǎng)基,2、剛果紅與纖維素等多

4、糖類物質(zhì)反應(yīng)形成紅色復(fù)合物，添加剛果紅的培養(yǎng)基呈紅色，接種的微生物若能夠分解纖維素，就會在其菌落的周圍形成透明圈,（5）鑒別培養(yǎng)基,4、培養(yǎng)基配制的操作步驟：,三、無菌技術(shù)操作,無菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。,四、微生物的純化培養(yǎng)： 自然環(huán)境中，微生物混在一起生長，要想純化培養(yǎng)，首先要將單個細(xì)胞與其他細(xì)胞分離開，進(jìn)而培養(yǎng)成可見的群體。 包括培養(yǎng)基的制備和純化微生物兩個階段，純化微生物時常用的接種方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法。,（一）.微生物實驗室培養(yǎng)的基本操作程序,1、器具的滅菌 2、培養(yǎng)基的配制 3、培養(yǎng)基的滅菌 4、倒平板 5、微生物接種 6、恒溫箱中培養(yǎng)

5、7、菌種的保存,1、制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基,計算,稱量,溶化,滅菌,倒平板,（1）、溶化時為什么要將牛肉膏連同稱量紙一起加熱?,可保證粘附在稱量紙上的牛肉膏也能溶于水中， 減少誤差。,（2）、加瓊脂的目的是什么?,作為凝固劑,（二）、純化大腸桿菌,計算,稱量,溶化,滅菌,倒平板,3、在滅菌前, 用牛皮紙、舊報紙包緊盛有培養(yǎng) 基的錐形瓶的目的是什么？,在滅菌時能避免水蒸汽凝結(jié)時浸濕棉塞，在取出培 養(yǎng)基錐形瓶時也起到隔絕空氣中雜菌污染的作用。,4、培養(yǎng)皿能否用高壓蒸汽滅菌？,不能，因為培養(yǎng)皿要保持干燥，應(yīng)該用干熱滅菌。,（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基,5、倒平板,（二）純化大腸桿菌,（一）制

6、備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基,三、純化大腸桿菌,（二）純化大腸桿菌,1、接種最常用方法有：,（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基,三、純化大腸桿菌,（二）純化大腸桿菌,1、接種最常用方法有：,平板劃線法和稀釋涂布平板法,（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基,三、純化大腸桿菌,（二）純化大腸桿菌,1、接種最常用方法有：,平板劃線法和稀釋涂布平板法,2、平板劃線法,（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基,三、純化大腸桿菌,劃線接種的基本步驟和說明:,1、接種最常用方法有：,平板劃線法和稀釋涂布平板法,2、平板劃線法,3、稀釋涂布法,（1）系列稀釋操作：,（二）純化大腸桿菌,（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基,三、純化

7、大腸桿菌,（1）系列稀釋操作：,1、接種最常用方法有：,平板劃線法和稀釋涂布平板法,2、平板劃線法,3、稀釋涂布法,（1）系列稀釋操作：,（二）純化大腸桿菌,（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基,三、純化大腸桿菌,（2）涂布平板操作,（2）涂布平板操作,1、接種最常用方法有：,2、平板劃線法,3、稀釋涂布法,（二）純化大腸桿菌,（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基,三、純化大腸桿菌,將接種后的培養(yǎng)基和一個未接種的培養(yǎng)基放入37恒溫箱中培養(yǎng)12h和24h后，觀察并記錄,四、菌種的保藏,1.斜面保藏,臨時保存,2.甘油保藏,長期保存,3、某種微生物數(shù)量的測定,生長：個體體積的增加 繁殖：個體生長到一定階段

8、，通過特定方式產(chǎn)生新 個體，即引起生命個體數(shù)量增加的生物學(xué)過程。,在微生物學(xué)中提到的“生長”，一般均指群體生長，這一點(diǎn)與 研究大生物時有所不同。,細(xì)菌太小，往往討論其群體生長。,（一）微生物生長概述,1、稀釋平板計數(shù)法 對樣品進(jìn)行適當(dāng)稀釋 單個微生物在適宜的固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部生長、繁殖 肉眼可見的菌落 對菌落數(shù)目的計數(shù)推測樣品中的微生物細(xì)胞數(shù),（二）以數(shù)量變化對微生物生長情況進(jìn)行測定,同一稀釋度三個以上重復(fù),取平均值；,每支移液管及涂布器只能接觸一個 稀釋度的菌液；,樣品充分混勻；,每個平板上的菌落數(shù)目合適，便于 準(zhǔn)確計數(shù)；,要求：,每克樣品中的菌株數(shù)=（C/V）* M,2.顯微鏡直接計數(shù)法

9、 采用細(xì)菌計數(shù)板或血球計數(shù)板，顯微鏡下直接計數(shù) （計算一定容積里樣品中微生物的數(shù)量）。,取清潔無油的血球計數(shù)板，在計數(shù)室上面加蓋血蓋片。 取酵母菌液，搖勻，用滴管由蓋玻片邊緣滴一小滴，使菌液自行滲入，計數(shù)室內(nèi)不得有氣泡。 用10鏡觀察并將計數(shù)室移至視野中央。 在10鏡下計數(shù)：計數(shù)4個（或5個）中格的平均值，然后求得每個中格的平均值。乘上16（或25）就得出計數(shù)區(qū)總菌數(shù)，最后再換算到每mL菌液中的含菌數(shù)。 注意事項：計上不計下，計左不計右。出芽計一半,必修3P68,顯微鏡直接計數(shù)法缺點(diǎn)： 不能區(qū)分死菌與活菌； 不適于對運(yùn)動細(xì)菌的計數(shù)； 需要相對高的細(xì)菌濃度； 個體小的細(xì)菌在顯微鏡下難以觀察；,土

10、壤取樣 選擇培養(yǎng)（此步是否需要，應(yīng)根據(jù)樣品中目的菌株數(shù)量的多少來確定） 梯度稀釋 將菌懸液涂布到有特定選擇作用的培養(yǎng)基上 挑選單菌落 發(fā)酵培養(yǎng),土壤中某樣品細(xì)菌的分離與計數(shù)流程圖表示如下：,（09寧夏理綜）32生物選考題 A生物選修I生物技術(shù)實踐 某小組同學(xué)為了調(diào)查湖水中細(xì)菌的污染情況而進(jìn)行了實驗。實驗包括制備培養(yǎng)基、滅菌、接種及培養(yǎng)、菌落觀察計數(shù)。請回答與此實驗相關(guān)的問題。 （1）培養(yǎng)基中含有的蛋白胨、淀粉分別為細(xì)菌培養(yǎng)提供了_ 和_ 。除此之外，培養(yǎng)基還必須含有的基本成分是_ 和 _。 （2）對培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌，應(yīng)該采用的方法是_ _ _。,碳源,氮源,無機(jī)鹽,高壓蒸汽滅菌,水,（09寧夏理

11、綜）32生物選考題 （3）為了盡快觀察到細(xì)菌培養(yǎng)的實驗結(jié)果，應(yīng)將接種了湖水樣品的平板置于_ 中培養(yǎng)，培養(yǎng)的溫度設(shè)定在37。要使該實驗所得結(jié)果可靠，還應(yīng)該同時在另一平板上接種_ 作為對照進(jìn)行實驗。 （4）培養(yǎng)20小時后，觀察到平板上有形態(tài)和顏色不同的菌落，這說明湖水樣品中有_種細(xì)菌。一般說來，菌落總數(shù)越多，湖水遭受細(xì)菌污染的程度越_。 （5）如果提高培養(yǎng)基中NaCl的濃度，可以用于篩選耐_細(xì)菌，這種培養(yǎng)基被稱為_。,恒溫培養(yǎng)箱,無菌水,多,高,鹽（或NaCl）,選擇性培養(yǎng)基,4、利用微生物進(jìn)行發(fā)酵來生產(chǎn)特定的產(chǎn)物,（1）果酒和果醋的制作,（2）腐乳的制作,（1）果酒和果醋的制作,果酒制作的原理：

12、,酵 母 菌,有氧呼吸,無氧呼吸,最適溫度,20 0C,醋 酸 菌,最適溫度,30 0C 35 0C,特 性,好氧細(xì)菌,醋酸菌死亡,果醋制作的原理：,實驗流程示意圖:,（1）毛霉菌 （2）根霉菌 （3）曲霉 （4）青霉 （5）酵母菌,1、釀造腐乳的微生物,（2）腐乳的制作,2、腐乳制作的原理,腐乳釀造是利用豆腐坯上培養(yǎng)的毛霉或根霉，培養(yǎng)及腌制期間由外界侵入微生物的繁殖，以及配料中加入的紅曲中的紅曲霉、面包曲中的米曲霉、酒類中的酵母等所分泌的酶類，在發(fā)酵期間，引起極其復(fù)雜的化學(xué)變化。 蛋白質(zhì)：水解成肽、氨基酸； 淀粉：糖化，發(fā)酵成乙醇和其他醇類及有機(jī)酸； 同時輔料中的酒類及添加的各種香辛料等也共

13、同參與作用，合成復(fù)雜的酯類，最后形成腐乳所特有的色、香、味、體等，使成品細(xì)膩、柔糯而可口。,3、腐乳制作的實驗流程,讓豆 腐上 長出 毛霉,5、發(fā)酵過程中亞硝酸鹽含量的測定,（一）、泡菜的制作,1、泡菜制作基礎(chǔ)知識 （1）乳酸菌 乳酸菌是異養(yǎng)厭氧型細(xì)菌，在無氧條件下，將葡萄糖分解成乳酸。常見的乳酸菌有乳酸鏈球菌和乳酸桿菌，乳酸桿菌常用于制作酸奶。,（2）亞硝酸鹽 亞硝酸鹽(包括亞硝酸鉀和亞硝酸鈉)為白色粉末，易溶于水。當(dāng)人體攝入的亞硝酸鹽總量達(dá)到0.30.5g時，會引起中毒，達(dá)3g時會引起死亡。,（3）腌制條件 腌制過程中，要注意控制腌制的時間、溫度和食鹽的用量。 溫度過高、食鹽用量不足10、腌制時間過短，容易造成細(xì)菌大量繁殖，亞硝酸鹽含量增加。一般在腌制10天后，亞硝酸鹽的含量開始下降。,（二）、亞硝酸鹽含量的測定,1、測定亞硝酸鹽含量的原理