第九章微生物遺傳和變異

1、第九章 微生物遺傳重點(diǎn)與難點(diǎn)剖析 一遺傳的物質(zhì)基礎(chǔ) 1轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn) 1928, GriffithRII + SIII(加熱殺死) 小鼠死 血液中分離出SIII1944, Avery等 證明只有SIII的DNA才能將RII轉(zhuǎn)化為SIII, DNA是遺傳物質(zhì).RII + SIII的DNA SIII型細(xì)菌 SIII的DNA+除DNA酶以外的酶SIII的DNA+DNA酶SIII的RNA RII型細(xì)菌 RII型細(xì)菌SIII的蛋白質(zhì)SIII的莢膜多糖2噬菌體感染實(shí)驗(yàn) 1952年Hershey 證明T2噬菌體的DNA含有整套遺傳信息3煙草花葉病毒拆分實(shí)驗(yàn)煙草花葉病毒拆分實(shí)驗(yàn)1956年Fraenkel-Conra

2、t 煙草花葉病毒拆分實(shí)驗(yàn)證明RNA是遺傳物質(zhì)二微生物的基因組 基因組（genome）：一個(gè)物種的單倍體的所有染色體及其所包含的遺傳信息的總稱.細(xì)胞或病毒中的所有基因以及非基因的DNA序列的總稱, 包括結(jié)構(gòu)基因,調(diào)控序列,功能目前尚不清楚的DNA序列.基因：編碼多肽、rRNA和tRNA的多核苷酸序列。細(xì)菌、真核生物、古生菌基因組主要特點(diǎn)比較：染色體特點(diǎn)遺傳信息連續(xù)性操縱子結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)基因拷貝數(shù)/重復(fù)序列負(fù)責(zé)信息傳遞功能的基因（復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、翻譯）細(xì)菌Escherichia coli 的基因組染色體為雙鏈環(huán)狀的DNA分子（單倍體）一般不含內(nèi)含子，遺傳信息是連續(xù)的而不是中斷的大量存在單拷貝重復(fù)序列少而短細(xì)

3、菌類真核Saccharomyces cerevisiae (釀酒酵母)的基因組典型的真核染色體結(jié)構(gòu)有間隔區(qū)（即非編碼區(qū)）和內(nèi)含子序列，斷裂基因沒有明顯的操縱子結(jié)構(gòu)高度重復(fù)真核生物類古生菌Methanococcus jannaschii (詹氏甲烷球菌)的基因組染色體為雙鏈環(huán)狀的DNA分子（單倍體）；另外有有5個(gè)組蛋白基因，暗示其染色體結(jié)構(gòu)類似與真核生物同細(xì)菌同細(xì)菌同細(xì)菌類似于真核生物三質(zhì)粒質(zhì)粒（plasmid）：一種獨(dú)立于染色體外，能進(jìn)行自主復(fù)制的細(xì)胞質(zhì)遺傳因子，主要存在于各種微生物細(xì)胞中。1質(zhì)粒的分子結(jié)構(gòu)：通常以共價(jià)閉合環(huán)狀(covalently closed circle，簡稱CCC)的超

4、螺旋雙鏈DNA分子存在于細(xì)胞中；也發(fā)現(xiàn)有線型雙鏈DNA質(zhì)粒和RNA質(zhì)粒；質(zhì)粒分子的大小范圍從1kb左右到1000kb；（細(xì)菌質(zhì)粒多在10kb以內(nèi)）2質(zhì)粒的檢測：l 提取所有胞內(nèi)DNA后電鏡觀察；l 超速離心或瓊脂糖凝膠電泳后觀察；l 對于實(shí)驗(yàn)室常用菌，可用質(zhì)粒所帶的某些特點(diǎn)，如抗藥性初步判斷。對于由于三種構(gòu)型同時(shí)存在時(shí)造成的多帶現(xiàn)象（提取質(zhì)粒時(shí)造成或自然存在），可以進(jìn)行特異性單酶切，使其成為一條帶。3質(zhì)粒的主要類型質(zhì)粒所含的基因?qū)λ拗骷?xì)胞一般是非必需的；在某些特殊條件下，質(zhì)粒有時(shí)能賦予宿主細(xì)胞以特殊的機(jī)能，從而使宿主得到生長優(yōu)勢。質(zhì)粒所編碼的功能和賦予宿主的表型效應(yīng):致育因子（Fertilit

5、y factor，F(xiàn)因子）抗性因子（Resistance factor，R因子，抗藥、抗重金屬 ）產(chǎn)細(xì)菌素的質(zhì)粒（Bacteriocin production plasmid）毒性質(zhì)粒（virulence plasmid）代謝質(zhì)粒（Metabolic plasmid）隱秘質(zhì)粒（cryptic plasmid）高拷貝數(shù)(high copy number)質(zhì)粒（每個(gè)宿主細(xì)胞中可以有10-100個(gè)拷貝）-松弛型質(zhì)粒(relaxed plasmid)低拷貝數(shù)(low copy number)質(zhì)粒（每個(gè)宿主細(xì)胞中可以有1-4個(gè)拷貝）- 嚴(yán)謹(jǐn)型質(zhì)粒(stringent plasmid)窄宿主范圍質(zhì)粒(na

6、rrow host range plasmid)（只能在一種特定的宿主細(xì)胞中復(fù)制）廣宿主范圍質(zhì)粒(broad host range plasmid)（可以在許多種細(xì)菌中復(fù)制）4質(zhì)粒的不親和性某些質(zhì)粒可以在同一個(gè)細(xì)菌中并存，能并存的質(zhì)粒屬于不同的不親和群（親和現(xiàn)象），不能并存的質(zhì)粒屬于同一不親和群（不親和現(xiàn)象）。 四、轉(zhuǎn)座因子轉(zhuǎn)座因子（transposable element）：位于染色體或質(zhì)粒上的一段能改變自身位置的DNA序列，廣泛分布于原核和真核細(xì)胞中。遺傳學(xué)效應(yīng) 插入突變（無義，有義）； 導(dǎo)致染色體畸變（不同位置上的2個(gè)轉(zhuǎn)座因子發(fā)生同源重組，導(dǎo)致的染色體DNA缺失、倒位）； 基因移動(dòng)和重排

7、。原核生物中的 3類 : IS（insertion sequence）;Tn轉(zhuǎn)座子（transposon）; 特殊病毒1IS最簡單的轉(zhuǎn)座因子，250-1600bp，只含有轉(zhuǎn)座所必須的轉(zhuǎn)座酶基因，分布在細(xì)菌的染色體、質(zhì)粒和某些噬菌體DNA上。引起無義突變，可以回復(fù)。IR（inverted terminal repeat） 2Tn轉(zhuǎn)座子授予宿主某些遺傳特性的基因，如抗生素，抗毒物基因，乳糖發(fā)酵基因等。 2種類型 復(fù)合轉(zhuǎn)座子，2端為順向或反向的IS，其他基因位于中部， Tn5 復(fù)雜轉(zhuǎn)座子，2端為IR（30-50bp），其他基因位于中部，Tn3整合子(integrons) 是存在于細(xì)菌中可移動(dòng)的基因捕

8、獲和表達(dá)的遺傳單位,通過轉(zhuǎn)座子或質(zhì)粒在細(xì)菌中傳播遺傳物質(zhì)。大多數(shù)細(xì)菌的耐藥性都是由于獲得外源耐藥基因而引起的.近年來,國外學(xué)者通過大量實(shí)驗(yàn)證明,整合子是細(xì)菌,尤其是革蘭陰性桿菌多重耐藥性迅速發(fā)展的主要原因。3特殊病毒 Mu-噬菌體 Ecoli 的溫和噬菌體，可以溶源化，也可裂解生長，含有噬菌體生長繁殖的必需基因，同時(shí)含有轉(zhuǎn)座所必須的基因，因此是目前發(fā)現(xiàn)的最大轉(zhuǎn)座因子。全長39kb，2端無反向重復(fù)序列。五基因突變突變：可以通過復(fù)制遺傳的DNA結(jié)構(gòu)的任何改變.2類 : 基因突變: 1個(gè)基因內(nèi)部DNA結(jié)構(gòu)的任何變化 染色體畸變: 大片段DNA的缺失、重復(fù)和倒位.DNA結(jié)構(gòu)的任何改變可以通過DNA復(fù)制

9、而成為真正的突變，也可以重新變?yōu)樵瓉淼慕Y(jié)構(gòu)，這取決于修復(fù)作用和其它多種因素。1基因突變類型及其分離密碼子: 3個(gè)堿基對應(yīng)1個(gè)氨基酸,是生物內(nèi)負(fù)載遺傳信息的基本單位. 特點(diǎn): 三聯(lián)體密碼子; 簡并性 4種堿基 64個(gè)三聯(lián)體密碼( 3個(gè)終止密碼 , UGA, UAG, UAA, 61個(gè)密碼子, 20氨基酸); 非重疊性堿基改變與基因突變: 同義突變, 無義突變, 移碼突變, 錯(cuò)義突變 統(tǒng)一圖表型變化及其分離表型: 可以觀察、檢測到的個(gè)體性狀或特征，是基因型在一定環(huán)境條件下的表現(xiàn)?；蛐停篋NA的堿基順序幾種常用的表型變化的突變型及其分離: 營養(yǎng)缺陷型;抗藥性突變型;條件致死突變型;其他突變型. 營

10、養(yǎng)缺陷型（auxotroph）一種缺乏合成其生存所必須的營養(yǎng)物（包括氨基酸、維生素、堿基等）的突變型，只有從周圍環(huán)境或培養(yǎng)基中獲得這些營養(yǎng)或其前體物（precursor）才能生長。表型判斷的標(biāo)準(zhǔn)：在基礎(chǔ)培養(yǎng)基上不能生長(負(fù)選擇標(biāo)記)影印平板（Replica plating）法: Lederberg在1952年建立營養(yǎng)缺陷型的表示方法：在具體使用時(shí)多用 hisC 和 hisC+ ，分別表示缺陷型和野生型 抗藥性突變型（resistant mutant）基因突變使菌株對某種或某幾種藥物，特別是抗生素，產(chǎn)生抗性。特點(diǎn)：正選擇標(biāo)記（突變株可直接從抗性平板上獲得-在加有相應(yīng)抗生素的平板上，只有抗性突變能

11、生長。所以很容易分離得到。）表示方法：所抗藥物的前三個(gè)小寫斜體英文字母加上“r”表示, strr 和strs 分別表示對鏈霉素的抗性和敏感性 條件致死突變型（conditional lethal mutant）在某一條件下具有致死效應(yīng)，而在另一條件下沒有致死效應(yīng)的突變型。常用的條件致死突變是溫度敏感突變，用ts（temperaturesensitive）表示，這類突變在高溫下（如42）是致死的，但可以在低溫（如25-30）下得到這種突變。(負(fù)選擇標(biāo)記)影印平板法分離, 和營養(yǎng)缺陷型不同的是培養(yǎng)基, 完全培養(yǎng)基 其它突變類型: 形態(tài), 菌落形態(tài)、顏色、噬菌斑形成，etc. 非選擇性突變, 突變株

12、和野生型菌株均可生長，但可從形態(tài)特征上進(jìn)行區(qū)分。2基因突變的分子基礎(chǔ)突變 自發(fā)突變 環(huán)境因素的影響，DNA復(fù)制過程的偶然錯(cuò)誤等而導(dǎo)致，一般頻率較低，通常為10-6-10-9 。誘變 某些物理、化學(xué)因素對生物體的DNA進(jìn)行直接作用，突變以較高的頻率產(chǎn)生。(1). 自發(fā)突變特點(diǎn):非對應(yīng)性(自發(fā)性，隨機(jī)性); 稀有性; 規(guī)律性; 獨(dú)立性; 遺傳和回復(fù)性; 可誘變性突變率：每單位群體繁殖一代形成突變體的數(shù)目。如突變率為110-8，既意味著當(dāng)108個(gè)細(xì)胞分裂一次平均形成一個(gè)突變體。三個(gè)經(jīng)典實(shí)驗(yàn): 變量實(shí)驗(yàn)、涂布實(shí)驗(yàn)、影印實(shí)驗(yàn)證明突變的性狀與引起突變的原因間無直接對應(yīng)關(guān)系！突變是自發(fā)產(chǎn)生的! 分子基礎(chǔ) :

13、自發(fā)突變的原因 : DNA聚合酶產(chǎn)生的錯(cuò)誤; DNA的物理損傷; 重組 ; 轉(zhuǎn)座; 等主要原因: 堿基的互變異構(gòu); 移碼突變; 轉(zhuǎn)座因子插入突變.移碼突變的遺傳學(xué)效應(yīng) ： 插入突變（無義，有義）； 導(dǎo)致染色體畸變； 基因移動(dòng)和重排。RNA基因組的突變 :高于DNA基因組1000倍以上。部分原因: RNA復(fù)制酶沒有糾正活性；沒有類似于DNA的修復(fù)機(jī)制。(2). 誘發(fā)突變許多化學(xué)、物理和生物因子（稱為誘變劑mutagen) 能夠提高突變頻率，誘發(fā)突變并非是用誘變劑產(chǎn)生新的突變，而是通過不同的方式提高突變率。 誘變劑 ： 堿基類似物(Base analog)：5-溴尿嘧啶和2-氨基嘌呤 插入染料(i

14、ntercalating dye) ：溴化乙錠和吖啶橙 直接與DNA堿基起化學(xué)反應(yīng)的誘變劑： 亞硝酸:引起含NH2基的堿基(A.G.C)產(chǎn)生氧化脫氨反應(yīng)，造成堿基置換。 羥胺:幾乎只和胞嘧啶發(fā)生反應(yīng)，因此只引起GCAT的轉(zhuǎn)換. 烷化劑:甲磺酸乙酯和亞硝基胍烷基化鳥嘌呤和腺嘌呤, 烷化后的堿基也像堿基結(jié)構(gòu)類似物一樣能引起堿基配對的錯(cuò)誤。 輻射和熱 ：紫外線：T-T二聚體，SOS修復(fù) -射線，-射線：DNA單鏈斷裂；自由基。 熱：胞嘧啶脫氨基而成為尿嘧啶 生物誘變因子 ：誘變劑與致癌物質(zhì)Ames試驗(yàn)誘變劑的共性原則：化學(xué)藥劑對細(xì)菌的誘變率與其對動(dòng)物的致癌性成正比。超過95%的致癌物質(zhì)對微生物有誘變

15、作用；90%以上的非致癌物質(zhì)對微生物沒有誘變作用。美國加利福尼亞大學(xué)的Bruce Ames教授于1966年發(fā)明，因此稱為Ames試驗(yàn)具體操作：檢測鼠傷寒沙門氏菌(Salmonella typhmurium)組氨酸營養(yǎng)缺陷型菌株(his)的回復(fù)突變率。(3) 回復(fù)突變(reverse mutation或back mutation)：突變體失去的野生型性狀，可以通過第二次突變得到恢復(fù)，這種第二次突變稱為回復(fù)突變。由于生物體內(nèi)、體外可能存在的差異，可在體外加入哺乳動(dòng)物（如大鼠）微粒體酶系統(tǒng)，使待測物活化，使Ames試驗(yàn)的準(zhǔn)確率達(dá)80-90%。六、DNA損傷及其修復(fù)主要的四種類型：光復(fù)活作用；切除修復(fù)

16、；重組修復(fù)； SOS修復(fù)光修復(fù)（光能）：光復(fù)活作用暗修復(fù)（ATP）：切除修復(fù)，重組修復(fù)，SOS修復(fù)1. 光復(fù)活作用：光解酶在黑暗中專一性識別嘧啶二聚體，并與之結(jié)合，形成酶-DNA復(fù)合物，當(dāng)有光照時(shí)，酶利用光能將二聚體拆開，恢復(fù)原狀，酶再釋放出來2. 切除修復(fù)暗修復(fù)的一種，是細(xì)胞內(nèi)主要的 修復(fù)系統(tǒng)。四種蛋白質(zhì)聯(lián)合作用：UvrA，UvrB，UvrC和UvrD3. 重組修復(fù)：越過損傷而進(jìn)行的修復(fù)。DNA的嘧啶二聚體仍然需經(jīng)過其他的修復(fù)系統(tǒng)加以修復(fù)，或經(jīng)過細(xì)胞的分裂而稀釋。4. SOS修復(fù)DNA分子受到較大范圍的重大損傷時(shí)誘導(dǎo)產(chǎn)生的一種應(yīng)急反應(yīng)。涉及一批修復(fù)基因及產(chǎn)物：recA（RecA，單鏈DNA的

17、結(jié)合活性，以及由此而出的蛋白酶活性）lexA（LexA，調(diào)節(jié)蛋白，與操作子結(jié)合阻止基因的轉(zhuǎn)錄,可以被RecA DNA切割成2個(gè)部分,此時(shí)無阻遏功能）uvrA（UvrA）uvrB（UvrB）uvrC（UvrC）RecA與DNA的結(jié)合能夠抑制DNA聚合酶III的3-5外切酶活性,使DNA聚合酶順利通過損傷部位,以錯(cuò)誤為代價(jià)的快速修復(fù)過程,導(dǎo)致突變而保存生命.七、細(xì)菌基因轉(zhuǎn)移和重組細(xì)菌的四種水平基因轉(zhuǎn)移形式接合：細(xì)胞與細(xì)胞的直接接觸（由F因子介導(dǎo)）轉(zhuǎn)導(dǎo)：由噬菌體介導(dǎo)轉(zhuǎn)化：游離DNA分子 + 感受態(tài)細(xì)胞原生質(zhì)體融合：細(xì)胞原生質(zhì)體融合1細(xì)菌的接合作用(conjugation) 機(jī)制 (大腸桿菌的接合機(jī)制

18、)接合作用是由一種被稱為F因子的質(zhì)粒介導(dǎo)，F(xiàn)因子的分子量通常為5107(94.5kb)，上面有編碼細(xì)菌產(chǎn)生性菌毛（sex pili）及控制接合過程進(jìn)行的20多個(gè)基因。含有F因子的細(xì)胞：“雄性”菌株（F+），其細(xì)胞表面有性菌毛；不含F(xiàn)因子的細(xì)胞：“雌性”菌株（F-），細(xì)胞表面沒有性菌毛。F因子既可以脫離染色體在細(xì)胞內(nèi)獨(dú)立存在，也可插入（整合）到染色體上.F因子的四種細(xì)胞形式: F 菌株， 不含F(xiàn)因子，沒有性菌毛，但可以通過 接合作用接收F因子而變成雄性菌株（F+）； F+菌株， F因子獨(dú)立存在，細(xì)胞表面有性菌毛。 Hfr菌株，F(xiàn)因子插入到染色體DNA上，細(xì)胞表面有性菌毛。 F菌株，Hfr菌株內(nèi)的

19、F因子因不正常切割而脫離染色體時(shí)， 形成游離的但攜帶一小段染色體基因的F因子，特稱為F因 子。 細(xì)胞表面同樣有性菌毛。(1) F+F雜交F+菌株的F因子向F細(xì)胞轉(zhuǎn)移，但含F(xiàn)因子的宿主細(xì)胞的染色體DNA一般不被轉(zhuǎn)移。雜交的結(jié)果：給體細(xì)胞和受體細(xì)胞均成為F+細(xì)胞理化因子的處理可將F因子消除而使F+菌株變成F菌株(2) Hfr F雜交（參見P 217）Hfr菌株的F因子插入到染色體DNA上，因此只要發(fā)生接合轉(zhuǎn)移轉(zhuǎn)移過程，就可以把部分甚至全部細(xì)菌染色體傳遞給F-細(xì)胞并發(fā)生重組，由此而得名為高頻重組菌株。Hfr菌株仍然保持著F+細(xì)胞的特征，具有F性菌毛，并象F+一樣與F細(xì)胞進(jìn)行接合。所不同的是，當(dāng)Ori

20、T序列被缺刻螺旋酶識別而產(chǎn)生缺口后，F(xiàn)因子的先導(dǎo)區(qū)(leading region)結(jié)合著染色體DNA向受體細(xì)胞轉(zhuǎn)移，F(xiàn)因子除先導(dǎo)區(qū)以外，其余絕大部分是處于轉(zhuǎn)移染色體的末端，由于轉(zhuǎn)移過程常被中斷，因此F因子不易轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞中，故HfrF雜交后的受體細(xì)胞(或接合子)大多數(shù)仍然是F。(3) FF雜交Hfr菌株內(nèi)的F因子因不正常切割而脫離染色體時(shí)，形成游離的但攜帶一小段染色體基因的F因子，特稱為F因子。FF-與F+F-的不同：給體的部分染色體基因隨F一起轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞a）與染色體發(fā)生重組；b）繼續(xù)存在于F因子上，形成一種部分二倍體；細(xì)胞基因的這種轉(zhuǎn)移過程又常稱為性導(dǎo)(sexduction），F(xiàn)因子轉(zhuǎn)導(dǎo)（

21、F-duction），F(xiàn)因子媒介的轉(zhuǎn)導(dǎo)（F-mediated transduction）。2 細(xì)菌的轉(zhuǎn)導(dǎo)（transduction）由噬菌體介導(dǎo)的細(xì)菌細(xì)胞間進(jìn)行遺傳交換的一種方式：一個(gè)細(xì)胞的DNA通過病毒載體的感染轉(zhuǎn)移到另一個(gè)細(xì)胞中。能將一個(gè)細(xì)菌宿主的部分染色體或質(zhì)粒DNA帶到另一個(gè)細(xì)菌的噬菌體稱為轉(zhuǎn)導(dǎo)噬菌體細(xì)菌轉(zhuǎn)導(dǎo)的二種類型：普遍性轉(zhuǎn)導(dǎo)，局限性轉(zhuǎn)導(dǎo)(1) 普遍性轉(zhuǎn)導(dǎo)（generalized transduction）噬菌體可以轉(zhuǎn)導(dǎo)給體染色體的任何部分到受體細(xì)胞中的轉(zhuǎn)導(dǎo)過程(2) 局限性轉(zhuǎn)導(dǎo)（specialized transduction）溫和噬菌體感染，整合到細(xì)菌染色體的特定位點(diǎn)上宿主細(xì)胞

22、發(fā)生溶源化，溶源菌因誘導(dǎo)而發(fā)生裂解時(shí)，在前噬菌體二側(cè)的少數(shù)宿主基因因偶爾發(fā)生的不正常切割而連在噬菌體DNA上（幾率一般僅有10-6），部分缺陷的溫和噬菌體，把供體菌的少數(shù)特定基因轉(zhuǎn)移到受體菌中。3細(xì)菌的遺傳轉(zhuǎn)化（genetic transformation）同源或異源的游離DNA分子(質(zhì)粒和染色體DNA)被自然或人工感受態(tài)細(xì)胞攝取，并得到表達(dá)的水平方向的基因轉(zhuǎn)移過程自然遺傳轉(zhuǎn)化（natural genetic transformation）人工轉(zhuǎn)化（artificial transformation）進(jìn)行轉(zhuǎn)化必要的二方面條件：感受態(tài)的受體細(xì)胞:自然感受態(tài)的出現(xiàn)是細(xì)胞一定生長階段的生理特性，受細(xì)

23、菌自身的基因控制； 人工感受態(tài)則是通過人為誘導(dǎo)的方法，使細(xì)胞具有攝取DNA的能力，或人為地將DNA導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)。外源游離DNA分子:轉(zhuǎn)染(transfection)：噬菌體DNA被感受態(tài)細(xì)胞攝取并產(chǎn)生有活性的病毒顆粒。特點(diǎn)：提純的噬菌體DNA以轉(zhuǎn)化的（而非感染）途徑進(jìn)入細(xì)胞并表達(dá)后產(chǎn)生完整的病毒顆粒。4原生質(zhì)體融合兩個(gè)親本菌株去除細(xì)胞壁后的一種體細(xì)胞雜交育種方法(1) 親本及其遺傳標(biāo)記選擇營養(yǎng)缺陷、抗性標(biāo)記、熒光染色標(biāo)記等(2) 原生質(zhì)體制備 高滲溶液：無機(jī)鹽（KCl, NaCl, MgSO4）、 有機(jī)物(蔗糖、甘露醇、山梨醇) 水解酶： 溶菌酶蝸牛酶、纖維素酶、葡聚糖酶）(3) 原生質(zhì)體融合化學(xué)融合法：30%-50%PEG(1000-6000)誘導(dǎo)，滲透壓，低速離心1000-2000g電融合:細(xì)胞在電場作用下,細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生偶極化,促使細(xì)胞排列成串,外加瞬間高頻直流強(qiáng)電壓作用,原生質(zhì)膜穿孔復(fù)原(4) 原生質(zhì)體再生再生培養(yǎng)基高滲，無機(jī)鹽/有機(jī)物，防止機(jī)械損傷(5) 融合子選擇營養(yǎng)缺陷型, 抗性, 熒光染色標(biāo)記, 鈍化選擇(親本一方融合前502-3h) ；連續(xù)傳代幾次四種方法比較類型受體供體是否接觸DNA傳遞媒介重組涉及DNA大小接合是F因子部