小鼠骨髓細(xì)胞染色體制備與觀察課件

1、小鼠骨髓細(xì)胞染色體制備與觀察,1,實(shí)驗(yàn)二 小鼠骨髓細(xì)胞染色體制備與觀察,小鼠骨髓細(xì)胞染色體制備與觀察,2,實(shí)驗(yàn)原理,小鼠骨髓細(xì)胞始終保持較強(qiáng)的分裂活性，且細(xì)胞數(shù)量較多,小鼠骨髓細(xì)胞染色體制備與觀察,3,秋水仙素，可以抑制細(xì)胞分裂時(shí)的紡錘體形成，使處于增殖狀態(tài)的細(xì)胞停止在中期。注射到動(dòng)物活體內(nèi)，可以收集到較多的中期分裂相的骨髓細(xì)胞,小鼠骨髓細(xì)胞染色體制備與觀察,4,小鼠骨髓細(xì)胞染色體制備與觀察,5,實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c要求： 1.熟悉小鼠骨髓細(xì)胞染色體制備方法。 2.了解小鼠染色體核型。 3.認(rèn)識(shí)秋水仙素對(duì)細(xì)胞增殖的作用。 器材與試劑 內(nèi)容與方法 （一）小鼠骨髓細(xì)胞染色體制備 預(yù)處理,取材，收集細(xì)胞,低滲

2、,固定、再固定,滴片,染色,小鼠骨髓細(xì)胞染色體制備與觀察,6,取材前23h，向腹腔內(nèi)注射秋水仙素。注射濃度隨動(dòng)物種類不同而異。秋水仙素的主要作用是使分裂細(xì)胞阻斷在有絲分裂中期，增加中期分裂相的比例,腹腔內(nèi)注射秋水仙素23小時(shí)后，頸椎脫臼處死小鼠,小鼠骨髓細(xì)胞染色體制備與觀察,7,小白鼠骨骼標(biāo)本,小鼠骨髓細(xì)胞染色體制備與觀察,8,小鼠骨髓細(xì)胞染色體制備與觀察,9,取出小鼠的后肢股骨，注意不要將股骨剪斷，否則容易造成骨髓細(xì)胞的流失,小鼠骨髓細(xì)胞染色體制備與觀察,10,用紗布擦股骨上的肌肉組織，清除干凈,注射器抽取生理鹽水沖洗骨髓,小鼠骨髓細(xì)胞染色體制備與觀察,11,收集細(xì)胞,暴露骨髓腔， 反復(fù)沖洗

3、骨髓腔獲得骨髓細(xì)胞， 收集到離心管中, 定容至6ml,小鼠骨髓細(xì)胞染色體制備與觀察,12,滴23滴于玻片上，吹氣， 在酒精燈火焰過火8次， 做記號(hào)，涼干，染色,滴片,滴片后，將片子侵入Giemsa染液缸中，1015分鐘，棄去染液，水洗，晾干，鏡檢,小鼠骨髓細(xì)胞染色體制備與觀察,13,小鼠骨髓細(xì)胞染色體制備與觀察,14,小鼠骨髓細(xì)胞染色體制備與觀察,15,作業(yè)與思考題,1、繪制一個(gè)你所觀察到的小鼠骨髓細(xì)胞染色體中期分裂相。 2、本實(shí)驗(yàn)中秋水仙素、低滲液、固定液各起什么作用？ 3、簡述實(shí)驗(yàn)中應(yīng)注意那些關(guān)鍵問題,小鼠骨髓細(xì)胞染色體制備與觀察,16,二）染色體標(biāo)本片觀察 1.標(biāo)本片質(zhì)量評(píng)價(jià) （1）細(xì)胞

4、密度合適、均勻； （2）背景干凈，細(xì)胞核和染色體清晰； （3）有較多的分裂相； （4）染色體分散較好,小鼠骨髓細(xì)胞染色體制備與觀察,17,細(xì)胞密度,小鼠骨髓細(xì)胞染色體制備與觀察,18,染色體分散度,小鼠骨髓細(xì)胞染色體制備與觀察,19,2.染色體形態(tài)特征觀察,小鼠骨髓細(xì)胞染色體制備與觀察,20,3.染色體計(jì)數(shù),10010,15,16,9,9+16+15=40,10,8,22,22+8+10=40,小鼠骨髓細(xì)胞染色體制備與觀察,21,4.細(xì)胞增殖指數(shù)統(tǒng)計(jì),細(xì)胞增殖指數(shù),100,小鼠骨髓細(xì)胞染色體制備與觀察,22,實(shí)驗(yàn)三 細(xì)胞器的觀察,一、中心體 二、高爾基體,小鼠骨髓細(xì)胞染色體制備與觀察,23,一、中心體（410,馬蛔蟲子宮橫切片全貌,小鼠骨髓細(xì)胞染色體制備與觀察,24,中心體（1010,小鼠骨髓細(xì)胞染色體制備與觀察,25,中心體（4010,小鼠骨髓細(xì)胞染色體制備與觀察,26,二、高爾基體（410,脊神經(jīng)節(jié)切片,小鼠骨髓細(xì)胞染色體制備與觀察,27,高爾基體（1010,小鼠骨髓細(xì)胞染色體制備與觀察,28,高爾基體（4010,小鼠骨髓細(xì)胞染