細(xì)胞培養(yǎng)基本方法_第1頁
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細(xì)胞培養(yǎng)基本方法_第4頁
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文檔簡介

1、1.操作臺(tái)基本要求：2. 隨著傳代次數(shù)的增加，連續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞系遺傳物質(zhì)不穩(wěn)定，不得將細(xì)胞存放于-20或-80冰柜中，因?yàn)榧?xì)胞存在次低溫條件下活力迅速降低。3.細(xì)胞污染：（1）細(xì)菌污染（2）酵母污染（3）霉菌污染初期PH值維持穩(wěn)定，污染嚴(yán)重后PH值迅速升高，導(dǎo)致培養(yǎng)基渾濁。（4）病毒污染一般不會(huì)對與其宿主物種不同的細(xì)胞培養(yǎng)物造成不良影響，通過電子顯微鏡檢查、一組抗體的免疫染色，ELISA實(shí)驗(yàn)或者采用適當(dāng)病毒引物的PCR技術(shù)可以檢測出細(xì)胞為病毒污染。（5）支原體污染唯一檢測支原體污染的方法是采用熒光染色、ELISE、PCR、免疫染色、放射自顯影4.抗生素只能作為對付污染的最后手段而且只能短期使用，并

2、應(yīng)盡快撤出5適合貼壁的細(xì)胞和懸浮的細(xì)胞 6.基礎(chǔ)培養(yǎng)基，減血清培養(yǎng)基，無血清培養(yǎng)基7.PH值：大多數(shù)正常哺乳動(dòng)物細(xì)胞系PH為7.4； 成纖維細(xì)胞系適合輕度偏堿（pH7.4-7.7） Sf9和sf21等昆蟲細(xì)胞系最適合在PH值為6.2的環(huán)境中生長8.溫度：大多數(shù)人和哺乳動(dòng)物細(xì)胞系在36至37最佳昆蟲細(xì)胞在27為最佳禽類細(xì)胞在38.5最佳 冷血?jiǎng)游铮?5-26）9.動(dòng)物細(xì)胞形態(tài)劃分：l 成纖維細(xì)胞，貼附生長l 上皮樣細(xì)胞呈多角形，貼附l 淋巴母細(xì)胞樣細(xì)胞呈球形，不貼附l 特殊形態(tài)： I型有長突觸 型沒有軸突10.細(xì)胞增長模式11.何時(shí)傳代？l 哺乳動(dòng)物：生長的PH值通常表示乳酸儲(chǔ)積，且有毒性，當(dāng)PH迅速降低（）0.1-0.2PH單位），同時(shí)細(xì)胞濃度增大，則應(yīng)對細(xì)胞進(jìn)行傳代。l 昆蟲細(xì)胞PH值會(huì)上升但不超過6.412貼壁細(xì)胞的解離13.貼壁細(xì)胞的傳代 14.貼壁昆蟲細(xì)胞傳代：15.懸浮細(xì)胞傳代流程 16.細(xì)胞凍存：17.冷凍細(xì)胞

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