核酸提取試劑盒

1、核酸提取試劑盒,洛陽惠爾納米科技有限公司,狄光輝,試劑盒,試劑盒分類 核酸提取 磁珠法，離心柱法，DNA和RNA，不同樣本 蛋白檢測 elisa試劑盒，免疫共沉淀試劑盒，化學(xué)發(fā)光試劑盒，免疫組化試劑盒，放射免疫試劑盒，免疫熒光試劑盒 重金屬檢測 不同重金屬離子檢測，不同樣本中重金屬離子檢測 其他 PH檢測，污染氣體檢測等等,核酸提取試劑盒,核酸 核酸廣泛存在于所有動物、植物細(xì)胞、微生物內(nèi)、生物體內(nèi)核酸常與蛋白質(zhì)結(jié)合形成核蛋白。 根據(jù)化學(xué)組成不同，核酸可分為核糖核酸，簡稱RNA和脫氧核糖核酸，簡稱DNA。 DNA是儲存、復(fù)制和傳遞遺傳信息的主要物質(zhì)基礎(chǔ)。 RNA在蛋白質(zhì)合成過程中起著重要作用，其

2、中轉(zhuǎn)移核糖核酸，簡稱tRNA。 起著攜帶和轉(zhuǎn)移活化氨基酸的作用；信使核糖核酸，簡稱mRNA，是合成蛋白質(zhì)的模板。 核糖體的核糖核酸，簡稱rRNA，是細(xì)胞合成蛋白質(zhì)的主要場所。 核酸提取試劑盒 DNA提取試劑盒 RNA提取試劑盒,DNA提取方法,DNA提取方法 1.堿裂解法：堿裂解法是基于DNA的變性與復(fù)性差異而達(dá)到分離目的。 2.煮沸法：煮沸時將樣品中的DNA通過核酸裂解液的作用釋放出來，離心沉淀后將雜質(zhì)去除，上清液即可用作pcr擴(kuò)增。 3.濃鹽法：利用RNA和DNA在電解溶液中溶解度不同，將二者分離，常用的方法是用1M 氯化納提取,得到的DNP粘液與含有少量辛醇的 氯仿一起搖蕩,使乳化,再離

3、心除去蛋白質(zhì),此時蛋白質(zhì)凝膠停留在水相及氯仿相中間，而DNA位于上層水相中,用2倍體積95%乙醇可將DNA 鈉鹽沉淀出來,4.苯酚抽提法： 苯酚作為蛋白變性劑,同時抑制了DNase的降解作用.用苯酚處理勻漿液時,由于蛋白與DNA 聯(lián)結(jié)鍵已斷,蛋白分子表面又含有很多極性基團(tuán)與苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。離心分層后取出水層，多次重復(fù)操作，再合并含DNA 的水相，利用核酸不溶于醇的性質(zhì)，用乙醇沉淀DNA 。此時DNA是十分粘稠的物質(zhì)，可用玻璃漫漫繞成一團(tuán)，取出。此法的特點是使提取的DNA保持天然狀態(tài),DNA提取方法,5.水抽提法：利用核酸溶解于水的性質(zhì),將組織細(xì)胞破碎后,用低鹽

4、溶液除去RNA，然后將沉淀溶于水中，使DNA充分溶解于水中,離心后收集上清液.在上清中加入固體氯化鈉調(diào)節(jié)至2.6M.加入2倍體積95%乙醇,立即用攪拌法攪出.然后分別用66% ，80%和95%乙醇以及丙銅洗滌,最后在空氣中干燥,即得DNA樣品.此法提取的DNA中蛋白質(zhì)含量較高,故一般不用.為除蛋白可將此法加以改良,在提取過程中加入SDS。 6.陰離子去污劑法：用SDS或二甲苯酸鈉等去污劑使蛋白質(zhì)變性,可以直接從生物材料中提取DNA .由于細(xì)胞中DNA與蛋白質(zhì)之間常借靜電引力或配位鍵結(jié)合,因為陰離子去污劑能夠破壞這種價鍵,所以常用陰離子去污劑提取DNA,DNA提取方法,DNA提取方法,磁珠法：生

5、物磁珠是一種新型的功能化固體載體，其表面包被有活性基團(tuán)，可以與多種生物活性物質(zhì)發(fā)生偶聯(lián)，兼具有液體的流動性和固體磁性材料等特點，在外磁場的作用下可以定向移動和集中，當(dāng)撤去外磁場后，稍加振蕩或抽吸又可均勻分散于液體中，從而使固液相的分離變的十分快捷方便，通過簡單的洗脫可以得到純度很高的靶向物質(zhì),核酸提取試劑盒,離心柱子法 柱子 磁珠法 生物磁珠,離心柱試劑盒（細(xì)菌）概述,本試劑盒用于極大部分革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌細(xì)胞基因組DNA的提取。該試劑盒提供的方法簡單易行，通過去垢劑處理和特殊的液體系統(tǒng)將裂解細(xì)胞后產(chǎn)生的DNA結(jié)合在柱材上，避免酚仿抽提。所獲的基因組DNA具有完整性好、產(chǎn)量大、純度高和

6、穩(wěn)定性好等特點?？梢詽M足PCR、酶切、分子雜交和文庫構(gòu)建等各種分子生物學(xué)實驗需要,離心柱試劑盒組成,離心柱及收集管 各 xxx個 溶菌酶緩沖液 ELB xxxml 裂解液 GDL xxxml 緩沖液 GDB xxxml 蛋白洗滌液 PWB xxxml 洗滌液 WB xxxml 蛋白酶 K xxxml 洗脫液 EB xxxml,離心柱操作步驟,所有離心步驟皆使用臺式離心機(jī)，為室溫下操作。 第一次使用前請先參考試劑瓶上的標(biāo)簽，在洗滌液WB中加入無水乙醇。 1.取適量的細(xì)菌培養(yǎng)液（最多提取的細(xì)菌數(shù)量為2109個），10,000rpm離心1分鐘，棄上清，留細(xì)菌沉淀備用。 2.提取的細(xì)菌為革蘭氏陰性菌，

7、可以在菌體沉淀中加入200l裂解液GDL。用吸頭吹打幾下，充分混勻。然后進(jìn)入步驟4 3.提取的細(xì)菌為革蘭氏陽性菌，必須要進(jìn)行溶菌酶破壁處理（如不確定為何種菌屬，請按處理革蘭氏陽性菌的方法進(jìn)行）。具體操作如下：稱20mg溶菌酶，置于1.5ml離心管中，取1ml溶菌酶緩沖液ELB，反復(fù)吹打幾次將溶菌酶完全溶解，配制成溶菌酶裂解液。向細(xì)菌沉淀中加入200l溶菌酶裂解液（未用完的溶菌酶裂解液可保存于20，以備下次使用），吹打重懸細(xì)菌沉淀。37破壁處理30分鐘以上，一些較難處理的細(xì)菌可以延長處理時間。破壁處理完成后便可以將水浴溫度調(diào)至70備用。 4.RNA清除處理，補(bǔ)加5lRNaseA溶液，充分混勻。

8、5.加入15l蛋白酶K，充分混勻。 6.加入220l緩沖液GDB充分混勻。加入緩沖液GDB可能會出現(xiàn)白色沉淀，放置于70水浴時便會消失,離心柱操作步驟,7.對于革蘭氏陰性菌70保溫15分鐘（革蘭氏陽性菌需70保溫30分鐘）。等溶液變成清亮后，離心數(shù)秒去除管壁上的水珠。如果溶液未變清涼，說明細(xì)菌裂解不充分，起始菌量太大，需要適當(dāng)調(diào)整。 8.加入220l的無水乙醇，劇烈振蕩，充分混勻，此時可能會出現(xiàn)絮狀沉淀。 9.將離心柱裝在收集管上，然后將所得的溶液及沉淀都轉(zhuǎn)移入離心柱中。12,000rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的濾液。 10. 加入500l蛋白清洗液PWB，12,000rpm離心1分鐘。倒掉

9、收集管中的濾液。并將離心柱放回收集管中。 11. 加入500l洗滌液WB，12,000rpm離心30秒。（使用前請檢查是否已經(jīng)加入無水乙醇） 12. 重復(fù)步驟11的操作一次。 13. 12,000離心1分鐘，去掉離心柱中的所有液體。將離心柱放在一個干凈的新的1.5ml離心管中，置于37 烘箱放置510分鐘，待管中的乙醇全部揮發(fā)為止。 14. 往離心柱中央懸空滴加經(jīng)70水浴預(yù)熱的100-200l洗脫液EB。室溫放置2分鐘后，12,000rpm離心30秒，洗脫DNA到離心管中。為了得到更多的DNA，可以再加100200l洗脫液EB，室溫放置2分鐘后， 再次洗脫DNA。 15. 取10lDNA進(jìn)行0

10、.8瓊脂糖電泳檢測提取DNA的完整性和質(zhì)量,離心柱注意事項,1.起始菌量對DNA提取的產(chǎn)量和質(zhì)量有很大影響。起始菌量過多會引起細(xì)菌裂解不充分，導(dǎo)致堵塞離心 柱。一般情況下，LB液體培養(yǎng)基培養(yǎng)的大腸桿菌細(xì)菌在對數(shù)生長期中后期時的細(xì)菌濃度約為107108 個/ml之間。OD600在1.0時，大腸桿菌濃度大致為109個/ml。過夜（1216小時）培養(yǎng)細(xì)菌OD600值大約為2.0。不同細(xì)菌因菌株特性和培養(yǎng)條件差異會有很大差異，為了獲得準(zhǔn)確的計數(shù)，可以通過測定OD600值和稀釋法測定克隆形成單位(CFU)相結(jié)合的方法來確定。 2.確定所提細(xì)菌的歸屬關(guān)系也是一個重要的影響因素。革蘭氏染色（Gramstai

11、n）是細(xì)菌分類和鑒定的 重要性狀。它不僅能觀察到細(xì)菌的形態(tài)，而且還可將所有細(xì)菌區(qū)分為兩大類：染色反應(yīng)呈藍(lán)紫色的稱 為革蘭氏陽性細(xì)菌，用G+表示；染色反應(yīng)呈紅色的稱為革蘭氏陰性細(xì)菌，用G表示。細(xì)胞壁成分和結(jié) 構(gòu)的差異造成兩類細(xì)菌對革蘭氏染色的不同反應(yīng)。G+菌的細(xì)胞壁主要是由肽聚糖形成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)組成 的，在染色過程中，當(dāng)用乙醇處理時，由于脫水而引起網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)中的孔徑變小，通透性降低，使結(jié)晶 紫碘復(fù)合物被保留在細(xì)胞內(nèi)而不易脫色，故呈藍(lán)紫色；G細(xì)菌的細(xì)胞壁中肽聚糖含量低，而脂類物質(zhì) 含量高，當(dāng)用乙醇處理時，脂類物質(zhì)溶解，細(xì)胞壁的通透性增加，使結(jié)晶紫碘復(fù)合物易被乙醇抽出而 脫色，然后又被染上了復(fù)染液（番紅

12、）的顏色，故呈紅色,離心柱注意事項,3. 革蘭氏陽性細(xì)菌主要包含細(xì)菌中的厚壁菌門(Firmicutes)（低G+C革蘭氏陽性細(xì)菌）和放線菌門(Actinobacteria)（高G+C革蘭氏陽性細(xì)菌）。厚壁菌門包括的常見菌屬：歸類于芽孢桿菌綱(Bacilli)的芽孢桿菌(Bacillus)、李斯特氏菌(Listeria)、葡萄球菌(Staphylococcus)、鏈球菌(Streptococcus)和腸球菌(Enterococcus)；歸類于梭菌綱(Clostridia)的常見屬梭菌(Clostridium)和歸類于柔膜菌(Mollicutes)的支原體(Mycoplasma)。放線菌門常見菌屬

13、如放線菌(Actinobacteria)和雙歧桿菌(Bifidobacterium)。 4. RNase A配制：將稱好的RNase A完全溶于10mmol/L TrisHCl（pH7.5），0.15 mmol/L NaCl的溶液中，500l每管分裝到1.5ml離心管中。100煮10分鐘。然后冷卻至室溫，-20保存?zhèn)溆?洛陽惠爾核酸提取試劑盒產(chǎn)品,植物基因組DNA提取試劑盒 動物組織基因組DNA提取試劑盒 動物病毒（DNA/RNA）提取試劑盒 中草藥基因組DNA提取試劑盒 細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒 全血基因組DNA提取試劑盒 血清游離DNA提取試劑盒 快速質(zhì)粒DNA提取試劑盒 血清病毒（DN

14、A/RNA）提取試劑盒 海洋生物DNA提取試劑盒 磁珠法病毒（DNA/RNA）提取試劑盒 法醫(yī)樣本DNA提取試劑盒（骨骼、牙齒、指甲等） 法醫(yī)樣本DNA提取試劑盒（毛發(fā)、口腔拭子、血斑、精斑、煙蒂等） 禽類全血DNA提取試劑盒 真菌DNA提取試劑盒 PCR純化試劑盒,磁珠法試劑盒概述,磁珠法核酸提取試劑盒采用具有獨特分離作用的磁珠和緩沖液系統(tǒng)，從樣品中分離純化高質(zhì)量基因組DNA，特殊包被的磁珠，在一定條件下對目的DNA具有很強(qiáng)的親和力，而當(dāng)條件改變時，磁珠釋放吸附的DNA，能夠達(dá)到快速分離純化DNA的目的。整個過程不涉及有毒試劑，安全、便捷、提取的DNA純度高。使用本試劑盒純化的基因組DNA

15、(OD260-OD320)/(OD280-OD320)均在1.72.0之間，可以應(yīng)用到各類下游分子生物學(xué)實驗,磁珠法注意事項,1. Buffer B、Buffer C -20保存，反復(fù)凍融不超過3次。 2. Buffer B管中粉末狀固體，可能會掛到瓶壁或瓶蓋上，加入洗脫液溶解時，擰緊瓶蓋后，充分混勻。 3. Buffer A低溫儲存可能會出現(xiàn)白色絮狀漂浮物，使用前在恒溫水箱中溫育至白色沉淀完全溶解，不影響使用效果。 4. 磁珠使用前一定要充分混勻。 5. 如果下游實驗對RNA污染比較敏感，可在裂解時加1l RNaseA（10mg/ml）。 6. 如果是干材料，適當(dāng)延長裂解時間；種子用粉碎機(jī)打

16、成粉末狀使用，樣品為種子時，裂解時間為30min。 7. 如果同等取樣量下欲得到更多DNA可以增加洗脫次數(shù)（洗脫次數(shù)最好不要超過3次），也可以適當(dāng)延長裂解時間,磁珠法試劑盒,組成成分： 裂解液 結(jié)合液 洗滌液 洗脫液 生物磁珠 說明書,實驗步驟,裂解 結(jié)合 洗滌 洗脫 四步操作，簡單快速,步驟詳解,裂解 破壞細(xì)胞，把DNA釋放到溶液中 結(jié)合 把釋放出的DNA吸附到磁珠上 洗滌 把結(jié)合過程中吸附的雜質(zhì)除去 洗脫 把純凈的DNA從磁珠上解離下來,操作步驟（植物,1.裂解 取新鮮植物組織xxxmg，與研缽中稍加研磨。加入xxxl Buffer A、xxx l Buffer B、xxxl Buffer

17、 C，研磨均勻，然后轉(zhuǎn)移至1.5ml EP管中，混合均勻（可用漩渦振蕩器，xxxrpm）。然后把EP管置于恒溫水箱中xxx溫育xxxmin。 2.結(jié)合 將EP管從溫育設(shè)備中取出，xxxr離心xxxmin。取xxx l上清，加入振蕩混勻的磁珠xxxl、xxxl結(jié)合液(也可加入xxxl異丙醇，產(chǎn)量高于加結(jié)合液;但是提取雙子葉植物種子的核酸時，異丙醇的量為上清體積的xxx倍為宜)，顛倒混勻xxxmin。將EP管置于磁力架上進(jìn)行磁分離，吸棄廢液，（吸凈管蓋及管底殘液）。 3.洗滌 加入xxxl洗滌液，點振xxx次（若有團(tuán)狀或絲狀物可增加點振次數(shù)及力度），然后磁分離，吸凈管蓋及管底的殘液 加入xxxl洗滌液，點振xxx次（若有團(tuán)狀或絲狀物可增加點振次數(shù)及力度），然后磁分離，吸凈管蓋及管底的殘液 4.洗脫 加入xxxl洗脫液，緩慢抽吸混勻，xxx溫浴xxxmin。每隔xxxmin輕搖EP管幾下混勻。然后磁分離，小心吸取上清液至新的EP管中，進(jìn)行下游實驗,常見問題及處理,得率低,常見問題及處理,條帶彌散,常見問題及處理,洗脫液有顏色,磁珠法較離心柱的比較優(yōu)點,生物磁珠具有小尺寸效應(yīng)和表面效應(yīng)，可高效DNA提取，滿